戊型肝炎病毒(HEV)开读框架2中1.3kbcDNA的克隆与序列分析

以戊型肝炎 (HepatitisE)病人高热期血清为原材料 ,设计特定引物 ,经RT PCR扩增获得开放阅读框 2 (ORF2 ) 1.3kb基因片段 ,用EcoRI和BamHI插入克隆载体 pUC18,测定了该克隆基因片段的核苷酸序列并进行了比较分析。其片段长度为 130 9bp ,其A =2 4 9(19.2 % ) ,G =318(2 4 .2 9% ) ,T =339(2 5.9% ) ,C =4 0 3(30 .79% ) ;与印度株和缅甸株的同源性在 92 %以上 ,而与乍得和墨西哥株的同源性分别为 90 .7%和 77.4 %。

戊型肝炎病毒中国XT-179株系S蛋白基因组cDNA克隆及其免疫原性表位的血清学研究

本文报道对中国新疆东部一起戊型肝炎(HE)流行中2例HE患者粪便中分离到的HEV中国XT-179株系基因组进行cDNA分子克隆和其免疫原性表位的血清学研究结果。cDNA序列分析表明中国XT-179株与缅甸ET1.1株之间有94.3％的核苷酸和99.6％的氨基酸具有同源性。但也有5.7％的核苷酸区别于其他HEV地理株和散发株,提示在中国流行型HEV可能存在独特的基因型,可将此毒株序列作为鉴别HEV不同毒株的病毒学依据之一。本研究还按上述HEV地理株之间共有的免疫原性表位氨基酸序列合成了多肽抗原,用于检测来自中国XT-179株系流行区的29例HEV感染者和8例正常人血清抗-HEV,与应用HEV中国XT-179株系颗粒抗原相比,两组血清抗-HEV阳性和阴性的符合率分别为92.6％和100％。证实本项研究所克隆的HEV基因组可用于制备HEV重组基因疫苗和免疫诊断制剂。

戊型肝炎病毒中国XT-179株全基因组cDNA克隆及其核苷酸和氨基酸序列分析

本文报道对中国新疆东部一起戊型肝炎(HE)流行高峰期间,由HE患者粪便中分离到的戊型肝炎病毒(HEV)中国XT-179株进行全基因组cDNA克隆、核苷酸和氨基酸序列测定及分析结果。所阐明的HEV-XT-179株基因组全序列由7194个核苷酸和3′端的多聚腺嘌呤核苷酸[poly(A)]尾组成。四种核苷酸的含量腺嘌呤(A)为17.0％,胞嘧啶(C)为31.9％,鸟嘌呤(G)为26.0％,尿嘧啶(U)为25.1％。G+C含量为57.9％。全基因组含有9个限制性内切酶位点,其基因编码区三个开读框架分别编码了1693,660和123个氨基酸的序列,从而构成了HEV基因组结构区和非结构区的三个多聚蛋白。将其基因序列与HEV缅甸ET1.1株比较,二者之间有395个核苷酸和42个氨基酸以及1个限制性内切酶位点不同,其核苷酸及氨基酸的同源性分别为94.5％和98.3％。以上结果提示不同地区、不同时期分离到的HEV流行株可能存在不同的基因型别和抗原结构的差异。

戊型肝炎病毒中国株结构区ORF2 cDNA的克隆及表达

将成型肝炎病毒（ＨＥＶ）中国株结构区第二开放读码框架（ＯＲＦ２）８３７ｂｐｃＤＮＡ片段插入ｐＧＥＸ１λＴ质粒中进行表达。经免疫吸印法证明，该质粒表达的融合蛋白具有识别抗－ＨＥＶ的抗原表位，可用于制备抗－ＨＥＶ检测试剂。

戊型肝炎病毒感染性克隆的构建及应用进展

感染性克隆技术是在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即在病毒的遗传物质水平研究其复制机制和致病机理,并拯救病毒。构建戊型肝炎病毒（hepatitis E virus, HEV）感染性克隆是对 HEV 实施反向遗传操作技术的前提和基础,文章综述了 HEV 感染性克隆的构建策略、方法及应用。