伊曲康唑对人血管瘤内皮细胞增殖和凋亡的体外研究

目的 检测不同浓度的伊曲康唑对人血管瘤内皮细胞凋亡的影响,为伊曲康唑治疗血管瘤的机制研究提供依据。方法 体外培养的人血管瘤内皮细胞(HemECs)经不同浓度伊曲康唑干预不同时间后,倒置显微镜观察HemECs形态学变化;CCK-8法检测HemECs细胞抑制率;流式细胞术检测伊曲康唑诱导HemECs的凋亡率。结果 当伊曲康唑浓度≥30μg/mL时,作用效果逐渐显著,浓度与细胞凋亡呈正相关性,各浓度的抑制率和空白组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。伊曲康唑干预时间与对HemECs细胞增殖的抑制和凋亡呈正相关。结论伊曲康唑能抑制HemECs增值有抑制作用,并促进其凋亡。浓度越高,干预时间越长对HemECs的细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的促进作用会越显著。浓度≥30μg/mL时,效果会逐渐显著,与细胞凋亡和抑制细胞增殖呈正相关性,24 h为较为适宜的干预时间。

等离子体激活液对血管瘤内皮细胞增殖与凋亡作用及相关机制

目的观察等离子体激活液(PAS)对血管瘤内皮细胞(HemECs)的增殖和凋亡作用,并对相关机制进行探讨。方法低温等离子体(CAP)分别辐照磷酸盐缓冲液(PBS)10、20、30、40、50 s形成PAS,以处理时间为0 s的PBS为对照组。电子pH计和试剂盒分别检测PAS的pH值和活性介质浓度;CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光标记细胞内活性氧(ROS)变化;蛋白免疫印迹检测细胞中蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白的表达量。结果与对照组相比,PAS中的pH值呈剂量依赖性降低,而溶液中的活性介质NO_(3)^(-)、H_(2)O_(2)和O_(3)的浓度逐渐升高;与对照组相比,PAS显著提高了HemECs细胞内ROS水平,抑制其增殖,并促进凋亡;与对照组相比,PAS处理10 s时AKT的磷酸化水平变化不明显,但在CAP处理时间增加至20~50 s后,AKT的磷酸化水平迅速降低,而PI3K磷酸化水平变化不明显。结论PAS对HemECs细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,这种作用与细胞内ROS的升高和AKT磷酸化水平的下调相关。

利用RNAi技术下调VEGF表达对血管瘤内皮细胞的影响

目的:培养人血管瘤内皮细胞(HemECs),利用RNA干扰技术下调HemECs中VEGF的表达,观察其对血管瘤内皮细胞的影响。方法:利用组织块法培养HemECs,鉴定、筛选和纯化后,分为A、B、C三组,分别为转染组、空脂质体组和对照组。利用脂质体法将pGCsi U6/Neo/dsRED-VEGF真核表达质粒转染到内皮细胞中。通过荧光显微镜大体观察转染效率和细胞生长情况、ELISA法检测细胞分泌VEGF蛋白和MTT法检测质粒转染对HemECs的影响。结果:转染组第五天转染细胞达到总细胞80%以上,但是细胞凋亡逐渐增加。第七天细胞稀少,漂浮死细胞增多。转染阳性细胞减少,细胞整体状态差。转染组培养上清中VEGF蛋白浓度在转染的第1、3、5、7天分别为141.3±7.82、92.34±5.71、68.07±5.95及40.65±6.71pg/ml。MTT法检测各组490nm的OD值在1、3、5、7天均有统计学差异(P<0.05)。结论:转染后的细胞活性降低,通过对其分泌的VEGF蛋白的测量发现,转染组VEGF蛋白明显下降,同时,细胞活力受到影响,漂浮的死细胞增多。这些都可以说明,VEGF在血管瘤内皮细胞生长、增殖之中起着非常重要的作用,这也为我们治疗血管瘤提供一个新的靶点。

柠檬苦素调控Tiam1基因表达影响人体血管瘤内皮细胞VEGF/VEGFR2通路及诱导其凋亡的机制研究

目的:研究柠檬苦素Toonaciliatin A对血管瘤内皮细胞(HemEC)增殖、凋亡的影响及潜在作用机制。方法:胶原蛋白酶A分离HemEC细胞,MTT法测定不同浓度Toonaciliatin A对HemEC细胞生存率的影响,流式细胞术测定HemEC细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达,qRT-PCR检测RNA的表达。结果:Toonaciliatin A能够抑制HemEC增殖,促进HemEC细胞凋亡;Toonaciliatin A抑制Tiam1蛋白表达,过表达Tiam1逆转了Toonaciliatin A对HemEC的抑制作用;Toonaciliatin A能够抑制VEGF和VEGFR2蛋白表达,过表达Tiam1逆转了Toonaciliatin A对VEGF和VEGFR2蛋白表达的抑制作用。结论:柠檬苦素类似物Toonaciliatin A通过靶向Tiam1基因抑制VEGF/VEGFR2通路抑制HemEC细胞增殖,促进细胞凋亡。

上调miR-378a-3p对血管瘤内皮细胞生长和侵袭能力的影响

目的探讨微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)对血管瘤内皮细胞(HemECs)增殖、侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法HemECs细胞随机分为对照组、miR-NC组及miR-378a-3p组;对照组为常规培养HemECs细胞,miR-NC组和miR-378a-3p组HemECs细胞分别在脂质体(Lipofectamine RNAIMAX)的介导下转染阴性对照以及miR-378a-3p模拟物。荧光定量PCR(qPCR)检测miR-378a-3p的表达量,细胞计数(CCK-8)检测各组细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移;在线数据库TargetScan预测以及双荧光素酶报告基因验证miR-378a-3p与驱动蛋白超家族2A(KIF2A)的靶向关系。结果与对照组相比,miR-378a-3p模拟物能明显上调HemECs细胞中miR-378a-3p的表达量(P<0.05);上调miR-378a-3p的表达量抑制HemECs细胞增殖,降低其侵袭、迁移的能力(P<0.05);KIF2A是miR-378a-3p下游靶基因之一。结论miR-378a-3p可能通过靶向KIF2A抑制HemECs细胞的增殖、侵袭及迁移。

紫草素对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、迁移及成血管的影响

目的:探讨紫草素(shikonin,SKN)对血管瘤内皮细胞(hemangioma endothelial cell,HemEC)增殖、凋亡、迁移和血管生成的影响。方法:采用CCK-8及EdU实验,检测SKN对HemEC细胞增殖的影响。流式细胞术检测SKN对HemEC细胞凋亡的影响,采用细胞划痕实验检测SKN对HemEC细胞迁移能力的影响,通过管腔形成实验检测SKN对HemEC细胞血管生成能力的影响。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:SKN抑制HemEC细胞增殖(P<0.001),促进其凋亡(P<0.001),呈浓度依赖性。SKN抑制HemEC细胞迁移(P<0.01)和血管生成能力(P<0.001)。结论:SKN抑制HemEC细胞增殖、迁移和血管生成,并促进其凋亡。