黄芩总黄酮对S180、Hep-A-22和Bcap-37肿瘤细胞的抑制作用

目的:研究黄芩总黄酮对S180、Hep-A-22和Bcap-37肿瘤细胞增殖及S180和Hep-A-22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法:将S180、Hep-A-22和Bcap-37肿瘤细胞分别加入终浓度为12.5、25.0、50.0及100.0 mg.L-1的黄芩总黄酮,采用四氮唑盐衍生物(XTT)、MTT法测定细胞增殖抑制率;将S180和Hep-A-22荷瘤小鼠分为空白对照组、环磷酰胺(CTX)阳性药对照组(30 mg.kg-1,隔日给药)、黄芩总黄酮大(200 mg.kg-1.d-1)、中(100 mg.kg-1.d-1)和小剂量组(50 mg.kg-1.d-1),连续给药15 d后剥离肿瘤,称取瘤重,计算其肿瘤生长的抑制率。观察各给药组Hep-A-22荷瘤小鼠连续用药10 d后生命延长率。结果:黄芩总黄酮对S180、Hep-A-22和Bcap-37肿瘤细胞的抑制率随给药浓度的增加而显著升高,其IC50值分别为16.04、17.74和9.05 mg.L-1;与空白对照组比较,黄芩总黄酮大、中、小剂量组S180、Hep-A-22荷瘤小鼠的肿瘤重量均明显低于空白对照组(P<0.05或P<0.01),随给药剂量的增加,其肿瘤抑制率增加(P<0.05或P<0.01)。黄芩总黄酮大、中、小剂量组的Hep-A-22荷瘤小鼠的平均生存天数均显著高于空白对照组(P<0.01),其生命延长率较空白对照组显著增加(P<0.01)。结论:黄芩总黄酮对S180、Hep-A-22和Bcap-37肿瘤细胞的增殖及S180和Hep-A-22荷瘤小鼠肿瘤生长均具有抑制作用。

蝎毒抗癌多肽对H_(22)细胞株体内、体外的抑瘤作用

目的 观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV )对小鼠肝癌 (H2 2 )实体瘤及瘤细胞的抑制作用。方法 应用MTT法检测APB MV对H2 2 瘤细胞的毒性作用 ;通过小鼠H2 2 实体瘤模型 ,观察APBMV对肿瘤生长的抑制作用及对小鼠外周血白细胞 (WBC )数和脾脏指数 (SI)的影响。结果 APBMV对H2 2 细胞具有一定的毒性作用 ,但剂量效应关系不明显 (P >0 .0 5 )。APBMV能明显抑制小鼠H2 2 肿瘤的生长 ,抑瘤率最高可达 40 .3 0 % (P <0 .0 1) ,带瘤小鼠外周血WBC和SI无明显变化或略高于对照组 ,而阳性对照 5 Fu组小鼠WBC和SI均明显下降 (P <0 .0 1)。结论 APBMV是东亚钳蝎蝎毒中的 1种低毒有效的抗肿瘤成分 。

IL-21在肝癌细胞株H22细胞中的表达及其活性

目的:构建小鼠IL-21(mIL-21)真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,转染肝癌H22细胞,探讨其生物学活性。方法:RT-PCR法扩增mIL-21基因,构建mIL-21真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,并经DNA测序证实。脂质体法介导mIL-21-pcDNA3.1转染H22细胞,RT-PCR和Western boltting鉴定其表达,MTT法检测mIL-21-pcDNA3.1对T细胞增殖和NK细胞杀伤活性的影响。结果:DNA序列分析证实构建的mIL-21-pcDNA3.1正确无误,RT-PCR和Western boltting证实转染的H22细胞中有mIL-21的表达。MTT法显示,转染mIL-21的H22细胞培养上清刺激T细胞增殖的刺激指数(stimulation index,SI)为3.412±0.312,联合ConA的刺激指数为4.673±0.450,均显著高于转染空质粒组的1.465±0.103和未转染组的1.447±0.245,(P<0.01)。转染mIL-21的H22细胞培养上清NK细胞杀伤率为(81.66±4.26)%,显著高于转染空质粒组的(34.74±5.52)%和未转染对照组的(33.61±1.42)%。结论:mIL-21-pcDNA3.1载体在H22细胞中的表达可显著增强T细胞增殖及NK细胞的杀伤功能,为其在抗肝癌治疗中的应用奠定了基础。

