一种新型脂肪变性HepG2细胞模型及线粒体能量代谢障碍评价

目的探讨建立一种新型的脂肪变性Hep G2细胞模型的方法,并对细胞线粒体能量代谢障碍程度进行评价。方法予25%的胎牛血清和0.1%的医用脂肪乳DMEM培养基初步诱导12 h后,进一步予油酸和棕榈酸组成的0.1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)DMEM培养基再次诱导12 h,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并以无血清DMEM培养基作为对照比较。诱导成功后,采用油红O染色观察细胞内脂滴沉积状况,并用全自动生化仪检测细胞上清液丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶含量和细胞内三酰甘油(TG)含量;采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位的变化,采用磷钼酸比色法测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量,综合评测脂肪变性细胞线粒体能量代谢障碍的程度。结果与对照组比较,模型组细胞内橘红色脂滴大量形成,且TG和ROS含量明显增高(P<0.01),而线粒体膜电位及细胞内ATP含量显著降低(P<0.01)。结论采用25%胎牛血清、0.1%中/长链脂肪乳和0.1 mmol/L FFA分阶段诱导Hep G2细胞,可以成功在体外建立脂肪变性细胞模型,该模型会引起细胞线粒体能量代谢紊乱,与非酒精性脂肪性肝病临床发病机制存在相似性。

油酸诱导HepG_2细胞脂肪变性模型的建立

目的:以Hep G2细胞为实验材料,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型。方法:用不同浓度的油酸培养Hep G2细胞,采用MTT法确定引起肝细胞脂肪变性的油酸的最佳浓度,用油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,并检测细胞内TG的含量和培养液的ALT、AST的水平,实时定量PCR检测CPT-1、FAS、IL-6m RNA的表达。结果:用含0.25m M浓度的油酸的培养基培养Hep G2细胞24h,光镜下可见Hep G2细胞内有脂滴形成,模型组中细胞内TG含量及培养液中AST较对照组增高,差异有统计学意义。模型组较对照组CPT-1m RNA表达增高,FASm RNA表达降低,IL-6m RNA表达增高,差异均有统计学意义。结论:通过油酸建立的体外非酒精性脂肪肝模型,可较好地模拟人脂肪肝的主要特征,为脂肪肝的研究提供了简便的方法。

泽漆醇提取物抗氧化活性及对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的影响

为了探究泽漆醇提取物体外抗氧化作用及其对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的影响。本研究采用浸渍法分别以25%、50%、75%甲醇和乙醇对泽漆粉末进行提取,评估不同泽漆提取物的体外抗氧化活性,并测定其总酚和总黄酮含量。建立HepG2细胞脂肪堆积模型,不同浓度(20、40、60μg/mL)泽漆50%乙醇提取物处理24 h,观察细胞内脂滴形成情况;测定细胞中甘油三脂(triglyceride,TG)含量、总谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)。结果表明,泽漆醇提取物均具有抗氧化活性,且有浓度依赖性,其中50%乙醇提取物在一定浓度范围内抗氧化效果最佳(P<0.05),且总酚(8.813%±1.344%)和总黄酮(17.938%±0.819%)含量也较高。与模型组比较,泽漆50%乙醇提取物能够降低HepG2细胞内脂滴和TG值,提高细胞GSH、T-AOC含量和SOD活性(P<0.05),具有浓度依赖性。综上可知,50%乙醇提取物可以抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪堆积,并增强细胞内源性抗氧化能力。

人肝细胞系L-02细胞单纯肝脂肪变性细胞模型的建立与应用

目的：探讨建立人肝细胞L-02单纯肝脂肪变性细胞模型的方法与模型的应用。方法体外用1640培养基培养L-02细胞，分为模型组和正常组。当细胞融合达到70%~80%，正常组换用新鲜1640培养液，而模型组改为含有游离脂肪酸（油酸和棕榈酸）混合物的1640培养基诱导培养24 h。以油红O染色定性观察细胞内脂滴并通过显色比较各组间总脂质差别，模型鉴定采用观察细胞内脂滴形态，检测细胞内甘油三酯和细胞培养上清丙二醛含量，并检测细胞凋亡情况；同时利用此模型观察护肝清脂片对脂肪变性肝细胞内脂滴的影响。结果模型组L-02细胞内脂滴大量形成，且甘油三酯明显升高，而培养液中肝酶释放量及丙二醛较正常组没有明显升高，且凋亡率没有明显增加；护肝清脂片含药血清两次给药，可以使细胞内脂滴和甘油三酯明显减少。结论采用油酸和棕榈酸混合物（油酸∶棕榈酸=2∶1）可以成功诱导L-02细胞脂肪变性，该模型适用于治疗脂肪肝药物的研究。

