蝎毒多肽提取物联合5-氟尿嘧啶对H_(22)肝癌血管生成拟态形成的作用及机制研究

目的观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对小鼠H22肝癌移植瘤血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的抑制作用并探讨其可能的作用机制。方法 60只昆明小鼠,皮下接种H22肝癌细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组)、联合组(PESV+5-Fu),每组20只,连续干预14天,隔日测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积增殖曲线,并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织的形态学改变;免疫组织化学法和过碘酸雪夫氏染色(PAS)双标法检测各组肿瘤组织VM密度;免疫组织化学法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的蛋白表达水平,用LeicaQwin V3图像分析软件进行灰度值半定量分析。结果联合组和5-Fu组H22肝癌移植瘤的生长较荷瘤对照组均受到明显抑制(P<0.05),且联合组和5-Fu组瘤重和肿瘤体积亦存在显著差异(P<0.05);免疫组织化学法和PAS双标法检测显示,联合组VM密度明显低于荷瘤对照组和5-Fu组(P<0.01);与荷瘤对照组比较,联合组HIF-1α和MMP-2的蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论 PESV联合5-Fu可抑制小鼠H22肝癌移植瘤VM形成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中HIF-1α和MMP-2的表达有关。

Th22细胞及IL-22因子在原发性肝细胞肝癌发生发展中的表达及意义

目的:研究Th22细胞及IL-22分子在原发性肝细胞肝癌发生发展中的表达及意义。方法:选取2015年1月至2016年12月于温州医科大学附属第三医院住院治疗的慢性乙肝肝硬化患者42例(肝硬化组),肝癌伴乙肝肝硬化患者38例(肝癌组),及门诊健康受检者30例(健康对照组),慢性乙型肝炎患者21例(慢性乙肝组)。收集各组谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和白蛋白(ALB)信息,并分别收集清晨空腹肘静脉血2份,一份用ELISA方法测定IL-22表达水平,另一份用流式细胞仪测定Th22细胞含量。统计分析各组指标的差异。结果:肝硬化组和肝癌组患者的AST、ALT、TBIL和ALB显著高于慢性乙肝组和健康对照组(P<0.01),肝癌组患者AST、ALT、TBIL和ALB高于乙肝肝硬化组(P<0.01),慢性乙肝组和健康对照组间AST、ALT、TBIL和ALB差异无统计学意义(P>0.05)。此外,随着肝癌的发生发展,AST、ALT、TBIL和ALB逐渐升高(P<0.05)。肝硬化组及肝癌组的Th22细胞含量及IL-22表达水平均高于慢性乙肝组和健康对照组(P<0.05),肝癌组的Th22细胞含量及IL-22表达水平高于肝硬化组(P<0.05),慢性乙肝组的Th22细胞含量及IL-22表达水平与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。随着肝癌的发生发展,Th22细胞含量及IL-22表达水平逐渐升高(P<0.05)。结论:Th22及IL-22水平可能与肝癌的发生发展具有相关性。

慢性乙肝病毒感染各阶段患者外周血单个核细胞中IL-22 mRNA的表达水平及其临床意义

目的:分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)、慢加急性/亚急性重型肝炎(重型肝炎)、乙肝肝硬化和乙型肝炎病毒(HBV)相关性原发性肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素22(IL-22)mRNA的表达水平及其可能的临床意义。方法:收集20名健康对照者(健康对照组)、33例CHB中度患者(CHB中度组)、21例CHB重度患者(CHB重度组)、16例重型肝炎患者(重型肝炎组)、16例乙肝肝硬化患者(肝硬化组)和40例HCC患者(HCC组)的临床资料。RT-PCR半定量分析各组研究对象PBMCs中IL-22mRNA表达水平;Pearson相关分析法分析IL-22mRNA表达水平与临床重要检测指标的相关性。结果:CHB中度、CHB重度和肝硬化组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平均高于健康对照组(P<0.001);重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P=0.830);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平明显低于健康对照组(P<0.001)。CHB重度组患者和重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与总胆红素(TB)水平呈明显负相关关系(r=-0.383,P=0.043;r=-0.619,P=0.028);HCC组患者PBMCs中IL-22 mRNA表达水平与血清甲胎蛋白(AFP)水平呈明显正相关关系(r=0.664,P=0.000)。结论:慢性乙肝重症化过程中,患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平低下提示肝细胞再生障碍,且IL-22mRNA表达水平与TB一样能够反映患者病情严重程度。IL-22可能对HCC的发生发展起促进作用。

