紫外线致Hep-G2细胞调亡的分子机制初探

紫外线 (UV)是人类最常接触的具基因毒作用的因子。为探索紫外线辐射致细胞凋亡和组织损伤的分子机制 ,本研究采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经紫外线辐射处理的Hep G2细胞P5 3、Caspase3、bcl 2和P2 1等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果表明经紫外线辐射处理的Hep G2细胞的P5 3、Caspase3和bcl 2基因表达增加 ,而P2 1未见明显改变 ,提示P5 3、Caspase基因在紫外线辐射诱导的细胞凋亡中起重要作用 ,bcl 2增高可能有抑制细胞的过度凋亡 ,保持内在平衡的作用。P2 1保持不变或下降可能反映了细胞对DNA损伤应答的新途径。

柳树叶提取物诱导肝癌细胞株hep-G2凋亡的实验研究

目的:研究柳树叶水提物抗肿瘤作用,为最终提取一种有效抗肿瘤药物及临床前实验提供依据。方法:柳树叶水提物制备药物血清作用于培养的肝癌细胞株hep-G2,检测其凋亡。采用端粒重复序列扩增(TRAP)法结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测端粒酶活性。结果:柳树叶水提物制备药物血清对靶细胞有明显的抑制生长现象。孵育一段时间后,能使肝癌细胞发生凋亡,并呈现对浓度的依懒性和伴随端粒酶活性下降。结论:柳树叶提取物能诱导肝癌细胞株hep-G2凋亡。

HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立及盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗的实验研究

目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^(-1)高糖,并分别用10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)胰岛素处理,诱导HepG2细胞产生IR;对2-NBDG(荧光素标记葡萄糖)与Hep G2细胞孵育浓度设定为:50、100、200、400、600、800μmol·L^(-1)、孵育时间设定为:20、40、60、80、100 min,拟筛选最佳胰岛素处理浓度、2-NBDG与HepG2最佳孵育浓度和最佳孵育时间,通过检测细胞培养液中葡萄糖的消耗量及细胞对葡萄糖的摄取量作为判定模型成功的标志;用二甲双胍、盐酸小檗碱干预模型细胞,研究盐酸小檗碱在细胞水平上改善IR的效应。结果 6种浓度的胰岛素均可不同程度诱导HepG2产生IR,虽然10^(-5)、10^(-4)mol·L^(-1)剂量最明显,但细胞死亡较多,以10-6mol·L^(-1)剂量制模有效且细胞成活率高,与正常组比较差异具有统计学意义;当2-NBDG与HepG2细胞孵育浓度大于100μmol·L^(-1)时,细胞荧光强度与正常组差异有显著性,孵育时间超过20 min荧光强度与正常组比较有明显差异,超过100 min,细胞内荧光有明显淬灭衰减现象;盐酸小檗碱、二甲双胍能明显增加细胞培养上清液中葡萄糖的消耗及细胞对葡萄糖的摄取,与模型组比较差异具有统计学意义。结论用HepG2制作IR细胞模型时,选择10^(-6)mol·L^(-1)剂量的胰岛素;2-NBDG孵育浓度选择为200μmol·L^(-1)、2-NBDG孵育时间选择为80min较为适宜,盐酸小檗碱及二甲双胍对HepG2细胞IR具有明显的改善作用。

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P<0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。

草苁蓉多糖对过氧化氢损伤HepG2细胞NF-κB表达的影响

目的探讨草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的Hep G2细胞核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法以Hep G2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用蛋白印迹法检测NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血红素氧合酶(HO)-1、环氧化酶(COX)-2以及核因子-E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。结果 H_2O_2损伤Hep G2细胞后,NF-κB p65和Nrf2蛋白水平升高,i NOS、HO-1、COX-2蛋白水平升高。BRPS处理可降低Hep G2细胞NF-κB p65水平,对Nrf2蛋白水平无显著影响。BRPS同时降低i NOS、HO-1蛋白水平,但对COX-2蛋白水平无影响。结论 BRPS降低H_2O_2损伤的Hep G2细胞i NOS、HO-1蛋白水平,这可能与降低NF-κB活化有关。

绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶多酚的主要成分,具有抗氧化、抗衰老、抗过敏和潜在的抗癌特性.本文运用MTT试验,DAPI染色和Annexin V-FITC分析了EGCG对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导.结果表明,EGCG对Hep G2细胞具有明显的增殖抑制作用,存在剂量和时间依赖效应;EGCG能诱导Hep G2细胞凋亡,并具有剂量依赖效应.

