戊型肝炎病毒(HEV)蛋白抗原肽的化学合成及在血清学诊断中的应用

目的：为诊断戊型肝炎，寻找更好的诊断试剂盒。方法：根据戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）蛋白含有２个可能的抗原表位，从戊型肝炎病毒中国株蛋白的氨基酸序列中选取Ｓ３０，ＮＳ３３和Ｓ４２３段抗原肽，用固相合成法进行化学合成，所得目标肽段纯化后经质谱和氨基酸组成分析确证。结果：本文试剂盒与国外品进行比较，血清分析结果表明，前者质量与日本产品相当，明显优于美国Ｇｅｎｅｌａｂｓ试剂盒。结论：以这３个合成的抗原肽作为包被抗原组装的戊型肝炎病毒血清抗体的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有较好的灵敏性和专一性，可用于临床检测和流行病调查。

上海地区急性散发性戊型肝炎的特异性诊断和调查──应用抗人μF（ab’）_2—HRP检测抗HEVIgM

以Ｇｅｎｅｌａｂｓ的ＨＥＶＩｇＧＥＬＩＳＡ试剂盒和抗人μＦ（ａｂ’）＿２—ＨＲＰ检测抗ＨＥＶＩｇＧ和ＩｇＭ，从上海地区４６７例急性病毒性肝炎病人和８４例健康人血清中分别检出抗ＨＥＶＩｇＧ阳性１０５例（２２％）和１１例（１３％）（Ｐ＞０．０５）。从上述病人共检出抗ＨＥＶＩｇＭ阳性６４例（１４％），其中３６例抗ＨＥＶＩｇＭ阳性出自１１１例急性非甲非乙非丙型肝炎，２８例抗ＨＥＶＩｇＭ阳性出自３３３例急性甲型肝炎病人，而２３例急性乙型和丙型肝炎病人，８４例健康人以及另外的２４例非病毒性肝炎（内４例类风湿因子阳性）病人血清均为抗ＨＥＶｌｇＭ阴性。结果表明：在检测抗ＨＥＶＩｇＭ的ＥＬＩＳＡ系统中，应用抗人μＦ（ａｂ’）＿２—ＨＲＰ作为酶标第二抗体，取得了满意的结果；上海地区急性非甲非乙非丙型肝炎中，３２％为戊型肝炎，急性甲型肝炎病人中８％同时感染了ＨＡＶ和ＨＢＶ。

HEV抗体检测中ELISA试剂盒的性能验证研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测中试剂盒的性能验证方法,并对该实验室戊型肝炎病毒(HEV)抗体检测中所使用的ELISA试剂盒进行性能验证,以判断所用试剂盒是否能满足实验室检测工作的基本要求。方法使用FAME全自动酶联免疫分析仪进行ELISA检测,通过计算和分析所用试剂盒的最低检出限、重复性、期间精密度、正确度,与试剂盒说明书提供的性能指标进行对比,并对试剂盒的CUTOFF值进行验证,判断其是否适合实验室常规检测人群,以此评价试剂盒的性能指标。结果 HEV ELISA检测中,万泰试剂盒最低检出限为0.5 U/m L,GBI试剂盒最低检出限为1 U/m L;重复性精密度实验中,万泰试剂盒在弱阳性浓度水平(2 U/m L)和临界值浓度水平的变异系数(CV)分别为4.33%和5.84%,GBI试剂盒在弱阳性浓度水平(2 U/m L)和临界值浓度水平的CV分别为5.39%和7.82%;期间精密度实验中,万泰试剂盒在弱阳性浓度水平(2 U/m L)和临界值浓度水平的CV分别为8.89%和12.55%,GBI试剂盒在弱阳性浓度水平(2 U/m L)和临界值浓度水平的CV分别为8.57%和12.52%;正确度验证方面,2种试剂盒的阴阳性符合率都达到100%;CUTOFF值验证实验中,万泰试剂盒检测的样本OD值的+3SD=0.190,小于试剂盒提供的CUTOFF值0.263,GBI试剂盒检测的样本OD值的+3SD=0.074,小于试剂盒提供的CUTOFF值0.150。结论实验室所使用的2种试剂盒均通过性能验证,适合实验室日常检测工作和受检人群,对提高实验室检测的准确度和检测质量起到了积极作用。

