幽门螺杆菌对肝癌细胞HepG2的体外细胞毒作用

背景与目的:幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因,人和动物胃肠外疾病亦与HP感染密切相关,本研究探讨HP对肝癌细胞株HepG2的形态和生长的影响。方法:利用体外细胞培养技术,将不同浓度的cagA(+)HP和cagA(-)HP与HepG2共同培养,应用细胞形态学观察、DNA电泳、透射电镜、MTT检测、酶学检测等技术,观察HP菌液对体外培养HepG2细胞的形态、生长速度和酶学改变的影响。结果:(1)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大和作用时间的延长,HepG2细胞形态由贴壁的梭形变为圆形,贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,并且细胞周围出现碎片;(2)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大,可见DNA条带;(3)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大和作用时间的延长,HepG2细胞核染色质浓缩,呈新月形聚集于核缘,胞质浓缩,可见空泡;(4)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大,对HepG2细胞杀伤率逐渐增强(P<0.01);(5)与cagA(+)HP菌液共同孵育后,HepG2细胞出现ALT、LDH升高(P<0.01);(6)未发现cagA(-)HP对陈仁,等.幽门螺杆菌对肝癌HepG2细胞生长的影响。结论:cagA(+)HP对HepG2细胞具有明显的体外细胞毒作用,其毒性作用与HP菌液的浓度和作用时间呈明显正相关。

HIFU逆转人肝癌细胞HepG2/Adm多药耐药的实验研究

背景与目的:超声波能够改变细胞膜通透性,增强化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究评价高强度聚焦超声及其联合阿霉素(Adriamycin,ADM)对人肝癌多药耐药细胞株HepG2/Adm的效应,并探讨其作用机制。方法:取对数生长期的HepG2、HepG2/Adm细胞进行实验,分为HepG2、HepG2(超声波照射5s)、HepG2/Adm、HepG2/Adm(超声波照射5s)4组。用MTT法检测处理前后耐药细胞对抗癌药物的敏感性;用流式细胞仪检测肿瘤细胞表面mdr1基因表达产物P170的表达及细胞内阿霉素浓度;利用SP免疫组化法观察细胞膜及核膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果:频率0.8MHz、焦域声强460W/cm2连续照射5s,能够部分逆转HepG2/Adm细胞的耐药性,HepG2/Adm细胞P-gp的表达活性下降83.1%,耐药细胞内ADM浓度增加88%,对ADM、cDDP、MMC、5-FU和MTX相对逆转效率分别为66.4%、63.4%、89.4%、72.4%和75.0%。结论:高强度聚焦超声可提高人肝癌细胞HepG2/Adm内药物浓度,降低细胞膜及核膜表面P-gp表达,从而部分逆转肿瘤细胞多药耐药。

顺铂诱导人胃癌细胞SGC7901和人肝癌细胞HepG2凋亡的细胞形态学变化的比较

目的观察顺铂诱导人胃腺癌细胞SGC7901和人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的细胞形态学的异同并探讨其意义。方法用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞经顺铂处理后的形态学改变。采用流式细胞术研究CDDP对两株肿瘤细胞诱导凋亡中DNA含量的影响。结果经顺铂处理后,两株肿瘤细胞均表现出一些共同的凋亡形态学特征,如细胞及细胞核皱缩,微绒毛消失,细胞膜皱缩但完整,细胞内荧光强度增强。细胞超微结构变化如线粒体肿胀,胞质空泡化。但两者在细胞核形态方面表现出较大的差异;SGC7901表现为核染色质呈团块状或环状,聚集于核膜下;而HepG2主要表现为核碎裂、核膜崩解,核染色质呈梅花状散落在细胞中和一些细胞器通过细胞出芽裂解成由细胞膜包绕的凋亡小体并被周围细胞吞噬。在两者的流式细胞DNA的直方图上均检测到了亚二倍体峰。结论顺铂可诱导SGC7901和HepG2产生不同形态的细胞凋亡,其中SGC7901主要表现为核固缩,HepG2表现为核碎裂。这种差异具有重要的生理意义。

基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较

以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的N-糖链进行了定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系HepG2和正常细胞系L02中共检测到26种N-糖链,与L02相比,HepG2的大多数高甘露糖型糖链、唾液酸化糖链和岩藻糖基化糖链的数量都明显升高,其中有15种糖链在数量上具有极显著性差异(p<0.01),1种糖链具有显著性差异(p<0.05).本研究为进一步探索肝癌中各类N-糖链的表达特点及发现早期肝癌糖链标志物提供了参考.

抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖的影响

目的:探索通过RNA干涉技术抑制gankyrin的表达对肝癌细胞系HepG2增殖及细胞周期的影响.方法:建立稳定表达靶向gankyrin的shRNA的HepG2细胞系.通过Westernblotting验证基因表达的抑制效果.采用细胞计数及MTT法检测细胞的增殖能力.流式细胞仪分析细胞周期.结果:抑制gankyrin基因的表达显著抑制了HepG2细胞的生长,与转染阴性对照shRNA质粒细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低(d6:24.4×103±5.2×103vs123.3×103±2.8×103,P<0.05),MTT分析显示细胞增殖率明显下降(144h:7.53±0.50vs16.30±0.38,P<0.05),流式细胞分析示细胞周期阻滞在G1期(G1:71.63±3.60%vs52.57±2.82%,P<0.05).结论:在HepG2细胞中抑制gankyrin的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞.利用RNA干涉技术抑制gankyrin的表达可能会成为一种有效的肝癌基因治疗手段.

大黄素在体外诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的初步研究

背景与目的:大黄素(3-甲基-1,6,8-三羟蒽醌)是大黄等多种中药的有效成分之一。研究表明大黄素对于乳腺癌细胞、肺癌细胞的生长具有抑制作用,但目前大黄素抗肿瘤的作用机理尚不明确。本研究拟讨论大黄素在体外对肝癌细胞HepG2的作用及其机理。方法:应用MTT、软琼脂克隆形成、DNAladder凝胶电泳及流式细胞术等方法,研究中药单体大黄素对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响以及作用机理。结果:大黄素在较低浓度可抑制肿瘤细胞的生长,MTT实验测得的半数抑制浓度(IC50)为(36±2.6)μg/ml。在软琼脂实验中,大黄素可以浓度依赖的方式抑制细胞克隆的形成。经DNAladder及流式细胞仪检测发现,大黄素能诱导HepG2细胞凋亡,与阴性对照相比,随着药物浓度从10μg/ml增加到20μg/ml,AnnexinV染色细胞显著增多,由27.3%增至59.6%;当药物浓度增至40μg/ml时,培养液中几乎无活细胞,由碘化丙啶和AnnexinV双重标记的凋亡后期以继发性坏死细胞为主。结论:中药单体大黄素在体外能抑制肝癌细胞HepG2的生长增殖,并能诱导该细胞凋亡。

槐耳联合顺铂体外诱导肝癌细胞HepG2自噬的实验研究

目的观察槐耳联合顺铂是否能诱导Hep G2细胞自噬及探讨其对自噬相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用槐耳浸膏、顺铂及槐耳浸膏联合顺铂干预Hep G2细胞。用MTT法检测细胞活性;光学显微镜观察Hep G2细胞自噬的形态学改变;Western blot检测自噬相关蛋白P53、P-Akt、Akt表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞的形态改变;MTT实验显示槐耳及顺铂均可抑制Hep G2细胞的生长,呈时间及浓度依赖性;各药物组细胞P-Akt蛋白表达水平下降,Akt和P53表达升高。结论槐耳给药可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路激活肝癌Hep G2自噬。

血卟啉单甲醚对人肝细胞癌细胞系HepG_2的光动力杀伤效应

目的光动力治疗是一种有效的局部肿瘤治疗手段。包括光敏剂的注射及激光照射两部分;观察以HMME作为光敏剂,再辅以630 nm二极管激光照射对人肝细胞癌细胞HepG2的光动力杀伤效应。方法应用MTT技术来检测HepG2细胞的抑制率;