白花丹醌对人肝癌细胞HepG2侵袭和凋亡的影响

目的探讨白花丹醌对人肝癌HepG2细胞侵袭和凋亡的影响。方法人肝癌HepG2细胞进行体外培养,经不同浓度的白花丹醌处理后,MTT法检测细胞的增殖抑制作用;Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;免疫组化法检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示,与对照组比较,白花丹醌干预组抑制HepG2细胞增殖,并呈剂量-效应关系(P<0.05);Transwell细胞体外侵袭实验显示,随白花丹醌用药浓度的递增,细胞侵袭能力明显下降,尤其以4、8μmol·L^(-1)明显(P<0.01);流式细胞术结果显示,白花丹醌作用HepG2细胞48 h,4、8μmol·L^(-1)组细胞凋亡率均明显高于对照组;免疫组化显示,随着白花丹醌浓度增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论白花丹醌能够抑制HepG2细胞增殖,促进HepG2细胞凋亡,同时具有抑制HepG2细胞侵袭的能力。

左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的HepG2细胞脂肪变性的影响

目的探讨左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的人肝细胞株(Hep G2)细胞内甘油三酯(TG)含量的影响。方法用混合脂肪酸孵育的Hep G 2细胞建立细胞脂肪变性模型;将实验分为正常组,模型组,5%、10%、15%含药血清组,油红O染色法检测细胞内脂质沉积,同时定量检测细胞内TG含量。结果 0.5 mmol/L混合脂肪酸孵育Hep G2细胞24 h,可诱导细胞内TG大量沉积,而10%、15%左归降糖清肝方含药血清可抑制脂肪酸这一效应,使细胞内TG含量明显下降(P<0.01)。结论左归降糖清肝方含药血清可改善脂肪酸诱导的Hep G2细胞脂肪变性。

降糖宁胶囊对HepG2细胞糖代谢作用及其作用机制的研究

目的观察降糖宁胶囊(人参、山药、石膏、知母等)对Hep G2细胞糖代谢的影响,并探讨其降糖机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,MTT法检测降糖宁对细胞活力的影响;HE染色法观察降糖宁对细胞形态的影响;采用葡萄糖氧化酶法检测降糖宁对细胞糖消耗的影响;Western-blot检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及人胰岛素受体底物(IRS1)表达量。结果降糖宁胶囊对Hep G2细胞的活力和形态无明显影响,可明显促进Hep G2细胞对葡萄糖的消耗,能促进AMPKβ1/2、IRS1蛋白表达量。结论降糖宁胶囊的降糖机制可能涉及对胰岛素受体信号通路及AMPK信号通路的影响。

川芎嗪含药血清对人肝癌细胞HepG_2增殖的抑制作用

目的观察川芎嗪(TMP)含药血清对人肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法选用SD雄性大鼠30只,随机分成3组,分别ipTMP143.0、71.5mg/kg、生理盐水0.8mL,制备TMP大、小剂量组及生理盐水组含药血清,采用RP-HPLC法测定含药血清中TMP的质量浓度。将各组含药血清作用于人肝癌细胞HepG248h,MTT法测定不同质量浓度TMP含药血清对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用。结果TMP大剂量组血清(20%、10%、5%),TMP小剂量组血清(20%、10%)对人肝癌细胞HepG2增殖较生理盐水组有显著抑制作用(P<0.05),最高抑制率可达46.1%。结论TMP含药血清对人肝癌细胞HepG2增殖有一定的抑制作用。

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP)对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响.方法:用4种浓度的HP作用于缺氧(2%O2)培养HepG2细胞,以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(NP)作对照,检测了在缺氧培养后,Hep G2细胞的MTT值、早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测).结果:低浓度HP对Hep G2细胞有保护作用,而高浓度HP对Hep G2细胞有损伤作用.结论:HP的作用有浓度依赖性和时间依赖性.

