感音神经性耳聋患者外周血miR-34c、miR-29b的表达及意义

目的探讨感音神经性耳聋(SNHL)患者外周血miR-34c、miR-29b的表达情况及临床意义。方法筛选2020年6月至2023年6月我院收治的神经性耳聋患者140例为观察组,同期选取体检健康者40例为对照组。根据听力损伤情况将SNHL患者分为轻度耳聋组63例,中度耳聋组42例,重度耳聋组35例。采用qRT-PCR检测miR-34c、miR-29b的表达,并检测VEGF、氧化应激水平(TAC、SOD、MDA)、NO和Cx26;采用Pearson检验进行相关性分析,采用logistic回归分析SNHL病情严重程度的独立危险因素,采用ROC曲线评估miR-34c、miR-29b对SNHL患者病情严重程度的预测价值。结果4组NO、TAC、SOD、Cx26水平比较,重度耳聋组<中度耳聋组<轻度耳聋组<对照组(P<0.05);VEGF和MDA水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。4组miR-34c mRNA和miR-29b mRNA表达水平比较,重度耳聋组>中度耳聋组>轻度耳聋组>对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,SNHL患者外周血miR-34c、miR-29b与VEGF、MDA呈正相关,与NO、TAC、SOD、Cx26呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,VEGF、MDA、NO、Cx26、TAC、SOD、miR-34c、miR-29b是影响SNHL病情严重程度的独立因素。结论miR-34c、miR-29b在SNHL患者中过表达,可作为预测评估SNHL患者病情严重程度的血清标志物。

miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

背景:目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的:探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法:选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组,通过Real-time PCR法检测PLCD3和miR-34a-5p表达的关系;通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响;使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平;使用ELISA法检测炎症因子的表达。结果与结论:①PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标,同时PLCD3和miR-34a-5p表达水平呈负相关。②PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移,而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移;miR-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高,而PLCD3过表达则表现出相反趋势。③PLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达,而miR-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明,miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。

血浆miR-320c、miR-126及miR-34c联合检测对慢性阻塞性肺疾病严重程度的预测价值

目的探讨血浆miRNA水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)严重程度的相关性。方法利用荧光定量PCR(qPCR)检测健康人群(10例)及COPD患者(10例)血浆miRNA的表达水平,筛选与COPD患者密切相关的miRNA。进一步在健康人群(28例)和COPD慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)Ⅰ级(30例)、Ⅱ级(32例)、Ⅲ级(30例)及Ⅳ级(28例)患者中明确候选miRNA单独及联合检测对COPD严重程度的预测价值。结果COPD患者血浆miR-320c、miR-126及miR-34c水平显著高于健康人群(P<0.01)。随着COPD级别的增加,血浆miR-320c、miR-126及miR-34c的表达水平亦增加。miR-320c、miR-126、miR-34c单独及联合检测预测中重度COPD患者的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.822、0.705、0.783及0.892。结论血浆miR-320c、miR-126及miR-34c可预测COPD严重程度,其联合检测的预测效能显著高于单项miRNA。

EBV下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移的作用及机制研究

目的:探究爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)下调miR-34c促进鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。方法:采用qPCR检测EBV阴性鼻咽癌SUNE1、CNE2、HK1细胞和EBV阳性C666-1细胞中miR-34c表达水平。构建miR-34c模拟物以分析miR-34c对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。使用CCK-8、划痕愈合试验以及Transwell细胞侵袭试验检测鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Western blotting测定细胞中迁移、侵袭相关蛋白以及Erk1/2信号通路蛋白的表达水平。结果:miR-34c在EBV阳性C666-1细胞表达下调(P<0.05)。CCK-8结果显示,miR-34c组C666-1细胞在16、24、48 h的活力明显低于EBV组(P<0.01)。划痕试验和Transwell试验结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭能力均明显增强(P<0.01)。Western blotting结果显示,与miR-34c组比较,EBV组C666-1细胞迁移和侵袭相关蛋白Vimentin、Snail、MMP-2、MMP-3及Erk1、Erk2蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论:miR-34c在EBV阳性鼻咽癌细中表达下调,EBV下调miR-34c可增强鼻咽癌细胞增殖、侵袭和迁移能力及激活Erk1/2信号通路。

