桑辛素通过调节胆固醇代谢改善油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积

目的观察桑辛素对油酸(oleic acid,OA)诱导的HepG2细胞脂质蓄积的改善作用,并探讨其可能机制。方法以300μM OA处理HepG2细胞24 h诱导建立脂质蓄积模型,2.5、5、10μM的桑辛素和OA共同作用于细胞24 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,油红O染色观察细胞内脂质含量情况,DiI-LDL检测细胞脂质摄取能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定桑辛素对胆固醇代谢关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARα)和胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)蛋白表达的情况,并将桑辛素与低密度脂蛋白受体(LDLR)和PPARα通过AutoDock vina软件进行分子对接验证。结果OA刺激HepG2细胞导致细胞内脂滴颗粒明显增加,脂质含量明显升高(P<0.01)。与模型组相比,桑辛素可明显改善模型组肝细胞脂质蓄积,并降低脂质含量(P<0.05)。桑辛素可抑制HepG2细胞对DiI-LDL的摄取,上调细胞中PPARα和CYP7A1的蛋白表达水平(P<0.05)。分子对接显示桑辛素与LDLR和PPARα受体表现出良好的对接活性。结论桑辛素对HepG2细胞脂质蓄积模型有明显的改善作用,其机制可能与调节PPARα通路有关。

大豆肽和豌豆肽对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢及其相关机制的研究

通过细胞实验探讨大豆肽与豌豆肽的复合物对II型糖尿病胰岛素抵抗作用,并初步探明其作用机制。采用1×10^(-6)mol/L的人胰岛素处理HepG2细胞24 h建立胰岛素抵抗模型;CCK-8法确定大豆肽及豌豆肽对HepG2细胞的安全剂量;检测不同复配比例的大豆肽和豌豆肽实验组的葡萄糖消耗、葡萄糖吸收及细胞中的糖原含量反应糖代谢情况,通过Western Blot法检测各蛋白的表达。结果表明,与对照组相比,HepG2细胞置于含1×10^(-6)mol/L人胰岛素培养液孵育24 h,葡萄糖消耗量、葡萄糖吸收量、糖原含量都降低,表明建模成功。大豆肽及豌豆肽干预均能改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状况,提高细胞对葡萄糖的吸收和消耗能力、糖原合成能力,并能够提高葡萄糖转运蛋白GLUT2、GLUT4的表达量及胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的磷酸化水平,其中质量浓度为200μg/mL、比例为2∶1的大豆肽和豌豆肽效果最好。大豆肽与豌豆肽以2∶1的质量比进行复配可以有效改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状况,可能与肽提高细胞中GLUT2和GLUT4的表达量,以及提高IRS-1和Akt蛋白的磷酸化水平有关。

泽漆醇提取物抗氧化活性及对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的影响

为了探究泽漆醇提取物体外抗氧化作用及其对油酸诱导HepG2细胞脂肪堆积的影响。本研究采用浸渍法分别以25%、50%、75%甲醇和乙醇对泽漆粉末进行提取,评估不同泽漆提取物的体外抗氧化活性,并测定其总酚和总黄酮含量。建立HepG2细胞脂肪堆积模型,不同浓度(20、40、60μg/mL)泽漆50%乙醇提取物处理24 h,观察细胞内脂滴形成情况;测定细胞中甘油三脂(triglyceride,TG)含量、总谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)。结果表明,泽漆醇提取物均具有抗氧化活性,且有浓度依赖性,其中50%乙醇提取物在一定浓度范围内抗氧化效果最佳(P<0.05),且总酚(8.813%±1.344%)和总黄酮(17.938%±0.819%)含量也较高。与模型组比较,泽漆50%乙醇提取物能够降低HepG2细胞内脂滴和TG值,提高细胞GSH、T-AOC含量和SOD活性(P<0.05),具有浓度依赖性。综上可知,50%乙醇提取物可以抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪堆积,并增强细胞内源性抗氧化能力。

circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH)实验及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA CCND1在HepG2细胞及L02细胞中的表达情况;进一步干扰及过表达circRNA CCND1后,通过qRT-PCR检测circRNA CCND1在HepG2细胞中的表达情况,CCK-8法和EDU法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况。结果 HepG2细胞circRNA CCND1相对表达量较LO2细胞高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组circRNA CCND1相对表达量较Control组和Si-NC组下降(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组和Oe-NC组升高(P <0.05)。各组细胞培养0、24、48、72和96 h后细胞增殖活性比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);(3)各组细胞增殖活性变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Control组及Si-NC组比较,Si-circRNA CCND1组细胞凋亡率升高(P <0.05),G_(0)/G_(1)期比值升高(P <0.05),S及G_(2)/M期比值下降(P <0.05);与Control组及Oe-NC组比较,OecircRNA CCND1组细胞凋亡率下降(P <0.05),G_(0)/G_(1)期比值下降(P <0.05),S及G_(2)/M期比值升高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组细胞侵袭数、细胞迁移数较Control组、Si-NC组少(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组及Oe-NC组多(P <0.05)。结论 circRNA CCND1能够促进人肝癌细胞HepG2细胞增殖、侵袭和迁移,抑制细胞凋亡。

南、北五味子蛋白抗氧化活性和对HepG2细胞氧化应激损伤的修复作用

采用碱提酸沉法提取南五味子蛋白(Schisandra sphenanthera protein,SSP)和北五味子蛋白(Schisandra chinensis protein,SCP),并测定其体外清除自由基能力、还原能力和对H_(2)O_(2)诱导的HepG2细胞氧化损伤的修复作用。采用CCK-8法检测细胞增殖率,荧光检测胞内活性氧水平,酶联免疫吸附法检测细胞氧化应激产物和抗氧化物酶系活性。结果表明,SSP清除自由基和还原能力均优于SCP,SSP与SCP都能对H_(2)O_(2)诱导HepG2造成的细胞生长抑制起到修复作用(P<0.05),显著降低胞内活性氧、丙二醛水平(P<0.05),显著提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽的水平(P<0.05),且SSP对H_(2)O_(2)诱导的HepG2氧化应激损伤修复能力优于SCP。综上,2种五味子蛋白中SSP更适合应用于抗氧化功能性食品或保健食品工业中。

人参皂苷Rb1通过KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡

目的:探讨人参皂苷Rb1(Gn-Rb1)对肝细胞癌(HCC)HepG2细胞氧死亡的影响及其可能的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析氧死亡的关键基因PGAM5表达对HCC患者生存期的影响。选取辽宁省肿瘤医院收治的8例HCC患者的HCC组织与癌旁组织,通过WB法及qPCR检测氧死亡相关基因蛋白与mRNA的表达情况。将HepG2细胞随机分为对照组与Gn-Rb1组(予以200μmol/L Gn-Rb1干预),采用细胞克隆形成实验、划痕愈合实验分别检测Gn-Rb1对HepG2细胞的集落形成能力、迁移能力的影响,ELISA检测对细胞ROS生成水平的影响,微板法检测对细胞LDH释放水平的影响;WB法、qPCR法检测Gn-Rb1对HepG2氧死亡关键基因蛋白质与mRNA水平表达的影响。结果:生物信息学分析发现,PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长(P<0.05)。在临床HCC组织与癌旁组织样本中发现,相较于癌旁组织,在蛋白质与mRNA水平上,肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低,NRF2表达显著升高(均P<0.01),p-AIFM1蛋白水平显著升高(P<0.05)。对HepG2细胞予以200μmol/L Gn-Rb1干预后,相较于对照组,Gn-Rb1组HepG2细胞的迁移能力与集落形成能力显著降低(均P<0.01),而LDH水平显著升高(P<0.05);相比于对照组,在mRNA和蛋白质水平上,Gn-Rb1组细胞中KEAP1、PGAM5表达均显著升高而NRF2表达均显著降低(均P<0.05),p-AIFM1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:HCC组织中氧死亡被抑制,而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生,抑制细胞增殖和迁移能力。