中国无偿献血人群HEV感染标志物流行率的Meta分析

目的分析我国各地无偿献血人群中HEV感染血清学标志物及RNA流行率情况,为针对无偿献血者HEV筛查必要性及制定筛查策略提供基础数据。方法根据关键词检索中国知网、万方医学、PubMed等数据库,提取符合纳入标准的文献数据,运用R4.1.3软件进行Meta分析。结果1)获得符合纳入标准的文献共26篇,抗-HEV IgG、抗-HEV IgM、HEV RNA分别调查97928、117831、82673例;2)中国无偿献血人群中抗-HEV IgG合并流行率为23.0%[95%CI(18%,29%)],且不同城市和地区之间存在显著性差异;3)中国无偿献血人群中抗-HEV IgM合并流行率为1.13%[95%CI(0.94%,1.36%)],且不同城市和地区之间存在显著性差异;4)中国无偿献血者HEV RNA合并流行率为0.028%[95%CI(0.006%,0.059%)],且不同城市和地区之间存在显著性差异。结论中国无偿献血者人群中HEV既往感染率较高,且呈现显著的地域分布差异;现症感染率相对较低且较前十年有所降低,但仍存在输血残余风险,需加强对无偿献血者血液HEV筛查的重视。

中国无偿献血人群HEV抗体阳性率性别和年龄分层Meta分析

目的运用Meta分析探讨中国无偿献血人群中戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)抗体阳性率的性别和年龄特征,评估无偿献血人群HEV感染情况,为献血者招募及HEV血液筛查提供依据。方法使用关键词或主题词组合检索中国知网、万方医学、PubMed等数据库,提取符合纳入标准的文献数据,以性别和年龄为分层因素,运用R 4.1.3软件进行HEV抗体阳性率的Meta分析。结果1)获得符合纳入标准的性别相关文献15篇。其中涉及抗-HEV IgG的14篇,献血者男性38203名、女性25760名;涉及抗-HEV IgM的13篇,献血者男性46125名、女性33345名。男、女2组无偿献血者抗-HEV IgG阳性率合并值分别为24.54%[95%CI(17.32%,32.56%)]、19.52%[95%CI(11.71%,28.76%)](P>0.05);男、女2组无偿献血者抗-HEV IgM合并阳性率分别为1.16%[95%CI(0.93%,1.40%)]、0.84%[95%CI(0.54%,1.20%)](P>0.05)。2)获得符合纳入标准的年龄相关文献12篇。其中涉及抗-HEV IgG的11篇,献血者<30岁31097名、≥30岁19122名;涉及抗-HEV IgM的11篇,献血者<30岁44909名、≥30岁21303名。<30岁组与≥30岁组无偿献血者抗-HEV IgG阳性率合并值分别为13.56%[95%CI(7.03%,21.81%)]、29.47%[95%CI(19.04%,41.11%)](P<0.05);<30岁组与≥30岁组无偿献血者抗-HEV IgM阳性率合并值分别为0.85%[95%CI(0.65%,1.08%)]、1.22%[95%CI(0.94%,1.54%)](P>0.05)。结论无偿献血者人群中存在一定比例的HEV携带者,不同地区无偿献血人群中HEV流行率具有不同的性别及年龄分布特征;不同性别的无偿献血人群中HEV流行率无差异;≥30岁无偿献血者HEV既往感染率高于<30岁无偿献血者,但现症感染率无差异;有必要多中心联合进行统一年龄分组标准进行HEV流行率的后续研究,为建立科学的献血者招募及血液筛查策略提供数据支撑。

HBeAb光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003NCU/ml,可测范围为0.003-16NCU/ml。批内与批间的精密度分别为5.3%和6.8%,与HBcAb无交叉反应。使用自制试剂与罗氏化学发光试剂盒同时检测136份临床血清样本,结果具有相关性(r=0.961)。结论自制HBeAb AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能够达到临床检测要求,可用于临床血清样本HBeAb浓度的测定。