依达拉奉右莰醇联合丹红治疗急性脑梗死患者效果及对血液流变学与miR-34c的影响

目的:研究依达拉奉右莰醇联合丹红注射液治疗急性脑梗死(ACI)患者的临床效果及对患者血液流变学与血清miR-34c水平的影响。方法:选取2021年8月—2023年2月104例入住在赣南医科大学第三附属医院的ACI患者作为研究对象,随机分为单一组和联合组。两组均进行常规治疗,在此基础上,单一组给予丹红注射液治疗,联合组给予依达拉奉右莰醇联合丹红注射液治疗,两组均治疗2周。观察患者治疗后临床疗效、治疗前后的神经功能、日常生活能力、血液流变学各指标和不良反应,抽取血样检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和miR-34c水平的变化。结果:治疗后联合组总有效率为90.38%,明显高于单一组的75.00%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。治疗1、2周后,两组NIHSS评分、血液流变学各指标和hs-CRP水平均明显降低,且联合组均显著低于单一组(P<0.05);而Barthel指数评分、血清SOD和miR-34c水平均明显升高,且联合组均显著高于单一组(P<0.05)。两组的不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:使用达拉奉右莰醇联合丹红注射液治疗ACI患者可以增强治疗效果和日常生活能力,改善患者的神经功能和血液流变学参数,并且能够提高血清miR-34c水平以抑制炎症反应。

心肌梗死患者血清miR-34a-5p和C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-9水平及其与心肌重构的相关性

目的探讨心肌梗死患者血清微小RNA(miR)-34a-5p、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-9(CTRP9)水平及其与心肌重构的相关性。方法选取2019年3月至2021年3月于该院治疗的急性心肌梗死患者100例作为观察组,另选取同期在该院体检的健康体检者100例作为对照组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清中miR-34a-5p水平;采用酶联免疫吸附试验检测血清中CTRP9水平;通过心脏彩色超声诊断仪检测心肌重构指标[左心房内径(LAD)、左心室重构指数(LVRI)、左心室质量指数(LVMI)、左心室后壁厚度(LVPW)];采用Pearson相关分析血清miR-34a-5p与CTRP9的相关性及二者与心肌重构指标的相关性;采用多因素Logistic回归分析急性心肌梗死发生的影响因素。结果与对照组相比,观察组血清miR-34a-5p水平、LVPW、LVMI、LAD均明显增加(P<0.05),CTRP9水平、LVRI均明显降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,miR-34a-5p与CTRP9、LVRI呈负相关(r=-0.572、-0.645,P<0.05),与LVPW、LVMI、LAD呈正相关(r=0.418、0.420、0.569,P<0.05);CTRP9与LVRI呈正相关(r=0.424,P<0.05),与LVPW、LVMI、LAD均呈负相关(r=-0.583、-0.469、-0.518,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-34a-5p水平、LVPW、LVMI、LAD、LVRI、CTRP9水平均是急性心肌梗死发生的影响因素(P<0.05)。结论在急性心肌梗死患者血清中miR-34a-5p水平明显增加,CTRP9水平明显降低,二者呈负相关,且与心肌重构密切相关,是急性心肌梗死发生的影响因素。