Th22/Th17细胞免疫平衡在乙肝相关性肝癌发生和发展中的作用

目的探究Th22/Th17细胞免疫平衡在乙肝相关性肝癌发生和发展中的作用。方法收集2016年1月到2018年1月青海省第五人民医院收治的乙肝相关性肝癌患者(观察组) 30例及体检健康者(对照组) 30例,应用酶联免疫吸附法检测两组血清IL-17、IL-22的含量,比较两组血清IL-17、IL-22的水平,并检测患者肝功能,分析IL-17、IL-22水平与肝功能血清生化指标的相关性。采用流式细胞术检测两组外周血Th17和Th22细胞的外周频率,分析Th17、Th22细胞水平与肝功能血清生化指标的相关性。结果观察组中血清IL-17、IL-22的含量以及Th17和Th22细胞的外周频率较对照组高(P <0. 05),且观察组IL-17、IL-22与血清GGT、AKP水平呈正相关关系(P <0. 05),Th17、Th22细胞百分率与血清中GGT、AKP水平呈正相关关系(P <0. 05)。结论乙肝相关性肝癌的发生和发展与Th22、Th17细胞异常表达相关,IL-17、IL-22可在一定程度上反映肝脏的免疫炎症程度。

可移植性小鼠肝癌的脂质过氧化及其对红细胞...

以BALB/C近交系小鼠和NIH小鼠(封闭群)为实验动物,可移植性小鼠肝癌(H_(22))作肿瘤模型,比较了肝癌和正常肝组织的脂质过氧化物含量,研究了肿瘤对其宿主紅细胞、肝、脾和心脏脂质过氧化的影响。结果表明,不仅肿瘤组织本身的脂质过氧化反应弱,脂质过氧化产物少,而且还影响其宿主的紅细胞、肝、脾和心脏的脂质过氧化反应,造成这些细胞或组织的脂质过氧化产物减少。此外,肿瘤这种对宿主脂质过氧化的影响还有明显的性别差异,即雄性宿主肿瘤外其他组织脂质过氧化反应减弱更为显著。

贞芪扶正颗粒联合奥沙利铂对H_(22)荷瘤小鼠的抑制效果及对MyD88、NF-κB p65的影响

目的:观察贞芪扶正颗粒联合奥沙利铂对H_(22)移植瘤的抑制效果并探讨肿瘤相关髓样分化因子(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核因子-κB(Nuclear Factor-κB p65,NF-κB p65)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的调节机制。方法:72只KM小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、奥沙利铂10 mg/kg组、贞芪扶正颗粒0.026、0.013、0.007 g/kg+奥沙利铂10 mg/kg组,建立H_(22)荷瘤小鼠模型,经药物干预10 d后,剥取瘤体,进行瘤体测量、称重和抑瘤率分析;HE染色法观察瘤体组织形态学变化;Elisa法测定血清中TNF-α蛋白含量;WB和qPCR法分别检测瘤体中MyD88、NF-κB p65蛋白和mRNA水平。结果:与奥沙利铂10 mg/kg组相比,奥沙利铂10 mg/kg+贞芪扶正颗粒0.026、0.013、0.007 g/kg组瘤体体积和体质量均明显减小(P<0.05或P<0.01),抑瘤率上升;HE染色观察发现各治疗组坏死肿瘤细胞增多、细胞核碎裂并消失,其中0.026 g/kg组可见纤维组织增生;血清中TNF-α水平显著增高(P<0.01),瘤体组织中MyD88、NF-κB p65蛋白和mRNA水平显著下调(P<0.05),且呈现贞芪扶正颗粒浓度剂量依赖性关系。结论:贞芪扶正颗粒具有促进奥沙利铂抑制H_(22)移植瘤增长的作用,其分子机制可能与调节MyD88、NF-κB p65和TNF-α水平有关。

IL-22在肝炎、肝癌中的研究进展

IL-022是2000年才发现的细胞因子，主要由Th22细胞分泌，以皮肤，胰腺，肝脏等组织细胞为主要靶细胞。IL-22可激活JAK—STAT3信号通路，诱导组织细胞的多种基因表达上调，这些基因涉及组织重塑、血管生成、趋化细胞因子生成、纤维化形成等。因此，IL-22在感染免疫、组织修复、肝炎产生和肝癌形成中起重要免疫病理作用。大量的文献报道IL-22在刀豆蛋白、四氯化碳等介导的T细胞肝炎中起着减轻细胞损伤、促进细胞增殖和加速组织修复等保护性作用，但也有些证据表明IL-22在HBV感染中促进炎症发生和诱导肝癌形成。故进一步阐明IL-22在肝炎和肝癌中的作用对肝炎的治疗和肝癌的预防有重要意义。