长期戊肝IgM抗体阳性患者临床基本特征

目的总结长期戊肝IgM抗体阳性患者临床基本特征。方法回顾性分析2018年1月至2023年9月在首都医科大学附属北京佑安医院(一家以感染、传染及急、慢性相关性疾病群体为主要服务对象和重点学科的医院)进行戊肝抗体和/或戊肝核酸检测的患者,了解感染和/或肝病专科就诊人群戊肝感染率,HEV IgM阳性持续时间≥6个月戊肝患者与6个月内HEV IgM转阴的戊肝患者比较,分析前者临床基本特征。结果近6年(2018年1月至2023年9月)北京佑安医院HEV IgM、HEV IgG抗体检测的患者共有31912例患者,其中HEV IgM阳性率6.92%(2280/31912),HEV IgG阳性率为24.36%(7775/31912)。近6年HEV IgM阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=114.723,P<0.001),但2018年、2019年和2023年3年比较差异无统计学意义,这3年HEV IgM阳性率平均为5.66%。根据戊肝抗体检测情况,将患者分成4组,IgM+IgG+组、IgM+IgG-组、IgM-IgG+组和IgM-IgG-组,4组戊肝核酸阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=232.791,P<0.001),IgM+IgG+组和IgM+IgG-组核酸检测率较高,核酸阳性率较高。HEV IgM阳性持续时间≥6个月的戊肝患者与HEV IgM6个月内转阴的患者比较,前者首次就诊基线ALT、TBil和DBil都显著低于对照组(均P<0.05),而TP高于对照组(P<0.05)。结论近些年戊肝重点就诊科室就诊患者戊肝感染率比较稳定。长期HEV IgM持续阳性的戊肝患者临床基本特征为首次就诊基线ALT、TBil和DBil低于普通戊肝患者,而TP高于普通戊肝患者。

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中国家流行,而欧美等发达国家也有散发的病例。目前,检测HEV的常用方法是实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA),也有学者利用反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)和CRISPR系统等新型检测方法进行HEV检测。在药物治疗方面,可用利巴韦林、干扰素或多烯磷脂酰胆碱(PPC)等化合物治疗HEV引起的感染,也可使用中药单味或复方改善临床症状并作协同治疗。接种疫苗被认为是预防和控制HEV感染的有效手段,但目前仍无有效的HEV体外细胞培养系统,传统的灭活苗和减毒苗无法批量制备。当前HEV疫苗的研究方向主要有基因重组蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗和口服疫苗等。接种疫苗是预防戊型肝炎的重要措施,采用切断传播途径为主的综合性预防措施也可控制该病的流行。笔者主要通过对HEV的检测方法、药物治疗和疫苗免疫等方面的研究进展进行归纳和总结,并对HEV的防控研究进行展望,以期为HEV的预防与控制提供新的思路。

戊型肝炎病毒感染的实验室诊断研究进展

[背景]戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),是全球范围内病毒性肝炎重要病原体之一.HEV感染可以导致急性、慢性戊型肝炎以及许多肝外症状.研究者们开发了HEV RNA、HEV抗原、HEV IgM和HEV IgG等多种实验室检测方法用于诊断HEV感染.[进展]不同HEV指标都有其独特的诊断价值,尤其是HEV抗原.HEV抗原检测的主要靶标为分泌型HEV抗原,而非传统的病毒衣壳蛋白.HEV抗原检测可用于急性与慢性HEV感染的检测,也可用于HEV感染后临床结局的预测以及区分急性与慢性HEV感染,尿液HEV抗原检测为HEV感染提供了一种无创的检测方式.HEV RNA检测在急性与慢性HEV感染以及出现肝外症状的人群中都具有重要的价值,被认为是HEV感染诊断的金标准.HEV IgM和HEV IgG分别是HEV近期感染和既往感染指标,持续时间较长,对HEV现症感染的指示较弱.[展望]随着检测技术的进步和检测新靶标的发现,HEV RNA和抗原作为现症感染的指标越来越受到重视,而HEV IgM和IgG血清学检测作为间接检测指标由于较成熟,商品化试剂较丰富,目前依然在临床检测中广泛使用.了解HEV感染的实验室诊断研究现状和发展动态,可为临床中HEV感染的诊断提供思路和参考.

浙江农村人群戊型肝炎感染率调查

目的检测浙江德清农村人群中戊型肝炎血清抗体水平,调查并评价各种可能的戊型肝炎病毒感染的危险因素。方法通过调查表收集研究人群的一般资料并采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗HEV-IgG抗体。结果在被调查且自愿采血的663人中,HEV-IgG抗体阳性率为63.50%,男性(70.03%)显著高于女性(57.14%)。各年龄组阳性率随年龄升高而增加,20岁以下组最低,仅为23.53%;20岁以上组为55.00%,之后虽然继续升高,但保持在一个稳定水平。既往肝炎史、输血史、饲养和接触动物与戊型肝炎抗体阳性率的关系无统计学意义。结论浙江农村地区戊型肝炎病毒感染情况普遍,男性高于女性,有随着年龄的增加而升高的趋势。