UVB诱导下早衰人皮肤成纤维细胞中miR-34c及SIRT1表达的研究

目的:运用反复亚毒性剂量紫外线B(ultraviolet B,UVB)辐射人皮肤成纤维细胞,构建应激诱导早衰(stress-inducedpremature senescence,SIPS)模型,观察衰老相关生物学标志、衰老相关基因信号分子p53、p21、p16、沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin1,SIRT1)以及miR-34c的表达情况。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞,予连续5次、每次剂量10 mJ/cm2的UVB辐射,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞,流式细胞术检测细胞周期阻滞情况,实时荧光定量PCR检测miR-34c及衰老相关基因p53、p21、p16、SIRT1 mRNA表达水平变化,Western blot检测p53、p21、p16及SIRT1蛋白水平表达。结果:与对照组相比,SIPS组细胞SA-β-Gal染色呈强阳性[对照组(8.13±1.92)%,SIPS组(94.72±2.08)%,P<0.05];多数细胞阻滞于G1期[对照组(52.96±1.76)%,SIPS组(77.31±2.05)%,P<0.05];另外,实时荧光定量PCR显示miR-34c mRNA的表达升高(miR-34c-3p、miR-34c-5p分别为对照组0.93±0.09、1.03±0.03,SIPS组2.08±0.19、12.28±1.64,P<0.05);衰老相关基因p53、p21、p16、SIRT1 mRNA的表达亦升高(对照组分别为0.74±0.23、1.06±0.23、0.86±0.13、0.74±0.25;SIPS组分别为1.84±0.55、20.25±2.34、16.7±3.94、2.15±0.22,P<0.05);Western bolt表明p53、p21、p16及SIRT1蛋白水平表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-34c在反复多次亚毒性剂量UVB辐射人皮肤成纤维细胞后表达升高,对p53起正反馈调节作用,而SIRT1并未受miR-34c的抑制。

miR-34c在急性脑梗死患者血清中的表达

目的研究miR-34c在急性脑梗死患者外周血中表达水平,评估及对急性脑梗死患者炎症反应和神经功能缺损程度的价值。方法以20例急性脑梗死患者作为梗死组,同时选取20例健康体检者作为正常组,通过对两组研究对象外周血miR-34c表达水平及与尿酸,LDL-C,C反应蛋白和入院时神经功能缺损程度进行比较,评价miR-34c的临床意义。结果和正常组对比,梗死组外周血炎症反应指标尿酸、LDL-C、C反应蛋白具有统计学差异(P<0.05),此外,miR-34c在梗死组外周血表达水平较正常组显著下降(P<0.05);而且miR-34c与尿酸,LDL-C,C反应蛋白,入院时神经功能缺损程度均为负相关关系(P<0.05)。结论急性脑梗死患者外周血miR-34c表达水平变化可以作为评估炎症反应和神经功能缺损程度的重要指标。

miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达及临床意义

目的研究miR-9和miR-34c在老年痴呆患者血清中的表达水平,分析其对老年痴呆的诊断价值。方法以本院接收诊治的73例老年痴呆患者为研究对象,同时选取70例将健康体检者作为正常组,采用RTq PCR检测所有研究者血清中miR-9和miR-34c的水平,采用临床痴呆评定量表(CDR)对老年痴呆患者进行认知能力评分,观察其诊断老年痴呆的灵敏度与特异度。结果与正常组相比,老年痴呆患者血清HDL-C、LDL-C、Hcy、ANP水平以及MMSE评分方面均差异显著(P <0. 05),miR-9表达水平明显下降(P <0. 01),miR-34c表达水平明显上升(P <0. 01)。依据CDR评分,痴呆程度越严重,miR-9水平越低,miR-34c水平越高。老年痴呆患者血清中miR-9与LDL-C和Hcy水平均呈负相关,与HDL-C、ANP水平以及MMSE评分均呈正相关; miR-34c与血清LDL-C和Hcy水平均呈正相关,与HDL-C、ANP水平以及MMSE评分均呈负相关。ROC分析表明,miR-9和miR-34c的AUC面积分别为0. 811、0. 819;敏感度分别为89. 58%、91. 67%;特异度分别为80. 00%、71. 11%;截断值分别为0. 87、1. 14。结论老年痴呆患者血清miR-9表达下调,而miR-34c表达上调,二者异常表达均与老年呆发生及发展过程有关,可作为临床诊断和病情监测的重要指标。

miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的:研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法:用hsa-miR-34c mimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果:细胞转染率为81.16%。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加(P<0.05)。结论:miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。

