HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用

目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响．方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford 法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70- 肽复合物对HepG-2细胞增长的情况．结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为 HSP70,每10 g组织最终获得1．5 mg的HSP70; HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0．1 mg／L:t=-0．2500,P=0．00; t=-0．1777,P=0．001:t=-0．3094,P=0．001; 0．5 mg／L:t=-0．2878,P=0．00;t=-0．2044,P= 0．00;t=-0．3285,P=0．00;1 mg／L:t=-0．3118, P=0．00;t=-0．2592,P=0．00;t=-0．1994, P=0．025;5 mg／L:t=-0．4007,P=0．00;t= -0．1302,P=0．016;t=-0．2537,P=0．005),细胞存活率明显高于对照组(P<0．01)．结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度 HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进 HepG-2细胞的生长．

γ-氨基丁酸对肝癌细胞株HepG-2恶性表型的影响

目的:研究γ-氨基丁酸(GABA)对肝癌细胞株HepG-2增殖能力及恶性表型的影响。方法:用不同浓度的GABA与人肝癌细胞HepG-2作用后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长速度,并测定其倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期的改变,软琼脂细胞集落形式实验和裸鼠成瘤实验检测细胞的恶性表型。结果:MTT实验结果表明实验组细胞的生长速度明显快于对照组细胞的生长速度,且呈剂量依赖性,其细胞周期分布也发生改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;对照组细胞和各浓度组细胞的平均倍增时间分别为39.0,30.6,30.0,27.3,26.6和38.2 h,软琼脂细胞集落形成率依次为3.2%,4.2%,5.4%,6.6%,6.5%,3.5%,Balb/c裸鼠成瘤实验显示,对照组和实验组的肿瘤平均质量依次为0.285和1.382 g,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GABA能促进细胞增殖,并引起细胞恶化改变。

青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞株凋亡、周期的体外作用

目的研究青蒿琥酯(Art)对肿瘤细胞凋亡、周期的影响。方法采用MTT法测定Art与5-FU联用对人肝癌细胞系HEPG-2的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布。结果Art能明显抑制HEPG-2细胞的生长,并呈明显的时间-剂量效应。24、48、72 h的IC50分别为103.1±8.6、75.3±4.1、65.7±6.0μg.ml-1。当10、20μg.ml-1Art与2.5、5.0μg.ml-15-Fu联合使用时,表现出明显的协同作用,并可诱导细胞凋亡,影响细胞周期的分布。结论Art对人肝癌细胞系HEPG-2的增殖有显著抑制作用。与5-FU联合使用有协同作用,其机制可能是诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。

银耳多糖对肝癌细胞株HepG-2增殖的影响

目的:研究银耳多糖对肝癌HepG-2细胞增殖的影响。方法:采用高温浸提的方法提取银耳多糖,并进行提取定量;将银耳多糖作用于肝癌HepG-2细胞,采用台盼蓝排斥试验测定细胞活力和生长曲线。结果:在分别培养1 d、2d和3 d后,银耳多糖干预各组的活细胞率都低于对照组(P<0.001)。生长曲线法显示,银耳多糖干预各组的细胞倍增时间延长,银耳多糖对增殖细胞的杀伤率最高达89.29%(>80%),且存在剂量依赖关系。结论:银耳多糖对肝癌HepG-2细胞具有直接抑制作用。

TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2的表达

目的:探讨TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中的表达。方法:用RT-PCR和Western-blot方法检测肝癌细胞株HepG-2中TLR4基因的转录和蛋白的表达的情况,同时用免疫组化的方法检测肝癌组织中TLR4的表达的情况。结果:肝癌细胞株HepG-2中存在TLR4基因的转录和蛋白的表达。TLR4受体主要表达位于肝癌组织细胞的细胞膜上,其阳性率约为76.7%。结论:肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中均有TLR4的表达。

中药博癌丸对人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及相关调控基因的影响

近年来，细胞凋亡与肿瘤发生发展关系的研究成为生命科学研究中的热点。许多化疗药物均能不同程度诱导肿瘤细胞凋亡，成为筛选抗癌药物的新靶点。中药博癌丸是王伯祥教授治疗肝癌的经验方，经多年临床观察发现其有降低甲胎蛋白，配合介入方法治疗肝癌的作用。本研究运用血清药理学实验方法，观察中药博癌丸对人肝癌细胞株HepG-2凋亡及其相关调控基因表达的影响，