野鸦椿果实乙酸乙酯萃取物化学成分及对HepG2细胞抑制作用研究

研究野鸦椿(Euscaphis japonica(Thunb.)Dippel.)干燥成熟果实的乙酸乙酯部位化学成分及对HepG2细胞的抑制作用。采用多种柱色谱技术和半制备HPLC分离技术,对野鸦椿果实的乙酸乙酯部分进行分离纯化,分离所得化合物运用核磁共振技术进行结构鉴定。并采用HepG2细胞模型对这些化合物的抗肿瘤作用进行探究。最终分离得到17个化合物,分别鉴定为齐墩果酸(1)、6β-羟基白桦脂酸(2)、木鳖子酸(3)、2-氧代坡模酸(4)、坡模酸(5)、熊果酸(6)、23-醛坡模酸(7)、1-氧泰国树脂酸(8)、annurcoic acid(9)、马斯里酸(10)、山柰酚(11)、柚皮素(12)、芹菜素(13)、木犀草素(14)、圣草酚(15)、没食子酸甲酯(16)、原儿茶酸(17)。其中,化合物2、9、12~15为首次从野鸦椿属中分离得到。化合物2、5、6、10、13对HepG2细胞有抑制作用。化合物5可抑制HepG2细胞增殖和迁移,阻滞细胞周期于G1期;促进细胞内活性氧的积累,降低线粒体膜电位,促进细胞凋亡。

枸杞叶黄酮对HepG2细胞脂质代谢的影响及作用机制

目的:以正常培养和油酸诱导培养的HepG2细胞为模型,探讨枸杞叶黄酮(Lycium barbarum leaves flavonoids,LBLF)对HepG2细胞脂质积累的影响。方法:实验划分为空白组、模型组、阳性对照组以及LBLF低、中、高剂量组。通过油红O染色判断各组别的脂滴聚集情况,并测定各组别脂质水平、氧化应激指标,最后通过实时聚合酶链式反应和Western blot检测脂质生成相关关键基因mRNA水平和蛋白水平的表达情况。结果:LBLF可减少油酸诱导的HepG2细胞内甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇以及丙二醛和活性氧的水平,提升高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、过氧化氢酶水平。同时,Western blot结果显示LBLF干预能上调磷酸化AMP活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase,p-AMPK)/AMPK水平,下调甾醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1c,SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome?proliferator-activated?receptor?γ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding proteinalpha,CEBPα)蛋白的表达;实时聚合酶链式反应结果表明,LBLF干预能下调ACC、FAS、SREBP-1c、SCD-1、PPARγ、CEBPα等基因的表达。结论:枸杞叶黄酮可通过调节脂质生成和氧化相关基因的表达水平,部分缓解由油酸诱导的HepG2细胞脂质代谢紊乱。

白茅根多糖理化性质及对HepG2细胞的降糖作用研究

该文以高温高压超声波辅助法提取白茅根多糖(Rhizoma imperatae polysaccharides,RPS),通过响应面法优化RPS提取工艺。经Sevag法脱蛋白,DEAE-DE纤维素52层析柱和Sephadex G-100凝胶层析柱分离纯化,得到2种RPS(RPS-DS 0和RPS-DS 0.1)。采用α-淀粉酶抑制实验,测定RPS的体外降糖作用。构建胰岛素抵抗HepG2细胞(insulin-resistant HepG2,IR-HepG2)模型,测定RPS-DS 0.1对IR-HepG2细胞中葡萄糖消耗量、糖原含量、己糖激酶和丙酮酸激酶活性的影响。结果表明,在液料比(mL∶g)为20∶1、提取温度112℃、提取时间15 min、超声波功率410 W、超声波处理时间25 min时,RPS质量分数得率为14.79%。RPS-DS 0和RPS-DS 0.1是分子质量分别为179.14 kDa和29.79 kDa的均一中性多糖。RPS-DS 0由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和甘露糖组成,其物质的量比为6.79∶9.68∶75.52∶4.38∶1.88。RPS-DS 0.1由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和葡萄糖醛酸组成,其物质的量比为2.48∶11.76∶20.08∶50.92∶10.25∶2.08∶2.12。RPS-DS 0和RPS-DS 0.1对α-淀粉酶的半数抑制浓度分别为0.40和0.21 mg/mL。细胞实验结果表明,RPS-DS 0.1能显著提高IR-HepG2细胞中葡萄糖消耗量、糖原含量、己糖激酶和丙酮酸激酶活性,调节糖代谢,从而达到降糖作用。

