水黄皮素候选化学对照品制备及分析研究

目的:研究水黄皮素候选化学对照品的制备方法及其质量标准,为干花豆药材及其相关产品的质量控制奠定物质基础。方法:采用有机溶剂提取,快速硅胶柱色谱、重结晶和反相制备型高效液相色谱对水黄皮素进行分离纯化,通过波谱等确证化学结构,采用高效液相色谱法测定样品色谱纯度,炽灼残渣法测定灰分,以质量平衡法计算水黄皮素的含量。结果:水黄皮素候选化学对照品高效液相色谱纯度测定均值为98.33%,炽灼残渣测定均值为0.01%;以质量平衡法计算其含量为98.32%。结论:制备得到的高纯度水黄皮素对照品符合中药化学对照品技术要求,可作为中药材或中药复方制剂质量控制的标准品;建立的分析方法准确、可靠,为对照品质量控制提供科学依据。

峨眉千里光防控药剂的筛选及防治效果

采用盆栽法评价了12种除草剂对峨眉千里光(Senecio faberii Hems1)的防除效果及同一生境中非靶标杂草的安全性。结果表明,56%2甲4氯钠可溶性粉剂、48%麦草畏水剂、25%氟磺胺草醚水剂、30%二氯吡啶酸水剂、48%三氯吡氧乙酸乳油效果较好。进一步研究了该5种除草剂的田间防治效果,结果表明,30%二氯吡啶酸水剂和48%三氯吡氧乙酸乳油表现出很好的株防效和鲜重防效,对同一生境中其他非靶标杂草无影响。因此,该两种药剂可有效防除峨眉千里光,控制其危害和蔓延。

过量合成ALA转基因烟草叶片光合与叶绿素荧光特性的研究

以转酿酒酵母Hem1基因的转基因烟草和野生型植株为材料,用Li-6400光合测定仪和PAM-2100叶绿素荧光仪检测了2种烟草不同叶位叶片光合和荧光参数,并考察了它们的生长情况.结果表明:过量合成ALA的转基因烟草植株具有更强的光合能力,并伴随着气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr)提高.暗适应下转基因植株不同叶位叶片的初始荧光(Fo)没有明显差异,而野生型植株下部叶片F0明显升高;转基因植株最大荧光(Fm)、可变荧光(Fv)、PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)等参数均显著提高,特别是下部叶片表现得更为明显;在光照下,转基因植株PSⅡ有效光化学效率(Fv′/Fm′)和实际光化学效率(ΦPSⅡ)、荧光猝灭系数(qP)、电子传递速率(ETR)、光化学效率(Pc)以及进入PSⅡ反应中心的能量(Pc+Ex)普遍高于野生型,而天线热耗散能量(Hd)以及非光化学荧光猝灭系数(NPQ)等明显低于野生型,且这些差异在基部叶片中表现得尤为突出.可见,过量合成ALA有利于延长烟草叶片光合寿命,提高光化学能量转换效应和光合产物积累,从而促进植株生长.

光敏启动子控制的酵母Hem1基因在烟草中表达

拟南芥hemA1基因启动子是一种光响应型启动子,它控制着植物体内5-氨基乙酰丙酸(ALA)昼夜节律型合成.将该启动子与酿酒酵母Hem1基因构建的二价载体转入烟草中,获得转基因植株.以转二价基因的烟草T0代种子为材料,用不同浓度卡那霉素(Km)溶液浸种,结果显示,种子发芽率和子叶绿化率随着Km浓度升高而降低.将1 000 mg·L-1Km溶液中长出的162株抗性植株移植至盆钵中培养,GUS检测出的阳性比率为92%.用特异引物PCR法检测Km抗性-GUS阳性植株,发现含有拟南芥HemA1基因启动子的比率为92.5%,含有酿酒酵母Hem1基因的比率为88%,含有二价重组基因的比率为84.2%.RT-PCR检测表明,Hem1基因在黑暗中的表达量明显低于光照下,证明光敏启动子有效地控制了结构基因Hem1的表达.生理指标分析表明,与野生型相比,转基因植株ALA合成速率、叶绿素含量明显增加,叶绿素b/a比值提高.野生型植株基部叶片SPAD值显著降低,而转基因植株基部叶片SPAD值保持较高水平.以上结果说明,外源二价基因已经成功整合到烟草基因组中,并且能够在光照条件下过量表达,合成过量ALA.