阿托伐他汀对人肝癌细胞株HepG2生物钟基因震荡性的影响

目的探讨阿托伐他汀(AT)对人肝癌细胞株HepG2(简称HepG2)生物钟基因与蛋白表达节律的影响。方法基于MOE软件设计AT与生物钟蛋白的分子对接虚拟实验;在HepG2与人骨肉瘤细胞BMAL1::LUC-U2OS(简称U2OS)中分别设置实验组(加入101,102,103,104 nmol/L AT),对照组(加入0 nmol/L AT),空白组(加入0.1%二甲基亚砜),给药24 h后采用CCK-8法检测细胞在不同浓度AT处理后的活力;在不影响正常细胞活力的浓度下,采用免疫印迹(Western blot)法检测脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(BMAL1)、昼夜节律蛋白2(PER2)、视黄酸受体相关孤儿受体γ(RORγ)、核受体亚家族1组D成员(NR1D1)的蛋白表达水平;采用LumiCycle实验检测细胞生物节律基因BMAL1的震荡情况;通过血清休克实验确定生物钟基因BMAL1,PER2,NR1D1及隐花色素2(CRY2)的节律表达。结果高于100 nmol/L的AT会对HepG2产生细胞毒性。在避免AT对正常细胞活性影响的背景下,选择AT 100 nmol/L浓度进行后续实验。给予AT刺激后,BMAL1和PER2蛋白表达量减少(P<0.05);LumiCycle实验结果显示,实验组(AT 100 nmol/L)的相位较对照组(0 nmol/L)滞后2.696 h(P<0.01)。血清休克实验结果显示,实验组PER2基因的表达较对照组显著下调(P<0.05)。结论AT能调节外周生物钟蛋白与基因的表达,使生物钟核心基因BMAL1表达滞后,PER2基因与蛋白表达均显著下调,具有治疗生物钟紊乱相关疾病、睡眠障碍等的应用前景。

裙带菜多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的:检测裙带菜多糖(UPPS)对人肝癌HepG-2细胞生长的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡和抗肿瘤作用的关系。方法:采用MTT法、流式细胞术检测UPPS对HepG-2细胞生长的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用;采用免疫细胞化学染色,观察Bax和Bcl-2表达水平的变化。结果:UPPS能抑制HepG-2细胞增殖,明显高于对照组(P<0.01)。诱导细胞凋亡作用发生在UPPS处理24～48h;UPPS处理HepG-2细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调。结论:UPPS对HepG-2的抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的,可能与Bcl-2和Bax表达水平的变化有关。

KSC联合紫杉醇对人肝癌HepG-2细胞株的抑制作用研究

目的:研究硒酸酯多糖(KSC)与紫杉醇(TAX)联合对肝癌细胞株HepG-2的生长抑制作用,判断联合用药的效果。方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用金氏公式进行联合用药分析。结果:KSC与TAX单用均可抑制HepG-2细胞的生长,且呈时间—剂量依赖性,二者合用后对HepG-2细胞的抑制作用显著增强。两药合用的中效浓度分别为31.684mg/L和0.272nmol/L,较两药单用时的中效浓度低(KSC单用为46.632mg/L,TAX单用为1.684nmol/L)。两药合用的绝大多数q值在0.882～0.989,为相加作用。结论:KSC与TAX联用可显著增强对HepG-2细胞的抑制作用,二者具有协同相加抗肿瘤作用。

红花注射液对人肝癌HepG-2细胞AKT表达的影响

目的探讨红花注射液对肝癌HepG-2细胞增殖的影响及分子机制。方法应用红花注射液(0、50、150、250 g/L)处理HepG-2细胞,经AnnexinⅤ-FITC/PI双染荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,实时荧光定量PCR检测AKT mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 50、150、250g/L的红花注射液作用于HepG-2细胞48 h后,荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态;细胞内AKT mRNA表达水平显著降低,AKT、p-AKT蛋白表达水平也显著下调,且变化趋势均呈一定的剂量依赖关系。结论红花注射液可能通过抑制AKT信号通路,阻碍肝癌HepG-2细胞的增殖及诱导凋亡。

