新疆部分地区动物Nipah病毒和Hendra病毒感染的调查

拟建立一步法实时RT-PCR检测Nipah病毒(Nipah virus,NiV)、Hendra病毒(Hendra virus,HeV)的方法,对采集自中国新疆部分地区动物外周血样本进行NiV和HeV检测,以获得我国新疆地区的NiV和HeV的病毒流行病学资料。采用NiV和HeV一步法实时RT-PCR检测方法,对2007年9-12月采集的新疆伊犁河谷地区以及巴音布鲁克草原放养的500匹马、100匹驴和160只犬外周血单个核细胞RNA进行NiV和HeV N基因片段检测。结果:对采集的动物血样本进行NiV和HeV核酸检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,没有发现阳性样本。初步流行病学研究提示我国新疆部分地区天然牧场放养的动物中可能不存在NiV和HeV感染,该地区出现NiV和HeV爆发的可能性较小。

关于Hendra病毒感染

1995年Murray等[1]报道了澳大利亚昆士兰州Hendra地区发生的一种新的人畜共患疾病,这种疾病能够使马和人类感染并发病,称为Hendra病毒(HeV)感染.到目前为止已证实的Hendra病毒感染者有3例,并先后有2例患者和16匹马死于此种疾病.

Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立

目的:建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法,为Hendra病的早期诊断提供依据。方法:采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增,并比较两种方法的敏感性。结果与结论:应用常规PCR方法可检测到100fg/μl的含Hendra病毒特异序列的重组质粒DNA,而实时PCR法则可检测到0.1fg/μl的DNA,后者的敏感性比常规PCR法的提高了1000倍,该方法不但操作上更加简便、快速,还可避免交叉污染,适于对Hendra病毒特异序列的检测。

Hendra病毒一步法Real-time RT-PCR检测方法的建立

目的建立针对Hendra病毒N基因的一步法RealtimeRT-PCR检测方法，用于Hendra病毒感染样本的快速检测和准确定量。方法针对Hendra病毒的保守基因N设计引物和探针，构建体外转录的RNA片段作为标准品，建立一步法Real-timeRT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果所设计的引物经Blast检索可以用于检测所有已知的Hendra病毒株。本研究建立的一步法Real-timeRT-PCR方法可以特异性检测出Hendra病毒，不与Nipah病毒产生交叉反应。检测灵敏度为2．6×10^0～2．6×10^1 copies／μl。标准曲线的线性范围为2．6×10^1-2．6×10^7 copies／μl。结论本研究建立的一步法Real-time RT—PCR方法敏感性和特异性较高，且不易出现污染引起的假阳性结果，适合用于Hendra病毒感染样本的检测。

重庆地区动物携带Nipah病毒和Hendra病毒的检测

目的本研究拟建立一步法实时RT—PCR检测Nipah病毒（Nipah virus，NiV）和Hendra病毒（Hendra virus，HeV）的方法，对采集自中国重庆地区动物外周血样本进行NiV和HeV检测，以获得我国重庆地区的NiV和HeV的病毒流行病学资料。方法2007年6月起至2008年6月，采集自重庆地区饲养的猪外周血标本580份、奶牛外周血标本250份、山羊外周血标本180份，密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞，Trizol法提取细胞总RNA。用已建立的NiV和HeV一步法实时RT—PCR检测方法，对RNA样本进行NiV和HeV检测。对阳性样本进行PCR产物序列鉴定及序列分析等研究，在可能的情况下进行病毒分离培养，并提交流行病学调查报告。结果对采集自中国重庆地区饲养的3种动物的样本进行NiV和HeV核酸检测，成功进行了一步法实时RT—PCR反应，所有样本荧光扩增曲线均无Takeoff点，曲线平坦，判为阴性结果。结论初步流行病学研究提示我国重庆地区饲养的动物猪、牛、羊中NiV和HeV未发现阳性。