福建省不同人群中戊型肝炎病毒感染的血清流行病学调查分析

目的了解福建省不同人群中戊型肝炎病毒的感染情况。方法收集普通人群血清2209份,职业危险人群血清1722份,应用双抗原夹心ELISA法检测抗HEV抗体。普通人群由健康体检人员和健康献血者组成,职业危险人群由养鸡场或养猪场的饲养员、屠宰工、兽医、厨师或从事鸡鸭批发者组成,使用SPSS软件比较不同人群的感染率。结果普通人群HEV的阳性率为23.3%,职业危险人群HEV阳性率为33.3%(χ2=48.51,P<0.001)。在职业危险人群中与鸡密切接触者HEV的阳性率显著高于与猪密切接触者。HEV阳性率有随年龄的增长而上升的趋势,在普通人群中男、女性HEV阳性率无显著性差异(P>0.05)。在职业危险人群中男性HEV阳性率显著高于女性。结论普通人群HEV的感染率较高,提示HEV亚临床感染的存在。与猪、鸡密切接触者HEV阳性率高于普通人群,这些数据进一步证明了HEV可能是一种人兽共患病的假设。

我国家禽戊型肝炎病毒感染情况的调查

目的了解我国家禽戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法自我国15个省份采集鸡和鸭血清共计1647份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测血清中HEV抗原和抗体;通过Nested PCR对陕西、西藏和海南的全部血清样本及其它抗原阳性样本分别进行HEV及禽HEV核酸检测。结果 1507份鸡血清中有54份为HEV抗体阳性,26份为HEV抗原阳性,抗原和抗体的阳性率分别为3.58%和1.73%;140份鸭血清中10份为HEV抗体阳性,2份为HEV抗原阳性,阳性率分别为7.14%和1.43%;鸡和鸭HEV抗原、抗体阳性率无统计学差异。在鸡、鸭血清标本中没有检测到HEVRNA。结论我国家禽存在HEV感染,但还需要进一步研究以确定感染的病毒是否为禽HEV或1-4型HEV跨种感染。

戊型肝炎病毒总抗体与IgM、IgG单抗体检测结果一致性分析

目的比较戊型肝炎病毒总抗体(HEV-Ab)与IgG、IgM单抗体检测结果的一致性。方法采用HEV-Ab、HEV-IgG、HEV-IgM3种试剂盒分别对2070份献血者标本进行检测。总抗体阳性、IgG及IgM中至少有1种阳性,或总抗体阴性、IgG及IgM均阴性判为一致。结果总抗体HEV-Ab检测与IgG及IgM检测的一致性为96.9%(2006/2070);HEV-Ab总抗体S/CO值越高,阳性结果的一致性越好。HEV-AbS/CO值≥5、2≤S/CO<5和1≤S/CO<2时,检测结果的一致率分别为98.2%(493/502)、79.3%(46/58)和59.5%(22/37)。结论戊型肝炎病毒总抗体试剂盒(HEV-Ab)与IgG、IgM单抗体试剂盒(HEV-IgG、HEV-IgM)一致性好,HEV-Ab可用于HEV流行病学研究。

抗戊型肝炎病毒单克隆抗体识别表位的初步研究

通过Western blot、体外捕获PCR、ELISA阻断实验及合成的多肽库等方法，对23株抗戊型肝炎病毒（HEV）单克隆抗体（单抗）识别HEVORF2表位的作用进行系统研究。结果显示，7株线性单抗识别表位都位于ORF2aa408-458之间，16株构象型单抗识别表位都定位于ORF2aa459-606之间，大部分构象型单抗识别表位都在天然病毒表面。对这些单抗识别表位系统地了解将为HEV疫苗、诊断、病毒受体和病毒感染机制等方面的研究提供重要工具。

北京市戊型肝炎血清流行病学调查

目的了解北京市自然人群中抗-HEVIgG流行状况,为戊肝防控工作提供依据。方法在北京市10个区县按整群随机抽样方法调查1岁以上各年龄组自然人群并采集静脉血,采用科华公司ELISA试剂盒检测抗-HEVIgG。调查结果采用SPSS13.0进行分析。结果北京市自然人群中抗-HEVIgG阳性率为8.13%(95%CI:7.37%～8.89%),标化阳性率为6.53%。不同性别间抗-HEVIgG阳性率差异无统计学意义;随年龄的增长阳性率呈不断增加的趋势;城区阳性率低于郊区,差异有统计学意义(χ2=4.556,P=0.033)。结论北京市自然人群中戊肝感染率较高,部分农村地区抗-HEVIgG阳性率较高。