三叶青总黄酮对人肝癌HepG-2细胞及裸鼠异种移植瘤的药效作用研究

目的:三叶青抗肝癌作用具有良好的临床基础,而三叶青总黄酮(Total flavonoids from Radix Tetrastigmae,TF)提取物的抗癌活性尤其显著。本研究从细胞-动物实验明确三叶青总黄酮抗肝癌作用,为三叶青治疗肝癌建立药效物质基础。方法:通过CCK-8法检测三叶青总黄酮对肝癌细胞增殖的抑制作用,并计算药物的IC50,确定TF的高、中、低剂量。采用Annexin V-FITC/PI双染法染色HepG2细胞,采用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率。通过建立人肝癌细胞系HepG2移植瘤裸鼠模型,观察TF对HepG2移植瘤裸鼠模型的体质量、肿瘤生长体积、抑瘤率的影响。结果:TFIC50为3.247 mg/m L,TF的高、中、低的剂量分别为5、1.25、0.312 5 mg/m L;与对照组比较,TF高、中、低浓度剂量48 h后对肝癌HepG2细胞增殖均有明显的抑制作用,且随浓度的增加而逐渐增强,均具有显著差异(P<0.01);TF高、中、低浓度剂量24 h后均有明显促进肝癌HepG2细胞的凋亡作用,且随浓度的增加而逐渐增强,均具有显著差异(P<0.01)。TF的高、中、低剂量的抑瘤率分别为64.07%、53.64%、46.69%,TF高剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用优于CTX(环磷酰胺),而TF中、低剂量对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用弱于CTX。结论:三叶青总黄酮(高、中、低浓度)对肝癌HepG2细胞增殖均有明显的抑制作用,且随浓度的增加而逐渐增强;对肝癌细胞的凋亡均有明显促进的作用,且随浓度的增加而逐渐增强。TF高剂量(15g/kg)对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用优于CTX,而TF中、低剂量(7.5、3.75 g/kg)对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用弱于CTX。

土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用

目的研究土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨土鳖虫抗肿瘤效应。方法以土鳖虫乳剂给SD大鼠灌胃,采血并制备血清。四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果土鳖虫含药血清可明显抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖,20%土鳖虫含药血清作用72h后抑制率高达56.728%,抑制率呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测细胞凋亡发现肝癌HepG-2细胞以坏死居多,细胞周期多阻滞于G0-G1期。结论土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞体外增殖有明显的抑制作用。

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ的影响

背景与目的:华蟾素注射液是传统抗肿瘤中药制剂,目前药效机制尚不明确。本研究旨在探讨华蟾素注射液对DNA拓扑异构酶Ⅰ(topoisomerase Ⅰ,TOPOⅠ)的影响。方法:采用噻唑蓝还原法(MTT)观察华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测对HepG-2细胞周期的影响;采用RT-PCR法检测对HepG-2细胞TOPOⅠmRNA表达的影响;采用TOPOⅠ介导的负超螺旋PBR322 DNA解旋反应检测华蟾素对TOPOⅠ酶活性的影响;采用负超螺旋PBR322 DNA检测华蟾素对DNA的直接抑制作用。结果:华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;并将HepG-2细胞阻滞于S期;RT-PCR检测表明,华蟾素注射液可下调TOPOⅠmRNA表达,表现浓度依赖效应;对TOPOⅠ介导的负超螺旋PBR322 DNA解旋反应有抑制作用;对负超螺旋PBR322 DNA没有直接抑制作用。结论:华蟾素注射液能够抑制HepG-2细胞增殖,影响DNA拓扑异构酶Ⅰ酶的mRNA表达及活性可能为机制之一。

黄芪总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨黄芪总黄酮(TFA)对人肝癌HepG-2细胞生长抑制及凋亡诱导作用及其机制。方法:以不同浓度TFA处理HepG-2细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;Westernblot检测凋亡相关蛋白Survivin、Bc1-2、Bax的表达。结果:TFA能够抑制体外培养的人肝癌细胞HepG-2生长、诱导细胞凋亡,其作用具有量效关系和时效关系。Western blot检测显示,随着TFA浓度的增加,细胞凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2的表达量明显降低,而细胞凋亡促进蛋白Bax的表达量显著增加。结论:TFA对HepG-2细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制与下调细胞凋亡抑制蛋白Survivin与Bcl-2的表达和上调细胞凋亡促进蛋白Bax的表达有关。

四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Ho-echst33258荧光染色和ELISA法测定DNA片段等技术检测细胞凋亡。结果ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。HepG2细胞与ZG-DHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现典型的细胞形态改变,DNA片断化,亚G1峰检出并增加,Annexin V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HepG2细胞凋亡。结论ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。

银耳多糖诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的:研究银耳多糖(Tremdla Polysacchadd,TP)对肝癌HepG-2细胞体外增殖的影响。方法:采用MTT法检测TP对HepG-2细胞的抑制作用,改良苯酚品红染色观察细胞形态的改变,梯状DNA电泳检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测bcl-2和survivin的表达。结果:TP对HepG-2细胞具有明显的抑制作用且呈剂量-时间依赖性;细胞有明显染色质凝集、凋亡小体等现象;电泳出现梯状DNA现象;抗凋亡基因bcl-2和survivin表达下调。结论:TP可诱导HepG-2细胞凋亡,而抗凋亡基因bcl-2和survivin下调可能是其诱导凋亡的机制之一。

