溶血素 E基因原核表达载体的构建与蛋白诱导表达

目的构建大肠杆菌(Escherichia Coli,E.coli)溶血素E(Hemolysin E)基因的重组质粒pCZN1-hlyE,诱导表达目的蛋白。方法通过NCBI数据库检索获取E.coli Hemolysin E基因序列(NC_000913.3),采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的全基因合成法,设计全长拼接引物,合成目的基因,并成功构建重组质粒pCZN1-hlyE。将构建好的pCZN1-hlyE重组质粒转入大肠杆菌TOP10菌株中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Hemolysin E基因的表达,生成Hemolysin E毒力蛋白。结果经SDS-PAGE凝胶电泳,Western blot分析鉴定目的蛋白Hemolysin E分子量为28.72 kDa,与Hemolysin E基因核酸序列经DNAMAN软件分析所得蛋白分子量一致。结论被诱导表达的Hemolysin E蛋白存在于菌体裂解液上清中,并纯化制备重组蛋白。

墨旱莲乙酸乙酯总提物对正常小鼠免疫功能的影响

目的 研究墨旱莲乙酸乙酯总提物 (EAEEP)对小鼠免疫功能的影响。方法 以大、中、小 3个剂量给药 ,考察 EAEEP对小鼠免疫脏器系数、碳粒廓清指数、迟发性变态反应、血清溶血素及脾抗体形成细胞等指标的影响。结果 EAEEP可显著降低小鼠的脾指数及碳粒廓清指数 ,抑制迟发性过敏反应 ,降低溶血素水平。EAEEP可显著提高小鼠的胸腺指数 ,对脾细胞抗体形成功能无显著影响。

用PCR-ICT方法检测肠出血性大肠杆菌O157

目的初步建立肠出血性大肠杆菌O157的聚合酶链式反应-免疫层析检测(PCR-ICT)技术。方法根据肠出血性大肠杆菌O157的溶血性基因(hlyAB)序列设计特异性引物和探针,并分别经生物素和地高辛标记,用胶体金免疫层析技术检测PCR扩增产物。结果用建立的PCR-ICT方法检测5株O157H7血清型大肠杆菌均得到阳性结果,检测5株非O157血清型普通大肠杆菌和5株其他肠杆菌菌株均得到阴性结果,检测冻虾仁、冻贝肉、冻鸡肉、冻猪肉等出口食品样品43份,未检出肠出血性大肠杆菌O157,与PCR-凝胶电泳和分离培养法检测结果一致。结论用金标免疫层析方法检测PCR产物,其灵敏度基本与电泳法相当。初步应用表明PCR-ICT方法简便具有快速、易操作、检测时间短、简便等特点。

LBP-D单用及与降糖药联合应用对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和免疫功能的影响

采用四氧嘧啶静脉注射（１００ｍｇ／ｋｇ）诱导的糖尿病小鼠模型，观察枸杞多糖－Ｄ（ＬＢＰ－Ｄ）单独及与降糖药联合应用对小鼠血糖和免疫功能的影响．研究表明，小鼠在注射四氧嘧啶后７２ｈ，ｉｇ给药，连续１０ｄ，可使糖尿病小鼠血糖明显降低，而且ＬＢＰ－Ｄ与降糖药（优降糖和二甲双胍）有联合降血糖作用；此外，ＬＢＰ－Ｄ可明显提高小鼠溶血素水平及调节Ｔ细胞亚群的功能，使四氧嘧啶糖尿病小鼠免疫功能接近正常．研究结果显示，ＬＢＰ－Ｄ对糖尿病小鼠的胰岛β细胞可能有保护作用。