黑茶对胎牛血清诱导脂肪变性的HepG2细胞的影响

利用含有50%的胎牛血清的培养液处理HepG2细胞48 h,建立非酒精性脂肪变性细胞模型,分别从噻唑兰染色吸光度法(MTT值)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)3个方面评价茯砖提取物(FZ)、六堡茶提取物(LB)、青砖茶提取物(QZ)、千两茶提取物(QL)清除肝细胞脂肪堆积的作用。结果表明,与模型组相比,加药处理组细胞的脂质堆积有缓解趋势,茯砖茶、六堡茶、千两茶、青砖茶提取物都可显著降低细胞内TG累积(P<0.01);而茯砖、青砖茶提取物对TC的清除效果较好(P<0.01),千两茶与六堡茶效果不明显。以上结果表明,黑茶提取物通过降低细胞内的脂类堆积,可能起到缓解脂肪变性的作用。

SIRT1/UCP2通路在脂肪变性HepG2细胞线粒体能量代谢中的调控机制

目的采用油酸诱导Hep G2细胞发生脂变,建立脂肪变性细胞模型,观察SIRT1/UCP2通路在脂肪变性Hep G2细胞能量代谢中的调控机制。方法采用含有2 mmol/L油酸的DMEM培养基诱导Hep G2细胞24 h后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组比较。以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并用全自动生化仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量和细胞内甘油三酯(TG)含量;采用流式细胞仪测定线粒体膜电位的改变,采用磷钼酸比色试剂盒测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量,运用Western印迹法检测各组细胞SIRT1和UCP2蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞内橘红色脂滴大量形成,且TG含量明显升高(P<0.01),线粒体膜电位及细胞内ATP含量显著降低(P<0.05,P<0.01),SIRT1蛋白表达均显著降低(P<0.05),UCP2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论油酸诱导的脂肪变性Hep G2细胞模型可以出现脂质代谢紊乱和线粒体能量代谢失衡,其机制可能与细胞内SIRT1/UCP2通路的激活有关。

左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的HepG2细胞脂肪变性的影响

目的探讨左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的人肝细胞株(Hep G2)细胞内甘油三酯(TG)含量的影响。方法用混合脂肪酸孵育的Hep G 2细胞建立细胞脂肪变性模型;将实验分为正常组,模型组,5%、10%、15%含药血清组,油红O染色法检测细胞内脂质沉积,同时定量检测细胞内TG含量。结果 0.5 mmol/L混合脂肪酸孵育Hep G2细胞24 h,可诱导细胞内TG大量沉积,而10%、15%左归降糖清肝方含药血清可抑制脂肪酸这一效应,使细胞内TG含量明显下降(P<0.01)。结论左归降糖清肝方含药血清可改善脂肪酸诱导的Hep G2细胞脂肪变性。

Nrf2/ARE通路相关因子在脂肪变性HepG2细胞中的表达及其意义

目的:探讨建立一种新型的脂肪变性人肝癌细胞(Hep G2)模型,观察核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路相关因子在脂肪变性Hep G2细胞中的表达及其意义。方法:Hep G2细胞给予含25%的胎牛血清、0.1%医用脂肪乳和0.1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)的DMEM培养基分阶段诱导后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组。模型成功后,以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并用全自动生化仪检测细胞内甘油三酯(TG)含量;采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)的含量,采用生物试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量及活性的变化;运用Western blot法检测各组细胞Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组油红O染色可见细胞内橘红色脂滴大量形成,TG、ROS、NO、MDA含量水平明显增高(P<0.05,P<0.01),SOD、GSHPx活性明显下降(P<0.01),Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达均显著增高(P<0.05,P<0.01)。结论:本模型可以成功诱导Hep G2细胞发生脂肪变性和氧化应激损伤状态;Nrf2/ARE通路下游相关因子发生激活可能与脂肪变性Hep G2细胞氧化应激的过度反应有关。