冬凌草化学成分研究

对唇形科香茶菜属植物冬凌草进行化学成分研究,从其中分得7个化合物,经理化和波谱方法分别鉴定为:双冬凌草丁素(Ⅰ),(10Z,14Z)-9,16-二羰基-10,12,14-三烯-十八碳酸(Ⅱ),2′-乙酰氨基-3′-苯基丙基2-苯甲酰氨基-3-苯基丙酸酯(Ⅲ),α-香树脂醇(Ⅳ),β-香树脂醇(Ⅴ),2β-羟基齐墩酸(Ⅵ),2α-羟基乌索酸(Ⅶ)。其中化合物Ⅰ为一个新的对映-贝壳杉烷二萜二聚体,Ⅱ为新的高度不饱和脂肪酸,化合物Ⅲ和Ⅵ为首次从该属植物中得到,化合物Ⅴ为首次从该植物中得到。

香港远志提取物对拟阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响及机制

目的探讨香港远志提取物对拟阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的影响及机制。方法SD大鼠随机分4组:假手术组、模型组及治疗A、B组。双侧海马CA1区注射Aβ25～35建立拟AD大鼠模型,治疗组按设定方式给药,假手术组、模型组给1%吐温溶液。给药28d,Morris水迷宫方法测定大鼠学习记忆能力,定量分析海马区乙酰胆碱酯酶(AChE)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠的学习记忆能力、SOD活力显著降低,AchE活力、MDA含量显著增高(P<0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠的学习记忆能力、SOD活力显著增高,AchE活力、MDA含量显著降低(P<0.05,或P<0.01)。结论香港远志乙酸乙酯提取物,可有效改善拟AD大鼠学习和记忆功能障碍,作用机制可能与降低AchE活力、调节胆碱能系统平衡;降低MDA含量、增强SOD活力,减少氧自由基产生,缓解氧化应激损伤有关。

疏毛绣线菊的抗氧化活性研究

采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除[2,2-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法对疏毛绣线菊总抗氧化活性行评价,将测定结果与阳性对照药物二丁基羟基甲苯(BHT)进行比较。研究结果发现疏毛绣线菊正丁醇部位具有较强的清除DPPH自由基(IC50=42.2μg/mL)和还原Fe3+的能力(TEAC=1052.46μmol/g),乙酸乙酯部位清除ABTS自由基能力(IC50=6.4μg/mL)较好,但均弱于阳性对照药物BHT(IC50和TEAC值分别为23μg/mL、2.3μg/mL和1532.7μmol/g)。实验证明疏毛绣线菊正丁醇部位体外抗氧化活性较强。

瓜馥木中一种黄酮的NMR表征

采用1H、13C、DEPT(无畸变极化转移增益法)、1H-1H COSY(氢-氢化学位移相关谱)、1H-1H ROESY(氢-氢化学位移空间相关谱)、HSQC(异核单量子相关谱)、HMBC(异核多键相关谱)等多种NMR分析方法,对从瓜馥木中分离得到的5,6,7,8-四甲氧基黄酮的1H和13C NMR信号进行了全归属,特别是应用1H-1H ROESY空间相关谱和HMBC等平面相关谱相结合的分析方法,对该化合物中苯环上6个季碳信号进行了详细的分析.修正了文献中报道的结论,为其结构鉴定和构效关系的研究提供了重要依据.

