HPO205与COX6B1蛋白之间的相互作用

目的以酵母双杂交(Y2H)和GST融合蛋白沉降技术(GST-Pull down)来探讨肝细胞生成素205(HPO205)与细胞色素C氧化酶(COX)6B1间存在的相互作用,为研究HPO205的功能提供依据。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增HPO205和COX6B1的编码基因,分别构建至pDBLeu和pPC86的重组Y2H质粒载体。然后将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行Y2H鉴定,并用GST-Pull down技术对其验证。结果成功克隆HPO205和COX6B1编码基因至Y2H载体和相应表达载体。经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER和pPC86-COX6B1共转后能激活Ura、LacZ、His 3个报告基因;GST-Pull down实验显示,GST-COX6B1能沉淀HPO205。结论 HPO205可能通过与COX6B1相互作用影响线粒体氧化磷酸化过程。

肝细胞生成素205与细胞色素C的相互作用

目的:应用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin205,HPO205)与细胞色素C(cytochrome c,Cytc)间的相互作用.方法:采用PCR技术扩增HPO205和Cytc编码基因,分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pPC86的重组载体.应用Y2H技术将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行鉴定,同时用GST-Pulldown方法对其验证.结果:成功克隆HPO205和Cytc编码基因至Y2H载体和相应表达载体,包括pDBLeu-GRER、pDBLeu-CYCS、pPC86-GRER、pPC86-CYCS.经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER+pPC86-CYCS共转后能激活Ura和His两个报告基因,而pDBLeu-CYCS+pPC86-GRER共转则不能激活任何一个报告基因.GST-Pulldown实验显示,GST-CYCS能将HPO205沉淀下来,而GST空蛋白不能沉淀HPO205,证实HPO205与Cytc存在相互作用.结论:HPO205可能通过Cytc参与电子传递或/和细胞凋亡过程.