辅助性T细胞22细胞在肝癌恶性腹水中募集和分化的机制

目的研究辅助性T细胞（Th）22细胞在恶性腹水（MA）及同源外周血中的分布及其表型特征，探讨Th22细胞分化和募集浸润至腹腔的机制。方法流式细胞术检测Th22细胞在MA和外周血中的分布和表型。重组人细胞因子刺激MA和外周血中初始CD04^＋T细胞，观察其分化成Th22细胞的情况。检测外周血来源的CD04^＋T细胞在体外向MA上清液趋化，并加入人抗CC类趋化因子（CCL）20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体观察阻断效应。结果MA中Th22细胞比例[（3.22±0.40）%，n＝37]明显高于对应外周血[（0.79±0.20）%，n＝37，P＝0.006）和健康对照组[（0.63±0.11）%，n＝10，P＝0.002]，Th17细胞在MA中比例[（3.30±0.18）%]也明显高于对应外周血[（0.79±0.15）%，n＝37，P＝0.008]及健康对照组[（0.67±0.12）%，n＝10，P＝0.001]，且两种细胞比例呈正相关（P＝0.002）。MA和外周血中Th22细胞的CD45RO、CC类趋化因子受体（CCR）4、CCR6和CCR10表达水平高于CD45RA、CD62L、CCR3、CCR5。CD4^＋T细胞向Th22细胞分化过程中，白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β起促进作用，干扰素-γ（IFN-γ）起抑制作用，且Th22细胞受IL-6的促分化作用呈现时间剂量依赖性。MA上清液对外周血Th22细胞有明显的趋化效应，加入抗CCL20、抗CCL22、抗CCL27单克隆抗体则表现为阻断此趋化作用。结论MA中的趋化因子与炎性细胞因子在腹膜腔内共同作用使MA中Th22细胞比例明显高于外周血，Th22细胞可能参与MA的发病过程并发挥一定的免疫调节作用。

不同转移倾向小鼠肝癌瘤株与冰切组织体外作用的实验研究

本实验利用小鼠腹水型肝癌(H_(22))的肺转移倾向亚株(H_(22)SP_(10))与淋巴结转移倾向亚株(H_(22)SL_(10))和小鼠的心、肺、肝、肾、淋巴结冰切组织于体外混合培养,观察了不同转移能力的肿瘤细胞与正常组织间的相互作用。于混合培养24、48h后,计数冰切组织上粘附的肿瘤细胞,肝、肾、淋巴结上粘附的H_(22)细胞多于其它脏器。H_(22)SP_(10)主要粘附于肝、肾、肺,而H_(22)SL_(10)则主要粘附于淋巴结,几乎不粘附于肺组织。混合培养后的生长曲线表明加入的正常组织对三种瘤细胞生长具有不同作用,加入的五种组织对H_(22)生长均有促进作用,加入心、肝、肾组织使H_(22)SP_(10)细胞于培养48h之前呈递增趋势,而加入肺、淋巴结组织使H_(22)SP_(10)细胞生长数低于对照组,加入心脏组织96h后H_(22)SL_(10)细胞数开始高于对照组,而加入其它组织均使H_(22)SL_(10)细胞数低于对照组。该结果表明在活体中呈器官倾向性转移的瘤细胞在体外具有与相应组织特异性粘附的能力,而且这些细胞与不同宿主组织间存在不同相互作用。

不同转移倾向肿瘤亚株细胞内的微核观察

为了探讨恶性肿瘤转移与微核现象间的关系,本实验首次运用微核试验(MT)检测了小鼠腹水型肝癌(N_(22))及其肺转移倾向亚株(H_(22)SP_(10))、淋巴结转移倾向亚株(N_(22)SL_(10))。小鼠子宫颈癌(U_(14))及其肺转移倾向亚株(U_(14)AP_(11))瘤细胞内的微核。比较了经活体筛选的上述亚株与未经筛选的原瘤株的微核细胞率(MNF)、总微核率,结果上述两项指标H_(22)SP_(10)及H_(22)SL_(10)均显著高于H_(22)(P值分别为<0.002、<0.005;<0.005、<0.001);U_(14)AP_(11)也显著高于U_(14)(P分别为<0.001、<0.001),而H_(22)SL_(10)与H_(22)SP_(10)(P>0.05、>0.05)。它表明在异质性N_(22)及U_(14)细胞群体中具有器官倾向性转移的细胞染色体畸变较重,可能为肿瘤演进的结果。