近红外光谱技术测定山橿药材中水分的含量

目的:运用近红外光谱技术对山橿药材中水分含量进行快速测定。方法:利用近红外漫反射光谱法结合TQAnalyst 8.0软件,建立山橿药材中水分的定量分析模型.结果:建立的模型内部交叉验证决定系数(R2)为0.999 74、内部交叉验证均方差(RMSECV)为0.219、预测均方差(RMSEP)为0.259。结论:该方法快速、简便、结果准确,有望在中药体系中有更广泛的应用。

超临界二氧化碳萃取冬凌草中熊果酸的研究

研究了超临界CO2萃取(SCDE)冬凌草中熊果酸的工艺方法。确定了1 kg冬凌草SCDE的最佳工艺条件为:萃取压力20 MPa、粒度40目、温度40℃、CO2流量20 L/h、萃取时间3 h、夹带剂95%酒精用量为物料干质量的30%,产品得率4.17%。同时采用HPLC测定了该工艺所得萃取物中熊果酸的含量为6.24%。结果表明,与传统法相比,该法具有操作简便快速、溶剂用量少,提取时间短,有效成分提取率高,测定时无杂质干扰等优点。

不同油桐套种模式对农作物农艺性状及经济效益的影响

为探索适宜油桐(Vernicia fordii Hemsl.)幼林套种的农作物,分析不同套种模式对作物主要农艺性状及经济效益的影响。结果表明,套种对红薯农艺性状(主茎蔓长除外)无明显影响,对黄豆株高、有效分枝数、有效荚数、单株产量等农艺性状有显著影响,对玉米穗粒重有显著影响;与单作相比,套种会导致黄豆产量下降29.02%、玉米产量下降14.47%。3种套种模式以油桐+玉米经济效益最好,每公顷收益8850元,其次为油桐+黄豆和油桐+红薯,每公顷收益分别为6 300元和6 150元。

瑶药瓜馥木化学成分及药理活性研究进展

瓜馥木为番荔枝科瓜馥木属植物,其根茎部可做药用。本文主要是对瓜馥木的化学成分、药理活性等方面进行了综述,为瑶药瓜馥木的进一步合理开发利用提供了一定理论依据。

表达酿酒酵母ALAS的重组大肠杆菌胞外5-氨基乙酰丙酸的产量和纯化

5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinate,ALA)由5-氨基乙酰丙酸合酶(5-aminolevulinate synthase,ALAS)催化产生。利用重组细菌在大肠杆菌合成ALA已有不少研究。重组真核生物ALAS在大肠杆菌合成ALA的研究没有报道。酿酒酵母ALAS在大肠杆菌重组表达,在摇瓶培养条件下,分析了胞外ALA的产量,重组菌的生长状况和细胞中ALAS的活性,利用两种国产树脂纯化ALA,毛细管电泳分析确定ALA纯度在LB培养基中,初始pH6.5,含有20mmol/L的酮戊酸、20mmol/L琥珀酸和20mmol/L的甘氨酸,37℃下诱导培养12h,胞外ALA的产量为162mg/L培养基。纯化的ALA纯度达到90%。

白花泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶mRNA全序列克隆及序列分析

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-Glucose Pyrophosphorylase UGPase)是白花泡桐(Paulownia fortunei(Seem.)Hemsl.)纤维素特异途径的关键酶.在经过对其他物种UGP mRNA序列的对比分析后,设计保守区简并引物,首先用RT-PCR方法得到413 bp UGP mRNA部分序列,之后通过RACE方法,成功克隆得到包括5’UTR和3’UTR在内的UGP全部mRNA序列,并进行了分析,所得UGP mRNA全序列共1 694个碱基,CDS共1 428个碱基(112-1539),编码氨基酸475,和其他多个物种的UGP序列比对结果显示相似度均在80%以上.