疏肝健脾方含药血清对酒精性损伤HepG2细胞脂肪变性的保护作用

目的探讨疏肝健脾方含药血清对酒精性损伤HepG2细胞脂肪变性的保护作用。方法采用酒精诱导HepG2细胞损伤模型,设立正常对照组、模型组、含药血清组(疏肝健脾方含药血清)和正常血清组,观察HepG2细胞形态以及生长情况;采用MTT法检测细胞活力,采用油红O染色对存活HepG2细胞脂肪变程度进行观察和量化比较,采用免疫印迹法检测HepG2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ蛋白表达水平。结果含药血清组细胞形态与正常对照组HepG2细胞形态相似,细胞形态完整,贴壁生长状态良好;含药血清组和正常对照组HepG2细胞脂肪变程度十分接近,脂肪变程度较轻;油红O染色显示,异丙醇溶液脱色后吸光度测定值在模型组为(0.942±0.051),正常血清组为(0.928±0.049),均显著高于含药血清组(0.619±0.043)和正常对照组【(0.621±0.050,P<0.05】;MTT吸光度值在正常对照组为(1.021±0.071),在含药血清组为(0.962±0.066),也显著高于模型组(0.561±0.035)和正常血清组【(0.572±0.041),P<0.05】;正常对照组和含药血清组HepG2细胞PPARγ蛋白表达水平显著低于模型组和正常血清组(P<0.05)。结论疏肝健脾方含药血清对酒精性损伤HepG2细胞脂肪变性有保护作用。

人肝细胞系LO2单纯肝脂肪变性细胞模型的建立

目的:探讨建立人肝细胞系LO2单纯肝脂肪变性细胞模型的方法。方法:试验分为正常对照组与试验组,用含10%胎牛血清的1640培养基培养LO2细胞,当细胞处于对数生长期时,正常对照组更换新鲜的1640培养基,试验组用含不同浓度游离脂肪酸(油酸∶棕榈酸为2∶1)的1640培养基培养,24 h后油红O染色,观察细胞内脂滴大小,并检测细胞中TG、TC含量的变化及细胞增殖情况。结果:试验组中LO2细胞内有大量的脂滴生成,且甘油三酯水平显著升高,其中,以1.2 mM FFA组脂质沉积最为明显。同时,细胞抑制率小于4%,胆固醇水平无明显升高,均符合单纯脂肪变性模型的特征。结论:采用游离脂肪酸(油酸∶棕榈酸为2∶1)可以成功诱导LO2细胞单纯脂肪变性,其中游离脂肪酸浓度以1.2 m M最为理想。

分子伴侣4-苯基丁酸对HepG2脂肪变模型中细胞损伤的影响

目的观察人肝癌Hep G2细胞脂肪变模型中内质网应激发生的情况,探讨分子伴侣4-苯基丁酸(4-PBA)对该脂肪变模型中内质网应激、氧化应激和凋亡的影响。方法使用0.5、1.0 mmol/L的混合脂肪酸分别干预Hep G2细胞,在不同时间点采用Real-time PCR方法检测内质网应激相关蛋白CHOP和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA的表达水平。以2 mmol/L的4-PBA干预脂肪变性Hep G2细胞,在不同时间点检测CHOP和GRP78 mRNA的表达,氧化应激指标丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,以及凋亡相关蛋白Caspase-3活性的变化。结果与对照组比较,混合脂肪酸干预组Hep G2细胞内CHOP、GRP78 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。4-PBA干预可使脂肪变性Hep G2细胞内CHOP和GRP78 mRNA的表达水平下调(P<0.05),MDA含量明显下降,SOD和GSH水平显著升高(P<0.05),Caspase-3活性减低(P<0.05)。结论 Hep G2细胞脂肪变性时发生明显的内质网应激。分子伴侣4-PBA能减轻氧化应激和内质网应激,下调脂肪变性Hep G2细胞Caspase-3活性,减轻细胞损伤。