基于转录组测序分析葡萄籽原花青素对HepG2细胞基因及其相关功能的影响

目的:基于转录组测序分析葡萄籽原花青素对HepG2细胞基因及相关功能的影响,明确原花青素处理HepG2细胞的关键基因及代谢通路。方法:通过转录组测序,筛选差异基因,基因功能注释和KEGG通路的富集分析,进行葡萄籽原花青素处理细胞后的转录组学研究。结果:葡萄籽花青素处理HepG2细胞后主要富集到的生物学过程为细胞过程、代谢过程、生物调控过程、免疫系统过程、繁殖调节、生长调节。细胞凋亡的12个关键差异基因与TNF、p53、MAPK、PI3K-Akt、NF-κB信号通路密切相关。结论:细胞凋亡与TNF信号通路、p53信号传导途径、PI3K/Akt信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路密切相关。

辣椒素与槲皮苷通过EGFR/PI3K/Akt信号通路调节HepG2细胞脂质代谢作用机制

为探究辣椒素与槲皮苷协同调节肝脏脂质代谢的分子机制,本实验利用油酸诱导的HepG2高脂细胞模型,研究辣椒素单独处理及辣椒素与槲皮苷联合处理对HepG2细胞存活率的影响,采用油红O染色法观察HepG2细胞脂质积累情况,同时测定细胞内总甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆汁酸的含量水平,采用免疫印迹法测定表面生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)及法尼醇X受体1(farnesoid X receptor 1,FXR1)、胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、成纤维细胞生长因子19(fibroblast growth factor 19,FGF19)的表达量。结果显示,各处理组HepG2细胞的增殖率均大于75%,表明药物对细胞没有明显毒性,可进行后续实验。油红O染色结果表明,加药处理组细胞内脂质积累减少。辣椒素与槲皮苷处理可降低细胞内总甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,提高高密度脂蛋白胆固醇和胆汁酸含量;同时各实验组上调了EGFR、PI3K、Akt及FXR1、FGF19蛋白的表达水平。综合来看,辣椒素与槲皮苷在调节肝脏脂质代谢方面具有协同效应,二者在高剂量水平以3∶1比例混合效果最佳。

基于京尼平结构的衍生物设计与合成及其对HepG2细胞毒性的研究

目的:设计并合成一系列基于京尼平结构的环烯醚萜类衍生物,并探讨其对HepG2细胞的毒性作用,为寻找具有肝保护作用的药物提供一定的理论指导。方法:以京尼平为起始物,以三氟化硼乙醚为催化剂,在低温无水无氧体系下与低碳醇(甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇)进行S_(N)1取代反应,获得的产物经^(1)H-NMR进行结构表征;采用CCK-8法评价化合物对HepG2细胞的细胞毒性,并以谷胱甘肽为阳性对照,以IC_(50)值表示其毒性强弱。结果:设计并合成了6个京尼平衍生物,分别是1-O-甲基京尼平、1-O-乙基京尼平、1-O-正丙基京尼平、1-O-异丙基京尼平、1-O-正丁基京尼平、1-O-叔丁基京尼平,经^(1)H-NMR表征其结构正确。细胞实验显示,谷胱甘肽的IC_(50)值>1 000μmol/L,京尼平的IC_(50)值为(558.70±22.81)μmol/L,1-O-正丙基京尼平、1-O-正丁基京尼平的IC_(50)值分别为(537.40±188.10)μmol/L、(586.10±42.41)μmol/L,细胞毒性均低于谷胱甘肽,但与京尼平相近;1-O-异丙基京尼平的IC_(50)值为(628.30±38.72)μmol/L,低于谷胱甘肽,但高于京尼平;1-O-甲基京尼平、1-O-乙基京尼平、1-O-叔丁基京尼平的IC_(50)值分别为(324.30±55.67)μmol/L、(111.95±18.06)μmol/L、(91.10±15.20)μmol/L,均低于谷胱甘肽和京尼平。结论:合成了6个京尼平衍生物,获得了一条简单的、可控的京尼平衍生物的合成方法;其中京尼平衍生物1-O-正丙基京尼平、1-O-异丙基京尼平、1-O-正丁基京尼平对HepG2细胞毒性较小。