瑶药粘手风质量标准研究

目的:制定瑶药粘手风的质量标准,为该药材资源的开发利用提供科学依据。方法:依据2010年版中国药典一部附录方法对8批瑶药粘手风进行显微、薄层色谱鉴别;对水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物含量进行检查。结果:对粘手风药材的性状、显微特征进行了描述;建立了粘手风的薄层鉴别方法,斑点清晰,分离度好;根据8批次粘手风测定结果,确定水分应≤12.0%,总灰分应≤8.0%,浸出物以水为溶剂,热浸法测定,浸出物应≥6.0%。结论:所建标准可用于粘手风药材的质量控制。

捻转血矛线虫Hc-hrg-2拯救血红素缺陷型酵母生长表型

【目的】已有研究表明捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)Hc-hrg-2属于血红素应答基因,高浓度血红素的刺激可导致该基因的转录水平上调,但其在血红素调控中的功能尚缺乏研究。研究通过同源重组技术构建血红素合成缺陷型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)hem1敲除株,通过异源表达Hc-hrg-2对该敲除株进行表型拯救试验,以期验证Hc-hrg-2参与细胞内血红素转运的功能。【方法】以S.cerevisiae BY4741基因组为模板,设计引物,扩增获得hem1(SGD:S000002640)基因序列5'和3'侧翼区同源臂;同时以pYES2-CT质粒为模板设计引物,扩增获得筛选标记URA3序列;利用两次重叠PCR技术依次将测序正确的上游同源臂、URA3、下游同源臂序列串联成基因敲除组件,并通过醇沉法对敲除组件进行纯化。采用醋酸锂转化法将纯化的敲除组件转化至BY4741感受态细胞中,经SD/-URA(含250μmol·L^(-1)5-氨基乙酰丙酸(ALA))培养基筛选,并利用多对引物进行PCR鉴定,以验证Δhem1敲除株的正确性。同时以含有H.contortus浙江株Hc-hrg-2序列(GenBank:MK371241)及其功能域缺失序列Hc-hrg-2(Δgst-n)和Hc-hrg-2(Δgst-c)的质粒为模板,利用特异性引物分别进行PCR扩增,通过无缝克隆将扩增得到的目的片段插入酵母pESC-LEU表达载体,经PCR鉴定以及测序验证后,采用醋酸锂转化法将正确的表达载体转化至Δhem1感受态细胞中,通过SD/-URA/-LEU(含250μmol·L^(-1)ALA)培养基筛选以及PCR鉴定验证阳性异源表达株的正确性。通过比较Δhem1敲除株及其各异源表达株在含有或不含有250μmol·L^(-1)ALA的SD/-URA/-LEU液体培养基中的生长情况,进一步验证敲除株的表型同时排除表达载体对表型的影响。用2%半乳糖对含有阳性表达质粒的敲除株进行诱导,取部分菌液进行超裂破碎,收集蛋白,通过Western Blot鉴定目的蛋白的表达;剩余菌体用去离子水重悬至OD600=0.2,用去离子水进行5倍比稀释,取4μL稀释后的菌液点至含有250μmol·L^(-1)ALA或者不同浓度血红素的诱导平板上,28℃培养2—3 d后比较敲除株的生长情况。【结果】成功获得hem1基因敲除株Δhem1,与野生株相比,Δhem1不能合成血红素,需外源添加ALA(250μmol·L^(-1))或血红素(≥10μmol·L^(-1))才能生长,且异源表达株和敲除株的表型一致。Western Blot结果表明2%半乳糖能诱导Hc-hrg-2及其功能域缺失基因在敲除株中成功表达,且表达Hc-hrg-2能够在低血红素浓度下(≤1μmol·L^(-1))促进酵母对血红素的摄取,拯救敲除株的生长缺陷,其硫氧还蛋白样结构域(GST-N)和谷胱甘肽S-转移酶C末端结构域(GST-C)的缺失会降低拯救的效果。【结论】捻转血矛线虫血红素应答基因Hc-hrg-2可促进细胞对血红素的摄取,其GST-N和GST-C功能域在该过程中发挥着重要作用,研究成果为后续深入研究捻转血矛线虫的血红素转运机制奠定基础。