雌激素对人肝癌HepG2细胞脂肪变性的作用及AQP7表达的影响

目的探讨雌激素对人肝癌Hep G2细胞脂肪变性的作用及水通道蛋白7(AQP7)表达的影响。方法将培养后的人肝癌HepG2细胞分为HepG2细胞组、脂肪变模型组、雌激素低剂量组、雌激素高剂量组;其中脂肪变模型组及雌激素低、高剂量组使用2.0m M油酸溶液200μl处理,而雌激素低、高剂量组分别加入500μl浓度为40.0、80.0μg/ml的雌激素,HepG2细胞组不作任何处理;4组细胞均继续培养72h。采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,油红O溶液染色法测定脂滴面积比,贝克曼AU-480全自动生化仪测定TG水平,RT-PCR、Western blot法分别测定HepG2细胞AQP7 mRNA及蛋白相对表达量。结果与HepG2细胞组比较,脂肪变模型组细胞存活率降低(P<0.05),脂滴面积比、TG水平均升高(均P<0.05);与脂肪变模型组比较,雌激素低、高剂量组细胞存活率均升高(均P<0.05),脂滴面积比、TG水平均降低(均P<0.05);与雌激素低剂量组比较,雌激素高剂量组细胞存活率升高(P<0.05),脂滴面积比、TG水平均降低(均P<0.05)。与HepG2细胞组比较,脂肪变模型组AQP7 mRNA及蛋白相对表达量均降低(均P<0.05);与脂肪变模型组比较,雌激素低、高剂量组AQP7 mRNA及蛋白相对表达量均升高(均P<0.05);与雌激素低剂量组比较,雌激素高剂量组AQP7 mRNA及蛋白相对表达量均升高(均P<0.05)。HepG2细胞AQP7 mRNA及蛋白相对表达量与脂滴面积比、TG水平均呈负相关(均P<0.05)。结论雌激素能抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其机制可能与雌激素能上调AQP7表达有关。

小鼠原代肝细胞的分离培养及体外脂肪变性模型构建方法的优化

目的优化改进原代肝细胞分离培养方法并建立肝脂肪变性(hepatic steatosis)的细胞模型,以提升实验效率与准确性。方法在原代肝细胞培养及已有的脂肪变性模型上进行优化,对逆向灌注插管及固定方式进行细化,精确小鼠肝脏灌注消化的速度与时间,并在撕去肝脏包膜及过滤过程中应用含2%胎牛血清(FBS)的培养基;探索诱导脂肪变性细胞模型选用的游离脂肪酸种类、浓度与比例,精确诱导时间。结果所得小鼠原代肝细胞存活率达90%以上,量足、形态好、状态佳;所构建的脂肪变性细胞模型胞质内脂滴明显、糖脂代谢能力下降,并表现出轻度炎性反应及胰岛素抵抗状态。结论优化完善的技术手段,帮助得到稳定且模拟活体生理状态的脂肪变性细胞模型。

他莫昔芬体外促进HepG2细胞脂肪变性观察

目的：研究他莫昔芬（TAM）对体外培养的HepG2细胞脂肪变性以及脂类代谢调控关键因子表达的影响。方法应用油酸（50μmol/L）处理HepG2细胞，诱导细胞脂肪变性体外模型，同时给予不同浓度的TAM （5～20μmol/L）干预72 h；采用油红O染色和甘油三酯含量测定检测HepG2细胞内脂质聚集情况；应用蛋白印迹法检测固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）、肉酯软脂酰基转移酶（CPT1）和微粒体甘油三酯转移蛋白（MTP）的表达；采用细胞活性检测试剂盒测定细胞活性。结果在干预72 h后，模型组细胞内甘油三酯含量为（16.53＆#177;0.17） mg/100 mg蛋白质，在5μmol/L TAM处理细胞内甘油三酯含量为（17.77＆#177;0.05） mg/100mg蛋白质，与模型组无显著性差异，但在10μmol/L和20μmol/L TAM处理组较模型组分别增加了31%[（21.57＆#177;0.16） mg/100 mg蛋白质]和44%[（23.82＆#177;0.44） mg/100 mg蛋白质]，（P＆lt;0.05）；TAM上调细胞内SREBP-1c、FAS、SCD和MTP蛋白表达，但并不改变CPT1蛋白表达；TAM在5～20μmol/L范围内不影响HepG2细胞活性。结论 TAM可促进油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性，其主要机制可能是通过上调SREBP-1c及其下游基因，如FAS和SCD的表达而增加了脂肪酸的合成。