真核表达的人Y盒结合蛋白1(YB-1)促进人HepG2肝癌细胞的增殖和迁移

目的构建带有FLAG标签的Y盒结合蛋白1(YB-1)真核表达载体,转染至HepG2肝癌细胞探究YB-1对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法以人卵巢文库为模板并采用PCR扩增出YB-1基因片段,经双酶切后与pcDNA3.0-FLAG载体连接,构建pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核表达载体;将其转染至HepG2细胞,通过Western blot法验证YB-1在HepG2细胞的表达;CCK-8法和集落形成实验验证YB-1对HepG2细胞生长的影响;划痕实验验证YB-1对HepG2细胞迁移的影响。结果成功构建出pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核重组表达载体,且能在HepG2细胞中表达YB-1蛋白;YB-1能够促进HepG2细胞的增殖和迁移。结论YB-1促进HepG2细胞的增殖和迁移。

转ARL-1基因HepG2细胞耐药相关基因的筛选

背景与目的:醛糖还原酶相似基因1(aldose-reductaselikegene-1,ARL-1)在原发性肝癌中高表达,与肝癌细胞对化疗药物耐药有关。本研究拟建立转染ARL-1的人肝癌细胞株,观察转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物耐药性的改变,利用基因表达谱芯片筛选HepG2细胞转染ARL-1后差异表达耐药相关基因。方法:采用脂质体转染PBK/ARL-1质粒到HepG2细胞,获得高表达ARL-1的单克隆细胞株;RT-PCR、流式免疫荧光和免疫组化鉴定高表达ARL-1的HepG2细胞;应用MTT法和细胞凋亡分析研究HepG2细胞和转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物阿霉素(ADM)和丝裂霉素(MMC)的耐药性,以5-氟尿嘧啶(5-FU)(不含醛基)为对照;将Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记两种细胞的cDNA探针,与人肝癌基因表达谱芯片进行杂交与扫描,观察转染ARL-1基因HepG2与对照组HepG2细胞在基因表达谱方面的差异,筛选耐药相关基因,并运用RT-PCR和Westernblot对部分差异表达相关基因进行初步证实。结果:与对照组HepG2细胞相比,转染ARL-1基因HepG2细胞高表达ARL-1蛋白,明显增强对含醛基的抗肿瘤药物如ADM、MMC的耐药性,分别提高2.6倍和3.47倍,用5-FU处理两组细胞,则未发现有明显的耐药差异(ADM组t=6.39,P<0.05;MMC组t=30.06,P<0.01;5-FU组t=0.684,P>0.05);芯片扫描结?

二噁英对HepG2和SPC-A1细胞P53和P38 MAPK基因表达的影响

[目的 ]探讨二英 (TCDD)对人体肝癌细胞株 (HepG2 )和肺腺癌细胞株 (SPC A1)中P5 3基因和P3 8MAPK基因表达的影响 ,并研究剂量与效应的关系。 [方法 ]用常规的细胞培养方法 ,利用RT PCR方法对 2种基因进行表达 ,并以 β actin作为内对照。对基因表达的强度进行比较分析。[结果 ]P3 8MAPK基因在 2种细胞中都有表达 ,在HepG2中 ,P3 8MAPK基因表达随浓度 1、5、10、2 0nmol/L增加先抑后扬 (表达值分别为 0 .90 0、0 .82 0、1.2 60、0 .898,P <0 0 5 ) ,而在SPC A1中差异无显著性 (表达值分别为 0 .898、 0 .919、 0 .80 8、 0 .846,P >0 0 5 )。P5 3基因在人体肝癌细胞株(HepG2 )中有表达 ,并随浓度增加而上调 (表达值分别为 0 .764、0 .890、1.0 99、1.2 18、1.40 5 ,P <0 .0 5 )而在肺腺癌细胞株(SPC A1)中未见表达。 [结论 ]二英对人体肝癌细胞株 (HepG2 )中P5 3基因和P3 8MAPK基因有诱导作用 ,在肺腺癌细胞株 (SPC A1)中仅见对P3 8MAPK基因有诱导作用 ,P5

腺病毒介导蜂毒素基因转染对HepG2细胞生长及 AFP表达的影响(英文)