河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌遗传易感性及预后的关系

目的:探讨河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌(CRC)遗传易感性及预后的关系。方法:收集180例CRC患者术前及180例体检健康者(对照)空腹静脉血,采用PCR-RFLP法分析mir-34b/c基因启动子区rs4938723多态性;采用Kaplan-Meier法针对不同基因型患者绘制生存曲线并进行log-rank检验,采用Cox回归模型分析rs4938723多态性与CRC预后的关系。结果:CRC组C等位基因频率高于对照组(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,TT基因型与TC+CC基因型患者生存曲线差异有统计学意义(P<0.05),TC+CC基因型患者生存状况差于TT型患者。Cox回归分析结果显示,与TT基因型比较,TC、CC基因型是CRC预后不良的危险因素,HR(95%CI)分别为1.284(1.035~1.593)、2.042(1.415~2.946)。结论:mir-34b/c基因rs4938723多态性与河南汉族人群CRC遗传易感性及预后关系密切。

MiR-34c在奶山羊雄性生殖干细胞增殖分化中的作用

microRNA(miRNA)在奶山羊雄性生殖细胞和精子发生过程有重要的调控功能。为研究miR-34c对雄性生殖干细胞增殖与分化中的作用,本文利用视黄酸效应基因8(Stra8)在雄性生殖细胞中随年龄增长,以其表达量上调的表达特征为指针,使用实时定量PCR技术筛选分析miRNAs。结果发现,miR-34c与Stra8的表达规律基本一致。在无精症奶山羊的睾丸组织中,发现miR-34c在无精症奶山羊睾丸组织中表达缺失。利用miR-34c模拟物及抑制剂转染奶山羊雄性生殖干细胞,体外转染miR-34c模拟物及其抑制剂,发现miR-34c能够下调Rarg、Stra8与c-Myc基因的表达,减缓奶山羊雄性生殖干细胞的增殖。结果提示,miR-34c可能具有调控奶山羊雄性生殖干细胞的减数分裂的作用,同时抑制其增殖。

MiR-34a通过抑制Pgc-1β和线粒体生成促进小鼠骨骼肌脂肪异位沉积

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1β(peroxisome proliferative activated receptorγcoactivator-1β,Pgc-1β)与线粒体生成相关。已有研究证明,miR-34a在肝组织脂肪异位沉积中发挥重要作用,但是否与骨骼肌的脂肪异位沉积相关尚不清楚。本研究以C57Bl/6J小鼠为研究对象,通过尾静脉注射miR-34a模拟物,探讨miR-34a过表达对小鼠骨骼肌脂肪沉积的影响。组织切片进行油红O染色及甘油三酯含量测定揭示,miR-34a过表达的小鼠骨骼肌组织中脂滴积累及甘油三酯含量显著增加。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)显示,与对照鼠比较,miR-34a处理的小鼠骨骼肌组织中的脂肪酸合成酶(Fas)表达显著上调,而脂肪酸氧化分解相关基因产物肉毒碱棕榈酰基转移酶1α(Cpt 1α)表达显著下调,提示miR-34a调控骨骼肌内脂肪的沉积机制可能是通过促进脂肪酸生成和抑制脂肪酸分解实现的。qRT-PCR和Western印迹证明,miR-34a可抑制Pgc-1β蛋白的表达。CoxⅡ/28S比例(线粒体定量指标)测定提示,注射miR-34a模拟物导致小鼠骨骼肌线粒体数目显著下调。生物信息分析显示,Pgc-1βmRNA的3'-UTR存在miR-34a的潜在识别位点,因此miR-34a可能通过靶向识别Pgc-1β的3'-UTR抑制Pgc-1β表达,从而抑制线粒体生成。上述结果证明,miR-34a能通过靶向抑制PGC-1β表达,抑制线粒体生成,继而减少脂肪酸氧化分解,导致骨骼肌脂肪沉积增加。此外,上调脂肪酸合成酶也可能是miR-34a导致骨骼肌脂肪沉积增加的另一原因,其作用机制需进一步研究。

miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉上皮纤毛细胞分化的影响

目的探讨miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)鼻上皮纤毛细胞分化的影响及其调控机制。方法获取正常对照及CRSwNP患者的鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c的表达,免疫细胞化学检测纤毛细胞数量。建立鼻上皮细胞气液界面培养体系,敲低表达miR-34c后免疫荧光检测纤毛标记物β-tubulinⅣ的表达。采用IL-13刺激鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c和纤毛发生转录因子FOXJ1的表达。结果与正常对照鼻上皮细胞相比,CRSwNP鼻上皮中miR-34c表达量降低(正常对照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56,P<0.05),纤毛细胞百分比也有明显下调(正常对照18.20%±2.52%vs CRSwNP 12.58%±2.06%,P<0.05)。在鼻上皮细胞中敲低表达miR-34c后,纤毛细胞数量明显降低。IL-13刺激可以明显降低miR-34c(刺激前5.85±4.54 vs刺激后0.43±0.40,P<0.05)和FOXJ1(刺激前1.41±1.09 vs刺激后0.15±0.19,P<0.05)的表达量。结论IL-13可以通过调控miR-34c表达进而调控纤毛细胞分化,从而参与CRSwNP黏液纤毛功能障碍。

膀胱移行细胞癌中miR-34c的表达及其临床意义

【目的】探讨MicroRNA-34c(miR-34c)在膀胱移行细胞癌中的表达及其在膀胱癌发生、发展中的意义。【方法】运用荧光定量real-time PCR检测miR-34c在膀胱癌组织中及癌周非瘤组织的表达水平,采用2-△△Ct算法计算膀胱癌组织与癌周非瘤组织中miR-34c表达量的比值,结合术后病理参数,运用统计学方法分析miR-34c与临床病理资料之间的相关性。【结果】在人膀胱癌组织中发现miR-34c较其相应周围非瘤组织明显低表达。在26例膀胱癌组织中,16例(61.9%)miR-34c显著低表达。miR-34c的低表达与肿瘤大小和恶性程度显著相关。肿瘤越大、恶性程度越高,miR-34c的表达量越低。【结论】低表达miR-34c可能是膀胱移行细胞癌组织的重要特征,并参与膀胱癌的生物学进程,可能对膀胱癌的诊断及防治提供新的思路。

miR-34c在哺乳动物生殖发育过程中的功能探讨

miRNA是对基因转录后调控有重要作用的非编码RNA,其中miR-34c被证实在哺乳动物精卵都有表达,且在精子成熟及合子卵裂中有重要作用,其已有报道的作用靶点如Bcl-2、Fox O3a、Myc、TGIF2和Notch2多与细胞凋亡或与哺乳动物繁殖性状相关。本文拟就miR-34c在哺乳动物生殖发育中可能的生物学功能进行探讨。

Mmu-miR-34c慢病毒表达载体构建及在奶山羊雄性生殖干细胞的表达

【目的】用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体,并包装成慢病毒颗粒,为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案,为进一步研究miR-34c的作用奠定基础。【方法】从小鼠基因组中扩增miR-34c前体,分别插入pLL3.7的CMV启动子起始的GFP之后或U6启动子后,构建成载体pLL3.7-CMV-34c及pLL3.7-U6-34c。将重组慢病毒载体和包装质粒混合物转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,测定病毒滴度。感染293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞,用293T细胞与奶山羊雄性生殖干细胞的GFP表达程度测定转染效率,用定量PCR方法测定miR-34c的表达效率。【结果】重组质粒酶切及PCR分析及转化菌液测序,证明插入序列正确,qPCR检测显示:miR-34c的表达在慢病毒载体感染的293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞均显著上调。【结论】用pLL3.7慢病毒载体中的CMV和U6两种启动子均可经济高效地进行miR-34c超表达,且由U6启动子启动的miR-34c慢病毒表达载体可以成功高效感染关中奶山羊雄性生殖干细胞。