钟萼木一年生苗木生长分化与分级标准理论依据的探讨

所调查的钟萼木苗木属于天然杂交种,苗木的高与地径生长性状遵循数量性状遗传.应用大样本抽样调查法和“正态分布标准差分类法”分别进行苗木地径、苗高生长量的调查与分类,分类统计结果表明:苗木群体高与地径性状生长类型权重呈正态分布,分别分布于(13,92)cm、(0.28,2.30)cm区间,一年生苗木高与地径生长量表现大的生长差异,直接影响个体后期生长.笔者提出应用“正态分布标准差分类法”作为理论依据划分该树种苗木等级标准,根据遗传学原理,认为苗高与地径年生长量在平均值类型以下的苗木属于遗传品质差的,确定为不合格苗;年生长量在平均值类型及以上的具有较好的遗传品质,可作为培育个体,确定为合格苗.在合格苗中,确定苗高与地径年生长量达平均值类型为Ⅱ级苗、平均值类型以上苗木定为Ⅰ级苗或优质苗.以该树种试验苗木高与地径年生长量确定苗木等级标准为:高年生长量在[33,43)cm、地径年生长量在[1.0,1.24)cm区间的苗木定为Ⅱ级苗;高年生长量在[43,53)cm、地径年生长量在[1.24,1.48)cm区间的苗木定为Ⅰ级苗;高年生长量在[53,73)cm、地径年生长量在[1.48,1.72)cm区间的苗木定为优质苗;高生长大于73cm、地径生长大于1.72cm的苗木为特级苗.文中首次利用遗传学与数理统计客观地确定苗木分级标准,该苗木标准保留较好的遗传品质个体,去除了不良遗传品质类型个体,可为苗木等级划分与遗传品质改良提供理论参考.

钟萼木当年生生长性状与不同生长类型适应性探讨

应用大样本调查方法和正态分布标准差分类法对钟萼木的当年生苗木高与地径生长量的不同生长类型进行分类,结果表明苗木群体高与地径生长划分为8个不同生长类型,群体表现明显的早期生长分化,群体平均值与相邻两区间生长类型个体权重占整体的85%以上,生长较好与较差的生长类型两极分化所占比例较小;不同生长类型分类较好地表明群体生长性状多样性组成和物种潜在生长优势,可为优良生长类型筛选提供依据.对不同生长类型个体适应性研究表明,该树种生长类型差的个体高生长期较短,优良生长类型个体有更长的高生长期,但地径生长期基本是一致的,主要受高生长期与光合作用率影响,说明遗传品质对苗高与地径生长影响显著.

濒危树种钟萼木当年生苗木生长空间分布与生物量分配研究

利用苗木群体高与地径生长呈正态分布规律,根据"正态分布标准差分类法",以群体标准差值做为不同生长类型划分标准,把钟萼木当年生苗高生长个体划分为8个生长类型,取每一生长类型代表样本进行生长空间分布和生物量分配研究,结果表明,不同样本地上部分的水平空间分布基本相接近,大的样本个体在垂直方向上占据更多空间,对下层个体产生侧方空间与光照竞争。该树种苗木根系发达,主根生长明显,侧根与须根生长旺盛,地下部分水平空间分布随着个体生长量增大,侧根在水平空间形成竞争。不同样本的各组织生物量分配表明,根部与杆的生物量生长比例相近,但生长类型好的样本根部的皮生物量占比例更大,这与须根生长量加大有关。生长类型较好样本树杆的木质部生物量所占比例加大,树干的皮生物量比例增加不明显,叶生物量明显增加,但在全株样本生物量所占比例减少,叶生物量占全株样本生物量比例大。

桢楠优树子代苗期性状遗传变异研究

利用22株桢楠优树单系种子在独山县国有林场开展桢楠优树子代苗期遗传变异研究，对1年生苗木苗高的调查分析表明。苗高在不同家系间存在极显著差异，这种差异主要由遗传因素决定：1年生桢楠优树子代苗木平均苗高为19．1 cm ，变幅为14．4～34．0 cm ；从参试家系中初步选择出5个优良家系，其平均苗高为25．0 cm。平均遗传增益为28．12％，选择效果明显。