夜香树95%乙醇提取物对小鼠肝癌细胞株H_(22)增殖的抑制作用

目的观察夜香树(CN)95%乙醇提取物对小鼠肝癌细胞株H_(22)增殖的抑制作用。方法采用MTT法检测5%、10%和20%浓度的CN 95%乙醇提取物含药血清对小鼠肝癌细胞株H_(22)细胞增殖的抑制作用,并进一步采用集落形成法检测20%浓度的CN 95%乙醇提取物含药血清对H_(22)细胞集落形成能力的影响,将CN 95%乙醇提取物按照低、中、高剂量(175、350、700 mg/kg)灌胃荷瘤小鼠,观测其对小鼠瘤质量的抑制率。结果 10%和20%浓度的CN 95%乙醇提取物含药血清较空白血清对小鼠肝癌细胞株H_(22)细胞增殖的抑制作用强(P<0.05或<0.01),其中20%的含药血清对细胞的抑制率为31.93%。加入20%浓度的CN 95%乙醇提取物含药血清较空白血清的H_(22)细胞的集落形成率低(P<0.01),加入含药血清的细胞集落形成率为45.78%。中高剂量CN 95%乙醇提取物对荷瘤小鼠有一定抑制肿瘤生长作用,抑制率分别为22.39%和31.19%。结论 CN 95%乙醇提取物可抑制H_(22)细胞增殖。

不同来源H_(22)细胞株的生物学特性比较研究

目的 对不同研究单位保存的小鼠肝癌H2 2 细胞株的基本生物学特性进行比较研究。方法 从国内3个不同研究单位 (武汉大学典型培养物保藏中心 ,山东省医学科学院药物研究所以及中国医学科学院药物研究所 )引进小鼠肝癌H2 2 瘤株 (分别简称武汉H2 2 、山东H2 2 、北京H2 2 ) ,KM小鼠腹腔传代 ,然后对其体外培养特性、体内生长特征、病理形态、治疗学特征进行了比较分析。结果 3株H2 2 细胞在体内、体外生长速度明显不同 ,武汉H2 2 生长速度较其他瘤株快 (P <0 .0 1) ,接种一致性好 ;而山东H2 2 则在 10 4 个细胞 只小鼠时即可接种成功。荷瘤小鼠体内未发现明显转移灶 ,但肿瘤形态各不相同。环磷酰胺治疗时 ,山东H2 2 抑瘤率最高为 74 6%。结论 不同研究单位H2 2 瘤株的生物学特性有很大不同 ,虽为同一起源 ,但经不同单位保存使用一定时间后 。

上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与VEGF和P53蛋白表达的关系研究

目的研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)和P53蛋白表达的关系。方法前瞻性收集新疆维吾尔自治区人民医院的卵巢癌组织标本112例(A组)、卵巢癌旁组织标本85例(B组)及正常卵巢组织标本75例(C组)。采用实时荧光定量PCR法对三组标本中的miRNA-22表达量进行检测。将卵巢癌SKOV-3细胞株分为转染miRNA-22-mimic(转染组)、miRNA-22-NC(空白载体组)及正常对照组。采用实时荧光定量PCR法对各组细胞中的miRNA-22表达量进行测定,通过Transwell小室法对各组细胞的侵袭能力进行检测,并用Western blot法对各组细胞中的P53及VEGF蛋白表达情况进行检测。结果A组miRNA-22表达量较B、C组均明显下降(P<0.05),而B、C组miRNA-22表达量的比较,并无显著差异(P>0.05)。相比正常对照组与空白载体组,转染组细胞中的miRNA-22表达量明显升高(P<0.05),而正常对照组与空白载体组细胞中miRNA-22表达量的比较,无显著差异(P>0.05)。Transwell小室法检测结果发现,转染组卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭能力较正常对照组与空白载体组明显减弱(P<0.05),而正常对照组与空白载体组侵袭细胞数的比较,无显著差异(P>0.05)。Western blot法检测结果发现,转染组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平较正常对照组与空白载体组明显下降(P<0.05),而正常对照组与空白载体组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平的比较,无显著差异(P>0.05)。结论上调miRNA-22表达可起到阻滞卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭的作用,其机制可能与P53和VEGF蛋白表达水平下降密切相关。