野鸦椿果实总三萜提取工艺考察及抑制HepG2细胞增殖活性研究

目的:明确野鸦椿果实总三萜的最佳提取工艺,并探究野鸦椿果实总三萜对HepG2细胞增殖的抑制作用。方法:以超声提取的方式,总三萜得率为指标,采用单因素试验结合响应面优化法考察野鸦椿果实总三萜最佳提取工艺。采用CCK-8法检测野鸦椿果实总三萜对HepG2细胞增殖抑制作用。结果:影响野鸦椿果实总三萜超声提取的因素顺序为溶剂浓度>提取时间>液料比,最优提取工艺条件为液料比为51∶1(mL·g^(-1)),甲醇浓度69%,提取时间58 min,提取率为(8.49±0.15)%。通过乙酸乙酯萃取和MCI柱色谱纯化后,野鸦椿总三萜纯度可达66.4%。野鸦椿总三萜对HepG2细胞增殖的抑制较好,呈剂量依赖性;IC_(50)为20.302±1.65μg·mL^(-1)。结论:野鸦椿果实总三萜超声提取最优工艺为液料比51∶1(mL·g^(-1)),甲醇浓度69%,超声提取58 min,该方法较为稳定,操作方便快捷。总三萜体外抑制HepG2细胞增殖效果良好。

异鼠李素通过下调Notch1通路抑制HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡

目的探究异鼠李素(Isorhamnetin,ISO)是否通过下调Notch1的表达来抑制肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡。方法使用细胞毒性实验噻唑蓝(MTT)法检测评估HepG2细胞存活率,并使用流式细胞仪分析细胞的凋亡水平。克隆形成实验反应不同异鼠李素浓度下HepG2细胞的增殖情况。采用Western blot测定P53、Bcl-2和Bax的表达情况。结果处理ISO后,HepG2细胞的存活能力表现出明显的剂量和时间依赖性抑制。在ISO处理24 h后,HepG2细胞系中诱导了凋亡。ISO处理以及敲除Notch1蛋白后,上调抑癌基因P53的表达,上调细胞凋亡相关蛋白Bax的表达以及下调Bcl-2的表达。进一步实验发现,Notch1 siRNA可以增强ISO的抗肿瘤特性。结论ISO通过下调Notch1通路抑制肝细胞癌(HCC)细胞的增殖并促进其凋亡。

海红米糠多糖的提取工艺、结构表征及抑制HepG2细胞增殖研究

该文主要考察了海红米糠多糖(sea red rice bran polysaccharide,SRBP)的提取工艺、结构表征及其抑制HepG2细胞增殖的情况。以海红米皮糠为原料,考察了不同提取方法对SRBP得率的影响。在单因素的基础上采用响应面法优化了SRBP的最佳提取工艺。采用苯酚硫酸法和间羟基联苯比色法测定其化学组成,液相色谱法测定分子质量及单糖组成,并用紫外、红外光谱、扫描电镜对其进行结构表征。采用噻唑蓝(methyl thiazolye tetrazolium,MTT)法测定SRBP对HepG2细胞生长的影响。实验结果表明,SRBP的最佳提取工艺条件为酶解时间61 min,料液比(g∶mL)1∶33,酶解温度59℃。经测定,SRBP是一种纯度较高的甘露糖吡喃型杂多糖,不含蛋白及核酸物质,表面粗糙、呈片状结构。MTT实验表明,SRBP在800μg/mL下对HepG2细胞作用24 h的存活率仅为(9.77±0.81)%,表明其具有抑制HepG2增殖的能力。综上可知,提取得到的SRBP具有一定的抗肿瘤活性,为其在饮食干预肝癌等方面提供了理论依据和数据参考。

载脂蛋白C1表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨载脂蛋白C1 (APOC1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步阐明其相关分子机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平及其与患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测不同肝癌细胞中APOC1mRNA表达水平,筛选APOC1低表达的人肝癌HepG2细胞作为研究对象。将pcDNA3.1-APOC1质粒转染至HepG2细胞过表达APOC1 (APOC1过表达组),以转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞为对照组,采用MTS法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测2组细胞增殖活性和增殖率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移细胞数,流式细胞术和TUNEL法检测2组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测2组细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、蛋白激酶B (AKT)、磷酸化AKT (p-AKT)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:TCGA数据库分析,肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平低于正常肝组织(P<0.05),并且APOC1 mRNA低表达组肝癌患者预后较差。RT-qPCR法检测,HepG2细胞中APOC1 mRNA表达水平最低,选取该细胞作为后续研究对象。与对照组比较,APOC1过表达组细胞增殖活性和增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.01), S期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与对照组比较,APOC1过表达组细胞中p-ERK、 p-AKT和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:APOC1高表达能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制p-ERK、p-AKT、Bcl-2蛋白表达和促进cleaved caspase-3蛋白表达有关。