异槲皮苷对HepG2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用

目的研究异槲皮苷对Hep G2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用。方法采用异槲皮苷(0、40、80、160、320μmol·L^(-1))作用于Hep G2细胞,MTT法检测异槲皮苷对Hep G2细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察24、48 h后,细胞形态及生长情况;流式细胞术检测异槲皮苷(0、40、80、160μmol·L^(-1))作用Hep G2细胞48 h后细胞周期情况;荧光定量PCR及Western blot检测异槲皮苷作用Hep G2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及相关蛋白的表达。结果MTT检测发现异槲皮苷对Hep G2细胞生长有明显抑制作用,且与异槲皮苷的浓度及作用时间呈正相关;不同浓度的异槲皮苷作用Hep G2细胞24、48 h后,倒置显微镜下观察发现随着浓度的增高及作用时间的延长,细胞生存数量逐渐减少,且细胞形态发生明显变化;流式细胞术检测发现随着异槲皮苷浓度的增高,细胞被阻滞在G1期的数量逐渐增加;荧光定量PCR及Western blot结果均表明,与空白组相比,异槲皮苷(80μmol·L^(-1))作用Hep G2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及其相关蛋白的表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论异槲皮苷有诱导Hep G2细胞凋亡的作用,其作用机制可能与对Raf/MEK/ERK信号通路中相关因子的干预有关。

苦参碱通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱通过线粒体通路诱导Hep G2发生凋亡的机制。方法分别采用MTT法、PI染色法、流式细胞术检测苦参碱对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡作用;采用Western Blot检测苦参碱诱导肝癌Hep G2细胞抑凋亡蛋白Bid、Bcl-2的表达量。结果苦参碱可抑制Hep G2细胞的增殖作用和诱导凋亡,呈时间和剂量依赖性,并可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期。苦参碱可引起线粒体膜电位崩溃,同时诱导Bid、Bcl-2表达下调,Bax表达上调。结论苦参碱通过调节细胞内Bid、Bcl-2和Bax蛋白的表达,经线粒体信号转导途径诱导人肝癌细胞系Hep G2发生凋亡。

促甲状腺激素受体抗体对人肝癌细胞HepG2凋亡和增殖的影响

目的格雷夫斯病(Graves disease,GD)患者肝功能损害发病率高,可能与升高的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)相关,探讨TRAb对肝细胞损伤的机制。方法用含不同浓度TRAb的GD患者血清、正常人血清及胎牛血清的DMEM培养基处理人肝癌细胞株HepG2细胞,采用异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)及MTT法分别检测细胞的凋亡和增殖状况。结果 5%、10%及20%TRAb的GD血清能促进HepG2细胞增殖,且HepG2细胞凋亡较对照组增高明显,以中晚期凋亡为著。结论 TRAb能诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡,参与肝细胞损伤的发生。

蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2增殖及凋亡的影响

为探讨蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测蜂胶醇提物对Hep G2细胞增殖的抑制作用,用荧光倒置显微镜和流式细胞仪分析蜂胶醇提物对Hep G2细胞凋亡的影响。结果表明:12.5～200μg/mL质量浓度的蜂胶醇提物作用24、48h后,均能不同程度地抑制Hep G2细胞的增殖,呈明显的时间、剂量依赖关系,半数抑制质量浓度(IC50)分别是115、78μg/mL。作用8h后,Hep G2细胞出现不同程度的凋亡,凋亡率由6.36%上升到21.9%,呈现出剂量依赖关系。故蜂胶醇提物可显著抑制人肝癌细胞Hep G2的生长,诱导其凋亡。

匹伐他汀和阿托伐他汀诱发HepG2细胞发生胰岛素抵抗

目的研究匹伐他汀和阿托伐他汀诱发Hep G2细胞发生胰岛素抵抗的作用。方法 Hep G2细胞分别给予胰岛素0.5μmol·L-1,匹伐他汀1,10和100μmol·L-1,阿托伐他汀1,10和100μmol·L-1,以及阿托伐他汀100μmol·L-1+MK886 100μmol·L-1。48,72和96 h后检测细胞残余[125I]胰岛素结合率,[3H]D-葡萄糖摄取率,糖原和三酰甘油(TG)含量;作用48 h时细胞载脂蛋白A5(Apo A5)mRNA、Apo A5蛋白和Akt信号通路。结果与阴性对照组相比,匹伐他汀和阿托伐他汀对残余[125I]胰岛素结合率和糖原含量无明显作用。阿托伐他汀100μmol·L-1增加TG含量(mg·g蛋白:0.71±0.04 vs 1.51±0.05,P<0.05),降低[3H]D-葡萄糖摄取率〔37.2±3.2 vs(26.7±1.9)μmol·g-1·h-1,P<0.05),减少磷酸化Akt表达水平(0.92±0.09 vs 0.32±0.02,P<0.05),升高Apo A5 mRNA(0.30±0.02 vs 0.69±0.06,P<0.05)和蛋白表达水平(0.30±0.04 vs0.91±0.03,P<0.05),与胰岛素0.5μmol·L-1组类似。阿托伐他汀100μmol·L-1上述作用与作用时间呈正相关(r=0.729,P<0.05),而MK886可拮抗这些作用。结论阿托伐他汀100μmol·L-1时间依赖性地增强Apo A5表达,导致细胞糖脂代谢异常,诱发Hep G2细胞胰岛素抵抗。