小鼠肝癌H_(22)克隆细胞株H2D8与其原瘤株武汉H_(22)的基本特性比较研究

用细胞克隆的方法获得武汉大学典型培养物保藏中心保存的小鼠肝癌H2 2 瘤株 (武汉H2 2 )的克隆细胞株H2D8。比较武汉H2 2 及H2D8对血清的依赖性、致瘤性、病理特征和对环磷酰胺 (CTX)的敏感性。结果发现H2D8细胞株对血清的依赖性 ,和对小鼠致瘤性及肿瘤病理学特性与武汉H2 2 细胞无明显差异 ;H2D8细胞对CTX治疗的敏感性更高。说明H2D8克隆株在体外培养、致瘤性和病理特征方面能保持原瘤株的细胞特性 ;

特异性RNA诱导的CTL对Hep-A-22肿瘤细胞的特异性杀伤作用研究

目的 检测特异性核糖核酸诱导的CTL对肿瘤的特异性杀伤作用。方法 应用Hep—A—22小鼠肝癌细胞提取的核糖核酸对小鼠进行主动特异性免疫治疗,检测机体对肿瘤的免疫及抑制作用。结果 实验动物淋巴细胞对ConA增殖呈明显促进,抑瘤作用较明显。结论 特异性RNA能刺激机体特异性抗体的产生能力,可作为特异性抗原对肿瘤进行特异性免疫治疗。

抗瘤酮A_(10)对肝腹水Hep-A-22细胞的抑制活性的研究

通过抗瘤酮A10 对肝腹水Hep A 2 2细胞的抑制活性的研究 ,证实了它的抑瘤性并初步证实其作用方式。主要利用噻唑蓝 (MTT法 )测定药物的抗癌作用 ,并观察抗瘤酮A10 对肝腹水型荷瘤小鼠的生命延长作用及对实体瘤生长的抑制作用。并进一步用小鼠碳末廓清免疫指标测试及抗瘤酮A10 与化疗药物 5 Fu相配伍 ,初步证明其作用方式。抗瘤酮A10 体外细胞实验显示其细胞毒性很低 ,对小鼠的生命延长作用和抑瘤作用十分明显 ,对机体的免疫能力有明显提高 ,并初步证实它是以生物反应调节剂形式起作用的。

不同浓度H22肝癌细胞株对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模差异的影响

目的:使用H22肝癌细胞株建立C57BL/6J小鼠原位肝癌模型,比较不同浓度H22肝癌细胞悬液对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模成瘤率、肿瘤病理学特征及其体重变化情况的影响。方法:将66只C57BL/6J小鼠随机分为4个组,分别对应1×10~6、1×10~8、1×10^(10)、1×10^(12)4个细胞浓度。在无菌条件下,将不同浓度的H22肝癌细胞悬液注入60只C57BL/6J小鼠的肝左叶。从注射之日起,连续21 d测量小鼠体重,于第21 d时脱颈椎处死,测肝脏的重量,并行肝脏外观及病理组织学观察。结果:1×10~6、1×10^(10)、1×10^(12)组成瘤率40%(6/15),1×10~8组为27%(4/15)。病理检查证实为肝细胞性肝癌。结论:不同浓度H22肝癌细胞株对成瘤影响差异不明显,造模中可根据实际情况自行选择。

奥曲肽对H-22细胞株小鼠皮下移植模型的抑制作用

目的 评价奥曲肽对H-22细胞株小鼠皮下移植肿瘤模型的抑制作用，探讨奥曲肽抑制肿瘤的可能机制。方法 本实验共入选20只昆明小鼠，随机分为：A组(实验组)及B组(对照组)。每组包括10只小鼠。H-22细胞株(2×10^6)皮下注射于小鼠左前腋窝。注射后A组每只小鼠接受奥曲肽(100μg／kg／day×14days)腹腔注射。B组的小鼠接受相同剂量的生理盐水腹腔注射。每天测量小鼠皮下肿瘤的大小。皮下移植14d后所有小鼠均断颈处死，切除皮下肿瘤应用免疫组化染色检测VEGF,PCNA，bcl-2的表达及微血管密度(MVD)。应用TdT酶介导的dUTP缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)及ANNEXIN-V标记的流式细胞计检测细胞凋亡。结果移植后7d及14d，A组皮下肿瘤的平均大小明显小于B组(0．13±0．02)cm^3 VS．(0．21±0．04)cm^3，P＜0．05；(0．36±0．11)cm^3 VS．(0．72±0．11)cm^3，P＜0．01。B组VEGF及PCNA的表达模型高于A组(Ridit检验，P＜0．05)。B组bcl-2的表达亦高于A组，但无统计学显著性差异(Ridit检验，P＞0．05)。B组MVD亦高于A组，但无统计学显著性差异(23．30±1．81) VS．(30．6±3．41)，P=0．075。流式细胞计及TUNEL均可检测到A组细胞凋亡水平较B组显著性升高(P＜0．05)。结论 奥曲肽对H-22细胞株小鼠皮下移植肿瘤模型具有抑制作用。除了抑制细胞增殖之外，抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡可能亦是抑制肿瘤的机制之一。