榄香烯对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶Ⅰ的影响

背景与目的:榄香烯(elemene,ELE)是传统抗肿瘤中药制剂,目前药效机制尚不明确。本研究旨在探讨ELE对人肝癌HepG-2细胞增殖及DNA拓扑异构酶Ⅰ(topoisomeraseⅠ,TOPOⅠ)的影响。方法:采用四甲基偶氯唑蓝还原法(MTT)观察ELE对HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测ELE对HepG-2细胞周期的影响;采用RT-PCR法检测ELE对HepG-2细胞TOPOⅠmRNA表达的影响;采用TOPOⅠ介导的负超螺旋PBR322DNA解旋反应检测ELE对TOPOⅠ酶活性的影响;采用负超螺旋PBR322DNA检测ELE对DNA的直接抑制作用。结果:ELE能抑制HepG-2细胞增殖,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;阻滞HepG-2细胞于S期,呈剂量依赖性;下调TOPOⅠmRNA表达,呈剂量依赖特性;对TOPOⅠ介导的负超螺旋PBR322DNA解旋反应有抑制作用;对负超螺旋PBR322DNA没有直接抑制作用。结论:ELE能够抑制HepG-2细胞增殖;影响TOPOⅠ的表达及活性可能是其作用机制之一。

黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的研究黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,应用MTT法检测黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用;通过免疫细胞化学(S-P法)检测凋亡相关基因bcl-2、bax、P53蛋白表达的改变。结果 MTT结果表明,黄芩苷在体外对人肝癌HepG-2细胞有明显的诱导细胞凋亡作用,且这种抑制作用呈现浓度和时间依赖性。免疫细胞化学(S-P法)检测凋亡相关基因Bcl-2、P53蛋白表达明显减少、Bax表达明显增加;Bcl-2/Bax比例明显降低。结论黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞具有较强的诱导凋亡的作用,其作用机制可能与下调P53基因表达和降低Bcl-2/Bax比例有关。

拓扑替康诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的初步研究

背景与目的:拓扑替康(topotecan,TPT)是新一代水溶性、半合成喜树碱类衍生物,系拓扑异构酶I抑制剂、细胞周期特异性抗肿瘤药物;肝癌为我国发病率居第三位的恶性肿瘤,现有治疗方法的临床疗效均不理想。本文研究TPT诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用,及其细胞毒作用。方法:运用MTT、HE染色、透射电镜、流式细胞仪、免疫组化技术等实验方法,对TPT杀伤HepG2细胞的程度进行了测定并观察了其诱导凋亡的过程。结果:TPT能通过诱导HepG2细胞凋亡的方式,杀伤HepG2细胞,TPT对HepG2细胞具有较强的体外杀伤作用,并存在明显的剂量、时间依赖关系,IC50约为95μg/L。TPT将HepG2细胞阻断在S期,并进一步诱导其凋亡。凋亡形态特征表现为典型的间期凋亡:细胞核染色质固缩,呈新月形聚集于核膜周缘,胞质浓缩,出现空泡。在TPT诱导HepG2细胞凋亡的过程中,不影响bcl-2基因蛋白正常表达(P>0.05)。结论:TPT能诱导HepG2细胞凋亡,细胞毒性较强。

小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2增殖、凋亡、迁移的影响及机制探讨

目的观察小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法实验组将2.5、5、10、20、40μg/mL的小白菊内酯分别作用于HepG-2细胞,对照组不加小白菊内酯干预。测算HepG-2细胞生长抑制率,荧光显微镜下观察细胞形态学改变;用流式细胞仪技术检测小白菊内酯作用前后细胞周期的改变和细胞凋亡情况;用细胞划痕实验的方法检测小白菊内酯对细胞迁移的影响。结果小白菊内酯作用HepG-2后细胞增殖被抑制,随着小白菊内酯浓度逐渐增加和作用时间的延长,HepG-2细胞生长抑制率上升(P均<0.05);5μg/L的小白菊内酯作用48 h后可见细胞呈明显的细胞形态学改变,胞质减少、细胞核染色质固缩,出现凋亡小体;实验组与对照组G0/G1期细胞所占比例分别为73.36%±9.13%、59.28%±8.37%,S期所占比例分别为18.34%±6.09%、27.36%±4.26%,G2/M期所占比例分别为9.36%±2.98%、14.30%±3.07%,凋亡率分别为27.45%±4.15%、0.56%±0.72%,两组比较,P<0.05。实验组细胞迁移能力明显弱于对照组(P<0.05)。结论小白菊内酯通过将细胞阻滞在G0/G1期而抑制HepG-2细胞增殖并诱导其凋亡;小白菊内酯对HepG-2细胞有明显的抗迁移作用。