miR-363下调HepG2细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其凋亡

目的:探讨微小RNA-363(microRNA-363,miR-363)的作用靶点及其对Hep G2细胞的抑制作用。方法:通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受microRNA调控。实时荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Hep G2、Huh7、PLC的miR-363和Mcl-1的表达水平。将miR-363转染人Hep G2细胞,检测miR-363对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测Hep G2细胞在转染miR-363后的相对细胞活力,Annexin V/PI染色法检测miR-363转染对Hep G2细胞凋亡的影响。结果:Mcl-1 mRNA 3’-非翻译区(3’-UTR)存在miR-363的假定结合位点,在肝癌细胞中转染miR-363后Mcl-1的表达下降。转染miR-363可抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论:miR-363过表达可显著抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡,其机制可能与miR-363能下调Hep G2细胞Mcl-1蛋白的表达有关。

黄芩素对肝癌细胞HepG_2放疗增敏作用的机制研究

目的:探讨黄芩素在放疗增敏中的作用机制,从而为临床肝癌放疗增敏提供新的策略。方法:将HepG_2细胞分为空白对照组、放疗组、药物组、药物加放疗组、肝细胞加药物组,用MTT检测细胞增殖活性、使用流式细胞术检测细胞凋亡活性、检测细胞克隆形成率,并使用Western Blotting法及QRT-PCA检测p53水平。结果:药物加放疗组HepG_2细胞存活率显著低于其他组(P<0.05);药物加放疗组HepG_2细胞克隆形成数及克隆形成率显著低于其他组(P<0.05),但仍显著高于肝细胞加药物组(P<0.05);药物加放疗组HepG_2细胞凋亡率显著高于其他组;药物加放疗组HepG_2细胞p-53/β-actin蛋白水平显著高于其他组;药物加放疗组HepG_2细胞p-53/β-actin mRNA水平显著高于其他组。结论:黄芩素可显著提高放疗增敏作用,提高HepG_2细胞凋亡率,并可有效调控p53蛋白及mRNA水平。

抗增殖蛋白过表达对HepG_2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨抗增殖蛋白(PHB)过表达对人肝癌细胞系HepG_2细胞增殖和凋亡的影响。方法在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG_2细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测HepG_2细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG_2细胞周期和凋亡。结果转染p EGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞(P<0.05);在转染后48 h,转染组G2/M期细胞比例为(27.84±0.47)%,显著高于空载转染组的(17.21±0.64)%或未转染组的(22.67±0.33)%(P<0.001);转染组细胞凋亡率为(31.72±0.35)%,显著高于空载转染组的(18.66±0.56)%或未转染组的(13.47±0.94)%(P<0.001)。结论 PHB过表达可抑制人肝癌HepG_2细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。

季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响

目的:探讨季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响。方法:采用Hep-G2作为细胞模型。以季德胜蛇药给中国大耳白兔灌胃制备含药血清,以不同浓度的含药兔血清培养Hep-G2,并同时设相应浓度的正常兔血清对照组。应用CCK-8(Cell counting kit-8)法检测Hep-G2增殖状况,应用膜联蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测Hep-G2的凋亡情况。结果:12.5%和15%的含药血清作用于细胞12小时和24小时后,对Hep-G2的增殖均有抑制作用(P<0.05),10%和12.5%的药物血清组作用于Hep-G2细胞12小时后,细胞凋亡率均明显高于相应的正常对照组(P<0.01),12.5%含药血清组的凋亡率明显高于10%的含药血清组(P<0.01)。结论:季德胜蛇药血清可抑制Hep-G2细胞增殖,诱导其凋亡。