棉铃虫对Bt杀虫蛋白抗性测定方法的研究

对饲料混合法 ,体重抑制率法 ,浸叶接虫法进行比较研究 ,结果表明 ,饲料混合法比较稳定 ,比较适宜作为抗性测定的方法。用饲料混合法测定比较不同龄期幼虫的测定结果 ,确定 2龄作供试幼虫为宜。比较不同处理天数下的生测结果 ,确定 Bt粉剂对 2龄幼虫的适宜处理时间为 5d,Cry1Ac为 14d。用改进稀饲料隔离饲养供试幼虫的方法后 ,得到理想的生测数据 ,生测时间延长到 14d,对照死亡率也能控制在 2 0 %以下。从我们 1998年对棉铃虫的抗性监测结果说明 ,尽管田间棉铃虫对 Bt ICP未达抗性水平 ,但对 Cry1Ac型蛋白敏感性已有降低 。

华北地区棉铃虫对Bt杀虫蛋白的抗性监测

采用 Bt可湿性粉剂标样和含单一 Bt杀虫蛋白 Cry A( c)的 MVPII水剂 ,研究改进了棉铃虫对 Bt杀虫蛋白的抗性测定方法。 1 996～ 1 998年进行华北地区棉铃虫对 Bt制剂的抗性监测 ,结果表明 ,河北省邱县、冀州市、山东省高密市、河南省西华县棉铃虫与敏感种群相比的抗性指数( RR)为 1 .3～ 5.3倍 ;用诊断剂量法测定 ,只在1 998年检测到山东高密棉铃虫的抗性个体频率为 0 .9% ,其余均为 0。 1 998年测定棉铃虫对Cry A( c)敏感性 ,与室内种群相比 ,河北邱县、冀州和山东高密棉铃虫种群对 Cry A( c)的相对 RR值分别为 4.9、3.9和 3.8倍 ,对 Bt粉剂的相对抗性指数 ( RR)分别为 1 .1、1 .4和 1 .6倍 ;用转 Bt基因棉叶直接测定 ,田间棉铃虫的死亡率降低 ,表明用 Cry A( c)进行测定与用转 Bt基因棉叶直接测定结果相关性较大。

抗Bt棉铃虫种群的交互抗性研究

分别用对 Cry1Ac抗性达 11.6倍的 Bt棉叶和 Bt粉剂 (Btk)汰选棉铃虫 (H elio-coverpa armigera)种群 (对 Btk的抗性指数为 5.2倍 ) ,测定了其对不同 Bt制剂、Bt毒素、化学农药的交互抗性。结果表明 :停止汰选后 ,Bt棉叶汰选种群对 Cry1Ac的抗性指数为 5.9倍 ,对Cry1Ac+1C的交互抗性为 3.7倍 ,对 Btk的敏感性降低 ,对 Bta、Cry2 A无交互抗性 ;Btk汰选种群对 Btk的抗性指数为 4 .1倍 ,对 Bta、Cry1Ac、Cry1Ac+1C的交互抗性为 2 .3、3.1、2 .3倍 ,对 Cry2 A无交互抗性 ;两汰选种群对化学农药灭多威、辛硫磷、氯氰菊酯的敏感性均有所增加。

中国棉铃虫核型多角体病毒不同基因型的虫体克隆

首次利用虫体克隆技术，对野生型中国棉铃虫核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶＷ）的不同基因型进行了分离纯化。以较低浓度的ＨａＳＮＰＶＷ感染三龄初中国棉铃虫幼虫，病毒致死幼虫单虫收集，分别提取相应的病毒核酸，进行限制性内切酶分析，得到了ＨａＳＮＰＶ的七个不同基因型（ＨａＳＮＰＶＧ１至Ｇ７），其ＥｃｏＲＩ酶切图谱均不相同。用ＢａｍＨＩ酶切分析，七个基因型的酶切图谱只在一个片段上有显著区别：Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４ＤＮＡ的ＢａｍＨＩｈ片段大小是３．３０ｋｂ，Ｇ５、Ｇ６的这一片段的大小为３．５ｋｂ，而Ｇ７的这一片段为２．７ｋｂ。结果表明，野生型ＨａＳＮＰＶ至少包含七个不同的基因型。

3个抗虫棉对棉铃虫抗性的研究

试验表明，抗虫棉华棉１０２、Ｒ９５－０７、Ｒ９５－０２对棉铃虫有较强的抗性。用Ｒ９５－０７、Ｒ９５－０２棉叶饲养棉铃虫和田间接虫试验低龄幼虫存活率与泗棉三号比较可降低３８．９％～５６．１％。

一种中红侧沟茧蜂畸形细胞分泌的寄生特异蛋白

SDS-PAGE电泳表明,黏虫Pseudaletia separa-ta、棉铃虫 Helicoverpa armigera、小地老虎 Agrotisypsilon的幼虫受中红侧沟茧蜂Microplitis mediator寄生后,血淋巴中都出现一个98.6 kDa的寄生特异蛋白(p98.6)。畸形细胞(teratocytes)的体外培养发现,p98.6是由来自中红侧沟茧蜂胚胎浆膜层的畸形细胞分泌的。这一结果将为研究寄生蜂的寄生生理和畸形细胞在协调寄生蜂和寄主关系中的作用打下基础。

隐蔽施药防治棉铃虫的研究

对泗棉三号进行隐蔽施药防治棉铃虫试验的结果表明，效果略高于或相近常规喷雾法。初步筛选以氧化乐果＋久效磷、或久效磷单独埋施效果最好。甲胺磷埋施经田间接虫和室内饲喂结果比不用药可降低棉铃虫存活率７４．８％和４８．２％。抗虫棉进行药剂埋施防效不明显。隐蔽施药对棉花生育无不良影响。

杆状病毒包涵体蛋白的共同抗原性

在比对已公布的37种杆状病毒包涵体蛋白氨基酸序列的基础上,选定棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)多角体蛋白的两个高度保守多肽(54-113aa和206-245aa)制备多克隆抗体,用Western blot法检测这两个高度保守多肽与多种杆状病毒包涵体蛋白之间的血清学关系.结果表明,HaNPV多角体蛋白的两个多肽的抗体与14种核型多角体病毒的多角体蛋白和5种颗粒体病毒的颗粒体蛋白均有明显的杂交信号,表明杆状病毒的包涵体蛋白之间具有共同的抗原决定簇.根据杆状病毒包涵体蛋白之间的这种血清学关系,进一步讨论了利用免疫金试纸技术检测病毒杀虫剂中包涵体含量的可行性.