目的 :将蜂毒素基因置于甲胎蛋白 (AFP)转录调控元件 (r AFP)驱动之下 ,构件重组腺病毒载体 ,观察蜂毒素基因转染对肝癌细胞生长及 AFP表达的影响。 方法 ::将蜂毒素基因置于 r AFP之后 ,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中 ,将腺病毒质粒用 Pac 酶切线性化后 ,用脂质体介导转染 2 93细胞进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后 ,RT- PCR实验观察蜂毒素基因是否发生转录 ;MTT法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响 ;EL ISA双抗体夹心法定量检测 AFP。 结果 :RT- PCR实验表明蜂毒素基因转染肝癌细胞后可以被转录 ;蜂毒素基因在 r AFP的控制下 ,可以特异性的抑制 AFP阳性肝癌细胞的增殖 ,并降低其 AFP的生成量。结论 :蜂毒素基因转染对肝癌细胞的生长及 AFP的表达具有抑制作用 。

TGF-β1对HepG2细胞表达VEGF的作用

目的:研究ERK在TGF - β1刺激肝癌细胞表达血管内皮生长因子中的作用。方法:体外培养肝癌细胞系HepG2 ,施加外源性TGF - β1,并使用细胞外信号调节激酶ERK1/2的特异性阻断剂。免疫组化以及RT -PCR检测VEGF蛋白和mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,施加外源性TGF - β1能够使肝癌细胞VEGF的蛋白及mRNA的表达显著增多,但是同时使用阻断剂组的VEGFmRNA表达与TGF组相比没有明显差异。结论:TGF - β1刺激肝癌细胞HepG2表达VEGF可能通过ERK/MAPK以外的信号通路实现。

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 12 5、2 5 0、5 0 0、10 0 0及 2 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALad der)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果显示 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;δ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。结果提示 ,维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ

增强型绿色荧光蛋白与单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶共表达质粒载体构建及在肝癌细胞株HepG2表达的研究

目的构建增强型绿色荧光蛋白与单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因的真核共表达质粒载体pIRES2-EGFP-TK,并鉴定其在肝癌细胞株HepG2中转染和表达。为肝癌靶向基因治疗提供实验依据。方法2008年6月重庆医科大学附属第二医院从含有目的基因的质粒PORF-HSV1-TK中获得HSV1-TK基因片段,连接到增强型绿色荧光蛋白共表达载体pIRES2-EGFP,得到重组质粒pIRES2-EGFP-TK并进行鉴定、测序。将重组质粒用脂质体法转染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)在细胞内的表达,逆转录聚合酶链反应RT-PCR检测胸苷激酶TK的mRNA表达水平,免疫印迹Western blotting法检测TK蛋白表达情况,新霉素类似物G418筛选出阳性克隆。结果重组克隆载体内的TK序列与GeneBank报告的序列完全一致。肿瘤细胞转染后在荧光显微镜下可观察到有绿色荧光出现,G418筛选的最佳浓度为600mg/L,TK的mRNA表达水平高,TK蛋白有明显表达。结论实验成功构建EGFP和TK真核共表达载体,在肝癌细胞能有效的表达。

奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响

奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)是第三代铂类化合物,其化学名为左旋反式二氨环己烷草酸铂,国际通用名为草酸铂.临床前研究表明该药对人和鼠多种肿瘤细胞均有抑制作用,且对各种顺铂耐药的肿瘤细胞株无交叉耐药.研究通过抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响,为奥沙利铂应用于肝细胞癌的临床治疗提供理论依据.