中药仙龙GS对小鼠Hep-A-22移植性肝癌的抑制作用

目的 中药仙龙GS对Hep—A—22荷瘤小鼠抑瘤作用的研究。方法 对Hep—A—22荷瘤小鼠进行为期10天的灌胃给药后取瘤称重,通过抑瘤率判断仙龙GS对小鼠移植瘤的抑制作用。结果 当剂量为16.7g/kg和25g/kg时,其抑瘤率分别为55％和41％。结论 中药仙龙GS具有一定的临床应用价值。

肿节风注射液抗小鼠肝癌Hep-A-22的作用及毒性

目的 :研究肿节风注射液 (ZJF)抗小鼠肝癌Hep A 2 2的作用及毒性。方法 :建立在体荷瘤小鼠肝癌Hep A 2 2模型 ,测定ZJF的抑瘤率和体重、胸腺指数、脾指数和给药前后外周血白细胞的影响 ,同时研究ZJF对人肝癌Hep A 2 2细胞株生长的抑制作用。结果 :ZJF具有明显的抗肿瘤作用 ,结论 :ZJF体内、外对小鼠肝癌Hep A 2 2均具有抗肿瘤作用 。

热疗与化疗联合作用Hep-A-22荷瘤小鼠的实验观察

目的 观察NRL-001型内生场热疗系统与化疗联合应用对Hep-A-22荷瘤小鼠的治疗效果。方法 用NRL-001热疗系统对实验组动物瘤体加热,肿瘤内部温度控制在43℃～44℃之间、并计算出加热前,处死时肿瘤体积。称肿瘤重量,计算出抑瘤率。结果 热疗两次后肿瘤生长受到明显抑制,热疗组抑瘤率65.6％,热疗加化疗组抑瘤率89.1％,热疗组和热疗加化疗组瘤重与对照组瘤重比较均差异显著(P<0.01)。结论 NRL-001型热疗系统可抑制肿瘤生长,化疗与热疗联合应用产生最佳的治疗效果。

褪黑素对小鼠肝癌H22细胞抗增殖和促凋亡的p53依赖性机制研究

背景与目的本室已经证明了褪黑素(melatonin,MLT)对小鼠肝癌H22细胞的生长具有抑制作用,本研究旨在探讨其机理。方法(1)建立荷瘤小鼠模型并给予褪黑素处理,取肿瘤组织进行p53、cyclinE水平的免疫组化分析;(2)不同浓度褪黑素体外培养小鼠肝癌H22细胞,采用流式细胞技术(flowcytometry,FCM)检测细胞周期分布和凋亡率;免疫组化法分析培养细胞的p53和cyclinE的蛋白水平;采用RT-PCR方法检测FasmRNA的水平。结果(1)FCM显示褪黑素可引起H22细胞G0/G1期比例升高,从75.24%上升至85.46%,同时细胞凋亡增多,从5.07%升至12.77%;(2)褪黑素作用后p53水平较对照组增高42.5%(培养细胞)和19.5%(肿瘤组织),而cyclinE的水平则降低31.7%(培养细胞)和39.9%(肿瘤组织);(3)RT-PCR结果显示FasmRNA水平增高44.2%。结论MLT通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡抑制H22细胞增殖。其机理可能是通过p53抑制下游的cyclinE的表达,阻止细胞进入S期;同时又通过p53上调Fas表达,从而诱导细胞凋亡。

中药仙鹤复方水提取物对S180肉瘤和H22肝癌细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用研究

目的观察中药仙鹤复方水提取物对移植型鼠源S180肉瘤和H22肝癌细胞在荷瘤动物体内抗肿瘤作用。方法昆明种受试小鼠,接种S180肉瘤和H22肝癌细胞后随机分为空白对照组、阳性对照组及中药仙鹤复方水提取物高、中、低3个剂量组。观察中药仙鹤复方水提取物对肿瘤的抑制作用及动物体质量、免疫器官重量的影响。结果中药仙鹤复方水提取物对鼠源移植型S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞在荷瘤小鼠体内的增殖均有明显的抑制作用;且对两种荷瘤小鼠的免疫器官脾脏及胸腺均有显著性的保护作用影响。结论中药仙鹤复方水提取物在动物体内具有较好的抑瘤作用,且对荷瘤小鼠免疫器官有保护作用,具备减毒的功效。