抑制线粒体丙酮酸载体通过激活AMPK-ACC通路改善棕榈酸诱导的HepG2细胞脂肪变性

目的探究抑制线粒体丙酮酸载体(mitochondrial pyruvate carrier,MPC)是否通过激活腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)-乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)通路,改善棕榈酸(palmitic acid,PA)所致HepG2细胞脂肪变性情况。方法利用PA处理HepG2细胞作为高脂负荷模型组,实验分为正常对照组、模型组和MPC抑制组。油红O染色分析细胞的油脂蓄积情况。RT-PCR检测AMPK、ACC、CPT1A、SREBP1 mRNA表达水平。全自动蛋白分析仪检测AMPK、p-AMPK、ACC、p-ACC、SREBP1蛋白表达水平。结果PA可以诱导HepG2细胞胞质内聚集大量环状脂滴,降低p-AMPK、p-ACC蛋白表达水平,提高SREBP1基因以及蛋白表达水平。MPC抑制剂UK5099可以减少PA所致HepG2细胞胞质内脂滴数量,提高p-AMPK、p-ACC蛋白表达水平,降低SREBP1基因以及蛋白表达水平。结论体外抑制MPC可以明显改善PA所致HepG2细胞脂肪变性。激活AMPK-ACC信号通路,可能是MPC抑制剂防治非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝细胞脂肪变性的重要作用机制之一。

青砖茶水提物对HepG2细胞脂肪变性的干预作用

为了探讨青砖茶水提物(green brick tea water extract,GBT-WE)对胎牛血清诱导的HepG2细胞脂肪变性的干预作用及其机制,利用高浓度胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的培养基对HepG2细胞培养48h,建立非酒精性细胞脂肪变性模型,而后加入不同质量浓度GBT-WE给药处理24h.采用CCK-8法检测含有不同质量浓度FBS的培养液和GBT-WE对细胞增殖的影响,通过油红O染色观察细胞脂肪变性的程度,利用酶法检测甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)的含量变化,采用Western blot检测脂质代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1c(Sterol-regulatory element binding proteins 1c,SREBP1c)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)的表达水平.结果显示:含有50%FBS的培养基培养HepG2细胞48h可诱导其脂肪变性;GBT-WE的质量浓度超过240μg/mL时对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用;GBTWE能显著减轻细胞脂肪变性的程度(P<0.01),显著降低TG、TC表达量(P<0.01),同时可以下调SREBP1c、FAS蛋白表达水平(P<0.01).上述实验结果初步表明青砖茶水提物通过SREBP1c/FAS信号通路实现对HepG2细胞脂肪变性的改善作用.

小黑药亲电成分干预混合游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG2脂肪变性研究

采用GSH功能化磁珠靶向敲出小黑药亲电成分并用LC-MS表征,基于游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,评价小黑药亲电成分降低肝细胞脂质累积和氧化应激的作用和机制。结果表明:小黑药亲电成分主要集中在乙酸乙酯部位;在0.5~2.0mg/mL浓度下,小黑药石油醚部位、乙酸乙酯部位、水部位均具有降低脂肪变性细胞脂质累积和ROS生成的活性,其中乙酸乙酯部位在各浓度下效果最好;乙酸乙酯部位在各浓度下具有降低细胞内TG、TC水平和提高细胞内抗氧化酶活性的作用;经过GSH功能化磁珠靶向敲出亲电化合物后,乙酸乙酯部位在2.0μg/mL浓度下对细胞内TG水平的降低和细胞内抗氧化酶水平的提高效果显著减弱。乙酸乙酯部位萃取物上调Nrf2及下游NQO1、HO-1、GCLC基因,下调脂质合成基因SREBP1c、ACC1、FAS的表达,促进脂质分解基因PPARα、CPT1A的表达;而靶向敲出亲电成分后,乙酸乙酯部位萃取物调控脂代谢和抗氧化相关基因的作用明显下降。LC-MS表征亲电成分敲出前后乙酸乙酯部位样品,发现了7个变化的主要质谱峰,推测其为主要的亲电化合物。小黑药中亲电化合物可以改善脂肪酸诱导的脂肪变性,其机制主要与抗氧化和脂代谢相关基因的调节有关。