阿可拉定长循环脂质体的制备与药效学评价

目的制备阿可拉定长循环脂质体(icaritin PEGylated liposomes,Ica-Lips),并评价其对人源肝癌细胞(hepaloblasloma G2,HepG2)的体内抗肿瘤效果。方法采用冷冻干燥-水化法制备Ica-Lips,并在透射电镜下观察Ica-Lips的微观形态,测定Ica-Lips的包封率、粒径分布、Zeta电位,以及在pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)以及大鼠血浆中的药物释放特性;并考察了Ica-Lips的稳定性;比较了Ica-Lips与Ica原料药在大鼠体内的药动学行为,评价Ica-Lips对小鼠接种人源肝癌细胞(HepG2)的抑瘤效果。结果制备的Ica-Lips呈类球状分布,其包封率为96.4%±0.3%,平均粒径为(108.4±3.6)nm,Zeta电位为(-12.9±0.2)mV;与Ica-Lips在pH7.4 PBS中的释药速率相比,其在大鼠血浆中的释药速率明显加快;Ica-Lips在低温条件下保存3个月,稳定性良好;药动学研究表明,Ica-Lips可显著延长药物在大鼠体内的滞留时间,增加药物的生物利用度;药效学研究表明,Ica-Lips对小鼠接种人源肝癌细胞(HepG2)的抑瘤效果显著高于Ica溶液(P<0.05)。结论将阿可拉定制备成长循环脂质体,提高了抗肿瘤效果,具有潜在的临床应用价值。

氧化苦参碱对HepG-2与A549细胞增殖抑制与促凋亡活性比较研究

目的研究氧化苦参碱在体外对人肺癌细胞(A549)、人肝癌细胞(HepG-2)增殖抑制与促凋亡活性,并进行比较。方法通过MTT比色法和生长曲线法比较氧化苦参碱对两种肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,采用HE染色、Hoechst 33258荧光染色和透射电镜3种方法比较氧化苦参碱对两种肿瘤细胞形态的影响及促凋亡作用。结果 MTT结果显示,与对照组比较,氧化苦参碱200、400、800μg/m L浓度组A549、HepG-2细胞存活率均显著降低(P<0.05、0.01),半数抑制浓度(IC50)分别为1 055.45、774.11μg/m L;生长曲线结果显示,与对照组比较,氧化苦参碱组HepG-2细胞培养第4、5天及A549细胞第5天细胞数显著下降(P<0.05、0.01);在HE染色、Hoechst 33258荧光染色和透射电镜形态学观察实验中,氧化苦参碱对HepG-2细胞作用较明显,细胞数量明显减少,同时出现细胞绒毛减少、细胞核变小变圆、固缩等明显的细胞凋亡形态学特征,对A549细胞形态的影响较弱。结论氧化苦参碱具有抑制肿瘤细胞增殖和促进凋亡的作用,对HepG-2作用较强,对A549作用较弱,具有一定的特异性。

6种鸢尾黄素曼尼希碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的:对鸢尾黄素进行结构修饰,寻求新的具有抗肿瘤活性的化合物。方法:以鸢尾黄素为先导化合物,分别加入乙醇胺、甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、正丙胺等胺类试剂和甲醛溶液,经曼尼希(Mannich)反应得到鸢尾黄素曼尼希碱衍生物,根据红外光谱、紫外光谱、质谱、核磁共振等确定其结构。采用溶解度试验法考察鸢尾黄素及其衍生物的水溶性;采用MTT法考察鸢尾黄素及其衍生物对人结肠癌细胞株HCT116、人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50);以H22肝癌荷瘤小鼠为模型,考察鸢尾黄素及其衍生物(剂量均为100 mg/kg)的体内抑瘤率。结果:共合成6个鸢尾黄素曼尼希碱衍生物,分别为8-(N-羟乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-甲基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N,N-二乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N,N-二甲基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-正丙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮(依次记为化合物1~6)。与鸢尾黄素比较,6个衍生物的水溶性明显提高,溶解度是鸢尾黄素的5~20倍;其中化合物1、3、5对HCT116细胞的IC50分别为(34.82±3.27)、(16.21±4.13)、(33.12±3.25)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(45.23±5.74)μmol/L];对A549细胞的IC50分别为(37.05±5.74)、(26.88±4.52)、(30.13±6.23)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(53.24±6.34)μmol/L];对HepG2细胞的IC50分别为(23.74±1.45)、(18.96±2.34)、(30.95±2.87)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(48.98±2.58)μmol/L];对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤率分别55.51%、57.20%、49.15%,且均高于鸢尾黄素的抑瘤率(33.05%),其余3个化合物相比鸢尾黄素的抗肿瘤活性无明显优势。结论:在本研究合成的6个鸢尾黄素曼尼希碱衍生物中,化合物1、3、5均具有强于鸢尾黄素的抗肿瘤活性。