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丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建
被引量:
1
1
作者
刘娇
周帆
+2 位作者
陈庆美
单晓亮
唐霓
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期146-149,159,共5页
旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细...
旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。
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关键词
H
c
V编码蛋白
穿梭质粒
骨架质粒
同源重组
腺病毒
下载PDF
职称材料
题名
丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建
被引量:
1
1
作者
刘娇
周帆
陈庆美
单晓亮
唐霓
机构
重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期146-149,159,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30972586)
重庆市自然科学基金重点项目(CSTC
2009BA5036)
文摘
旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。
关键词
H
c
V编码蛋白
穿梭质粒
骨架质粒
同源重组
腺病毒
Keywords
hepatitis c virus-encoded proteins shuttle plasmid backbone plasmid homogeneous recombination adenovirus
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建
刘娇
周帆
陈庆美
单晓亮
唐霓
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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