短链脂肪酸对HepG2细胞脂质堆积模型脂质代谢的影响

目的:揭示肠道菌群产物短链脂肪酸(Short-chain fatty acids, SCFAs)对HepG2细胞脂质堆积模型脂质代谢的影响。方法:通过油红O染色法观察油酸钠建立的HepG2细胞脂质堆积模型,使用不同浓度的SCFAs(乙酸、丙酸、正丁酸)干预HepG2细胞脂质堆积模型,MTT法检测HepG2细胞存活率;TC、TG试剂盒检测HepG2细胞脂质堆积模型中TC、TG含量;Western blot检测HepG2细胞AMPK、p-AMPK、ACC和p-ACC等蛋白的表达量。结果:随着三种SCFAs浓度的升高,HepG2细胞活性逐渐降低(P<0.05);SCFAs干预HepG2细胞脂质堆积模型后TC、TG含量降低(P<0.05),并抑制脂质堆积模型组细胞内AMPK、ACC的磷酸化表达。结论:SCFAs对HepG2细胞活性、HepG2细胞脂质堆积模型脂质代谢以及蛋白表达均有影响,不同浓度不同种类的SCFAs干预结果有差异。

荷叶生物碱对脂肪变性HepG2细胞脂质积聚的影响

本文以油酸诱导HepG2细胞脂肪变性构建非酒精脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)体外细胞模型,通过测定细胞存活率、胞内TG含量、胞内脂滴油红O染色情况和脂质代谢相关基因mRNA表达研究荷叶生物碱提取物(Lotus leaf extract, LLE)对NAFLD脂质积聚的影响。结果显示,LLE对脂肪变性HepG2细胞的IC50为73.77 &#181;g/mL,在无细胞毒性的浓度下,LLE可明显降低脂肪变性HepG2细胞中甘油三酯(Triglyceride, TG)含量和脂滴积聚程度,且高浓度作用更为明显。进一步研究发现,LLE对脂肪变性HepG2细胞中SREBP-1c和ACCα的mRNA表达影响不大,但能显著上调脂肪变性HepG2中PPARα、CPT-1和ACOX1的mRNA表达水平(p 5)。综上,LLE可抑制脂肪变性HepG2细胞增殖,降低细胞中TG含量和脂滴积聚,且该作用与TG的β-氧化分解有关。

不同提取工艺制备的虎金方提取物对自由脂肪酸诱导的HepG_(2)细胞脂肪变性的抑制作用

目的:探讨不同提取方法制备的虎金方提取物对HepG_(2)细胞脂肪变性的抑制作用及可能机制。方法:采用全方水提、部分水提部分醇提、全方醇提等三种提取方法分别制备不同浓度的虎金方提取物;采用自由脂肪酸(FFAs)干预HepG_(2)细胞制备NAFLD细胞模型;采用油红O染色法考察三种提取物对NAFLD细胞模型脂滴堆积及IOD值的影响;采用相关试剂盒测试并观察其对NAFLD细胞模型中ALT、AST、TG、TC水平及SIRT1、Srebp-1c、FAS三种脂质代谢相关蛋白含量的影响。结果:与模型组比较,虎金方全方水提组细胞脂滴蓄积显著减少,ALT、AST、TG、TC、FAS蛋白、Srebp-1c蛋白水平显著降低,SIRT1蛋白水平显著升高,其作用优于全方醇提物及水醇结合提取物。结论:三种不同提取工艺的虎金方提取物对NAFLD细胞模型脂肪变性均具有一定的抑制作用,其中以水提物在40μg/mL时抑制作用较优,其可能通过抑制脂质堆积、改善肝细胞损伤发挥作用,其作用机制可能与调节SIRT1相关信号通路及脂质合成相关基因SREBP-1c、FAS有关。