肝细胞来源的肝前体样细胞对巨噬细胞的调控作用研究

目的探究人类肝细胞来源的肝前体样细胞(HepLPC)对巨噬细胞亚群M1及M2的影响。方法采用肝细胞扩增培养体系(TEM)将原代肝细胞体外扩增转分化为HepLPC,培养过程收集HepLPC条件培养上清,离心后冻存备用。巨噬细胞为C57小鼠骨髓来源(BMDM),通过红细胞裂解处理后,加入小鼠GM-CSF 40 ng/mL培养,刺激诱导7 d,贴壁所得为实验所需巨噬细胞。处于静息状态的巨噬细胞,通过LPS 100 ng/mL刺激产生炎性状态的M1型巨噬细胞以及IL-440 ng/mL刺激产生具有抗炎及具有组织修复功能的M2型巨噬细胞。在定向诱导巨噬细胞极化的基础上,将HepLPC条件培养上清与不同极化状态的巨噬细胞共同培养,收集不同时间点的培养上清,细胞RNA和细胞蛋白,通过流式细胞术、定量PCR、ELISA等方法综合评价HepLPC条件培养上清对巨噬细胞不同亚群的影响。结果小鼠GM-CSF刺激诱导BMDM贴壁,得到M0型巨噬细胞。F4/80+(巨噬细胞总标记)表达占比92.8%。流式细胞检测结果显示F4/80+,CD11c+表达占比88.1%;F4/80+,CD206+表达占比97.0%。LPS刺激6 h,M1相关炎性基因表达上调:IL6表达上调(823.200±174.500)倍,IL1β表达上调(8.389±0.029)倍,iNOS表达上调(24.650±1.196)倍;IL-4刺激6h,M2相关基因表达上升:CD206表达上调(114.000±3.579)倍,IL10表达上调(2.634±0.028)倍,ARG1表达上调(53.260±8.083)倍;M1型、M2型巨噬细胞诱导成功。在此基础上,HepLPCs-CM共培养后,M1型巨噬细胞极化相关基因的表达下调:IL6表达为(346.300±20.810),IL1β表达为(11.290±0.10),iNOS表达为(169.800±9.711);相关炎性因子下降:IL6分泌为(138.700±32.130)pg/(mL×10^(5) cell),IL1β分泌为(0.710±0.019)pg/(mL×10^(5) cell),iNOS分泌为(0.095±0.001)pg/(mL×10^(5) cell)。M2型巨噬细胞极化相关基因表达上调:CD206表达为(40.88±0.1768),IL10表达为(22.2±0.1414),ARG1表达为(32.25±0.2121);IL10分泌增加,为(108.052±0.472)pg/(mL×10^(5) cell)。结论HepLPC条件培养基可以抑制LPS诱导的巨噬细胞炎性活化,显著减低炎症相关因子的基因及分泌蛋白表达,并且可促进IL4诱导的修复型M2巨噬细胞基因的表达以及抗炎因子IL-10分泌增高。