HepG2细胞Six4蛋白表达对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的体外观察敲除HepG2细胞Six同源盒蛋白4(Six4)对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法采用Six4慢病毒shRNA感染HepG2细胞,筛选基因敲除细胞和正常对照细胞,采用CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色检测细胞增殖,采用Transwell小室实验检测细胞迁移,采用Western blot法检测蛋白表达。结果基因敲除细胞吸光度、EdU染色阳性率和侵袭细胞数分别为(1.19±0.22)、(31.63±7.43)%和(65.71±10.02)个,均显著低于正常对照细胞【分别为(2.18±0.30)、(76.51±8.84)%和(120.14±11.85)个,P<0.05】;基因敲除细胞E-cadherin表达显著强于,而N-cadherin、Vimentin和Six4蛋白表达显著弱于正常对照组细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HepG2细胞SIX4对细胞活力和上皮-间充质转化有重要影响,可能成为潜在的治疗靶点需要进一步研究。

茶黄素通过调节Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨茶黄素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路的影响。方法 肝癌HepG2细胞用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μmol/L的茶黄素分别培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测HepG2细胞活性。根据HepG2细胞活性实验结果将后续实验分为空白对照组,茶黄素低剂量(20μmol/L)组、中剂量(40μmol/L)组和高剂量(80μmol/L)组,细胞培养24 h。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡;Western blot检测HepG2细胞中Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HepG2细胞中GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量。结果 与空白对照组相比,茶黄素组HepG2细胞增殖显著降低(P<0.05)、凋亡率显著增加(P<0.05),GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),Ki67、PCNA、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量显著下调(P<0.05),而cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达量显著上调(P <0.05)。结论 茶黄素可通过调控Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。

翼核果素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响

目的研究翼核果素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移的影响。方法通过CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验、荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western印迹研究翼核果素对肝癌HepG2细胞的影响。结果与空白对照组比较,翼核果素对HepG2细胞增殖、集落形成有显著抑制作用,可显著降低细胞迁移率,对原癌基因(c-Myc)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)3 mRNA表达有显著的抑制作用,对细胞骨架蛋白β微管蛋白(tubulin)、埃兹蛋白(Ezrin)表达有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01),但对c-Jun mRNA表达无明显影响(P>0.05)。结论翼核果素对HepG2细胞增殖迁移有抑制作用,机制可能与下调c-Myc、FGFR3、β-tubulin、Ezrin表达有关。

基于转录组测序技术分析补骨脂素对HepG2细胞的作用机制

目的利用转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术分析补骨脂素对肝癌HepG2细胞的作用机制。方法利用CCK-8法检测不同浓度的补骨脂素(0、62.5、125、250、500μM)作用HepG2细胞12 h和24 h后存活率的变化;流式细胞术检测250μM补骨脂素对HepG2细胞处理24 h后细胞周期的变化;RNA-seq测序获得对照组和补骨脂素组差异表达基因并进行GO富集分析和KEGG通路分析;实时荧光定量PCR技术验证差异基因表达水平。结果与对照组相比,补骨脂素作用HepG2细胞后,其存活率明显下降(P<0.01),细胞周期在G0/G1期比例提高(P<0.05);RNA-seq测序分析共有286个差异显著基因,其中包括130个上调基因和156个下调基因;GO功能富集和KEGG信号通路主要集中在细胞周期相关生物学过程及信号通路;qPCR结果显示HepG2细胞经补骨脂素处理后p 53和GADD 45B基因上调(P<0.05,P<0.01),CDK 2、RRM2和CCND 1基因下调(P<0.05,P<0.01)。结论补骨脂素对HepG2细胞产生毒性,阻滞细胞周期进程,其作用机制可能与调控细胞周期相关基因(p 53,CDK2,GADD45B,CCND1,RRM2)的表达有关。