褪黑素通过提高p53和Fas的表达促进小鼠肝癌H22细胞凋亡

目的:研究褪黑素(MLT)对小鼠肝癌细胞株H22的促凋亡作用及其机理。方法:采用丫啶橙(AO)染色、培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性检测和流式细胞术(FCM)观察MLT的促凋亡作用;采用RT-PCR方法检测MLT处理前后细胞的p53mRNA、FasmRNA的水平。结果:AO染色后H22细胞呈现明显核浓缩的凋亡形态;培养液LDH活性检测及FCM分析均提示MLT诱导H22细胞发生凋亡;RT-PCR结果显示p53、Fas表达增强。结论:MLT能促进H22细胞p53和Fas的表达,从而诱导细胞发生凋亡。

DHA复合物对小鼠H_(22)肝癌细胞TPK活性影响

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)复合物抗癌作用机制。方法以移植H22肝癌细胞的小鼠为模型,利用[γ-32P]三磷酸腺苷(ATP)作为反应启动剂掺入外源性底物的方法测定酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性,观察DHA复合物对H22癌细胞内TPK活性的影响。结果DHA复合物的体内抑瘤率可高达70%以上;癌细胞细胞核、细胞质、细胞膜、内质网、线粒体中TPK的活性普遍升高(P<0.01)。给予DHA复合物作用后,癌细胞上述各组分中TPK的活性均显著下降(P<0.01)。结论DHA复合物具有抑制TPK活性,降低细胞内的信号传递,抑制癌细胞增殖的作用。

骆驼蓬总碱软胶囊对S_(180)肉瘤和H_(22)肝癌细胞体内增殖生长的影响

目的观察骆驼蓬总碱软胶囊对移植型鼠源S180肉瘤和H22肝癌细胞在荷瘤动物体内生长增殖的影响。方法 通过对昆明种受试小鼠右腋皮下接种S180肉瘤和H22肝癌细胞,分别建立体内两种不同移植型肿瘤病理模型,观察骆驼蓬总碱软胶囊在浓度为60 mg/kg、30 mg/kg及15 mg/kg连续ig给药10 d,对荷瘤小鼠体内瘤细胞裂殖生长增重的抑瘤作用及对脾脏指数、胸腺指数的影响。结果 骆驼蓬总碱软胶囊对鼠源移植型S180肉瘤细胞在三批次荷瘤小鼠体内的增殖生长均具有明显的抑制作用,抑瘤率在25.44%～48.81%之间,剂量组30 mg/kg抑瘤作用相对较好;对移植型H22肝癌细胞在三批次荷瘤小鼠体内的抑瘤率在21.91%～28.23%之间,剂量组60mg/kg抗癌作用相对较好;且显示对两种不同荷瘤小鼠的脾脏指数、胸腺指数均未见有显著性异常影响。结论 骆驼蓬总碱软胶囊对鼠源S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞在荷瘤小鼠体内增殖生长均具有较好的抑瘤作用,且对荷瘤小鼠免疫器官亦未见有明显异常性毒性损伤的影响。

肿瘤细胞膜多肽诱导的CTL对Hep—A—22细胞特异性杀伤的研究

目的 应用经诱导和提取的小鼠肝癌Hep—A—22细胞株膜外抗原多肽在整体条件下观察对肿瘤的特异性免疫情况。方法 应用液闪仪检测免疫后小鼠胸腺和脾淋巴细胞对ConA的转化率及测量整体条件下肿瘤生长情况。结果 淋巴细胞对ConA发生转化率增高,同时诱导体内淋巴细胞特异性杀伤Hep—A—22细胞的活性明显增强,且几种组分的抗原多肽均能产生不同的诱导杀伤活性。经免疫后的小鼠肿瘤明显受到抑制。结论 提取的Hep—A—22肿瘤细胞膜外抗原多肽可作为肿瘤抗原进行有效的肿瘤特异性免疫,本研究为肿瘤特异性免疫治疗提供了新途径。