miR-34c抑制NLRP3炎性小体诱导的小胶质细胞焦亡机制研究

目的:探索miR-34c在调控NLRP3炎性小体激活caspase-1信号通路诱导小胶质细胞焦亡中的作用。方法:观察脂多糖(LPS)联合ATP激活小胶质细胞后,通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测LDH的释放,以判断小胶质细胞细胞膜的完整性;再对miR-34c转染后的小胶质细胞在LPS和ATP激活下,观察小胶质细胞细胞膜变化。采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)分别检测miR-34c转染后的小胶质细胞和未转染的小胶质细胞在LPS和ATP刺激下活力变化情况。采用蛋白免疫印迹分别检测LPS+ATP诱导的小胶质细胞(对照组)中和miR-34c转染后小胶质细胞(观察组)中的蛋白表达情况,如NLRP3炎性小体、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18。结果:LPS+ATP联合诱导下的小胶质细胞较正常的小胶质细胞,miR-34c表达减少(P<0.01);观察组小胶质细胞LDH释放水平较对照组下降(P<0.01);CCK-8测试细胞活力中,2组小胶质细胞除第1天活力差异无统计学意义(P>0.05)外,其他时间观察组均明显高于对照组(P<0.01);观察组中小胶质细胞中NLRP3炎性小体、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18生成较之对照组小胶质细胞中炎性小体相关因子减少(P<0.01)。结论:miR-34c可以抑制LPS+ATP诱导的小胶质细胞焦亡,可能通过降低NLRP3炎性小体活化及下游caspase-1依赖细胞焦亡信号通路关键蛋白表达有关。

肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及意义

目的探讨肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及其意义。方法将30例肾透明细胞癌手术患者的肾癌组织和癌旁正常组织标本按是否有淋巴结转移分为2组:A组15例为无淋巴结和(或)远处转移,B组15例为有淋巴结和(或)远处转移。提取各标本中的DNA,经甲基化处理后,用PCR的方法检测miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在2组肾癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。结果电泳结果显示,miRNA-34a和miR-34b/c基因成单一条带,其所处的位置及其在正常组织和癌组织中的甲基化情况符合前期的预计。miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态如下:A组肾癌组织中miR-34a 4例,占26.7%,miR-34b/c 15例,占100.0%,癌旁正常组织均为0;B组肾癌组织中miR-34a 13例,占86.7%,miR-34b/c 15例,占100.0%,癌旁正常组织均为0。miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高;伴有淋巴结转移的肾癌组织中,miR-34a基因CpG岛甲基化明显高于无淋巴结转移的肾癌组织(86.7%比26.7%,P<0.05)。结论 miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高,提示其与肾透明细胞癌的发生与进展有关,尤其是miR-34a基因CpG岛高甲基化与肾透明细胞癌的转移可能存在密切联系,有望成为指导肾透明细胞癌诊断、治疗及判断预后的新靶点。

miR-34c在大鼠局灶性脑缺血模型中的表达

目的通过检测miR-34c及其靶基因在大鼠局灶性脑缺血模型中的表达变化,初步探讨miR-34c及其靶基因在大鼠局灶性脑缺血中的作用。方法首先利用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型;然后利用qRT-PCR检测miR-34c在大鼠脑缺血不同时间点的表达变化;利用生物信息学方法预测miR-34c的可能靶基因;再利用RT-PCR和qRT-PCR方法检测靶基因在大鼠脑缺血不同时间点的表达变化。结果成功制备大鼠局灶性脑缺血模型;miR-34c在大鼠脑缺血模型中随着缺血时间的延长其表达呈下降趋势;靶基因Hspa1b、Cacna2d1、Sperping1、Cntn2在大鼠脑缺血模型中随着缺血时间的延长其表达呈明显上升趋势。结论 miR-34c通过靶基因在大鼠局灶性脑缺血损伤过程中起到重要的保护作用。