国产抗-HEV IgG ELISA试剂盒阳性临界值讨论

目的确定上海科华生物公司生产的抗-HEV IgG ELISA试剂盒阳性临界值,为自然人群抗-HEV IgG流行率调查提供依据。方法选择本实验室保存的不同来源血清样本,采用上海科华公司生产的抗-HEV IgG ELISA试剂盒进行检测。以Genelabs抗-HEV IgG试剂为标准,应用ROC曲线法确定科华公司试剂检测自然人群抗-HEV IgG时合理的阳性临界值。结果以ROC曲线确定的约登指数最大值(0.848)相应的切点为科华试剂阳性临界值(0.071)。结论 ROC曲线有助于获得合理的阳性临界值。

水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性

目的通过检测浙江省德清县水系上下游地区农村人群血清戊型肝炎病毒抗体水平,以评价非爆发状态下水源因素与戊型肝炎病毒感染的关联性。方法通过统一的调查表收集1 720人的一般资料及可能危险因素,并采用间接酶联免疫吸附法检测血清抗HEV-IgG抗体。结果总标化抗体阳性率为48.79%。其中,上游地区人群标化抗体阳性率为43.52%,下游标化阳性率为51.26%。将两地人群不同的构成特征调整后,下游抗体阳性率仍显著高于上游。同时发现,男性抗体阳性率高于女性;各年龄组阳性率随年龄升高而增加;家庭养猪、喜食猪肝、主要饲养动物和饮酒皆与戊肝感染有统计学关联。结论浙江农村地区戊型肝炎病毒感染情况与当地水源因素有较为显著的关联;猪可能是戊型肝炎病毒的自然宿主之一。

人、猪和鸡血清中抗禽戊型肝炎病毒抗体的检测与鉴定

通过对人、猪和鸡血清中的抗禽戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）ORF2抗体的检测以及对阳性血清抗体特异性的鉴定,本研究结果表明,人、猪和禽血清中抗禽HEVORF2抗体阳性率为0.91%~62.5%。因为禽与哺乳动物HEV ORF2抗原具有共有的抗原表位,而阳性血清中抗禽HEV ORF2特异性抗原表位抗体的阳性率为41.3%~92.1%,提示人、猪和鸡都有感染禽HEV的可能性,这为进一步验证禽HEV可能造成的人兽共感染提供新的科学依据。

基于生物信号纳米放大技术的戊肝病毒检测基因芯片

建立了一种利用"双探针夹心银染"技术快速检测戊型肝炎病毒(HEV)的基因芯片方法.提取的病毒核酸经过RT-PCR扩增,PCR体系中用掺入生物素修饰的dUTP扩增得到带有生物素的核酸片段,5′末端-NH2修饰的同源寡核苷酸作为捕获探针固定到处理后的玻片上,该探针识别病毒的带有生物素的核酸片段,而链霉亲和素标记的胶体金与生物素紧密结合,通过银沉积在金颗粒表面放大信号可以目视结果.采用该方法对已经确证的86个血清样本进行检测,检出52个阳性和34个阴性样本,结果与荧光定量PCR检出一致.

鼠源戊型肝炎病毒IgG抗体定量检测方法的建立

目的制备鼠源戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）抗体定量参考品,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法制备鼠源抗-HEV IgG参考血清MS1,以世界卫生组织人源抗-HEV Ig标准品（NIBSC code：95/584）对其进行标定并检测其稳定性;以标定的参考品为标准,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,对线性、范围、重复性、准确度等进行验证,并对戊肝疫苗免疫后小鼠血清进行HEV IgG抗体定量检测。结果制备的MS1血清含量为30.9U/m L（95%CI：±1.1）,CV为4.8%;加速稳定性试验和冻融稳定性试验中,MS1含量CV均〈15%。建立的小鼠抗-HEV IgG抗体定量检测方法在0.01~0.15 U/m L范围内具有良好的线性（r〉0.99）;灵敏度为0.007 U/m L;对高、中、低3份不同含量抗-HEV阳性小鼠血清重复检测3次,CV均〈10%;加样回收率为83.8%~107.7%。戊肝疫苗免疫1 w,3 w,5 w时,小鼠血清HEV IgG抗体均值分别为0.3 U/m L、39.4 U/m L、345.4 U/m L。戊肝疫苗初次免疫小鼠1 w后抗体阳转率为100%,但抗体均处于较低水平;血清抗体水平随着免疫针次的增加而升高（P〈0.05）。结论制备的鼠源HEV IgG抗体定量参考稳定性良好的,建立的小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,具有良好的灵敏度、重复性及准确度,可用于小鼠实验中戊肝疫苗免疫原性的评价。