HBV C基因型有关的HBsAg阴性HBV DNA阳性患者S区突变对HBsAg的影响

目的通过构建HBV C基因型突变质粒研究HBsAg阴性HBV DNA阳性患者HBV S区突变对HBsAg水平的影响。方法收集2022年8月至2023年4月首都医科大学附属北京佑安医院107例HBsAg-/HBV DNA+患者血液样本,对成功提取扩增的HBV DNA S区进行测序,通过构建HBV C基因型突变质粒对HBV S区突变位点进行细胞功能验证,探讨OBI可能发生的分子机制。结果对成功提取扩增的68例患者进行测序,发现HBV S区存在大量突变,包括免疫逃逸突变(如sG145R、sK122R、sS114T、sT131P等)和跨膜结构域(transmembrane domain,TMD)突变(如sT5A、sG10D、sF20S等)。通过构建HBV C基因型突变质粒,进行细胞转染和细胞免疫荧光实验发现sG145R突变会明显降低HBsAg的表达,但是sK122R、sI26N、sQ29N、sR169H、sS114T、sT131P这6个突变位点并未影响细胞内外HBsAg的表达。结论通过测序发现HBsAg-/HBV DNA+患者HBV S区存在大量突变位点,通过构建sG145R、sK122R、sI26N、sQ29N、sS114T和ST131P等突变质粒发现sG145R突变会明显降低细胞内外HBsAg的表达,但是sK122R、sI26N、sQ29N、sR169H、sS114T、sT131P并未明显降低细胞内外HBsAg的表达。

血清HBsAg阳性者接受肾移植术120周预后随访报告

目的分析血清HBsAg阳性患者在接受抗HBV治疗情况下肾移植术后长期生存情况。方法2018年1月~2021年9月我院诊治的血清HBsAg阳性的慢性肾功能衰竭患者69例,均接受肾移植术治疗,其中26例接受血清HBsAg阳性供体肝脏。术后均接受恩替卡韦抗病毒和标准的抗免疫排斥反应治疗。随访196周(中位随访时间为120周)。结果本组发生肾移植后移植物功能延迟恢复(DGF)3例(4.4%),到随访结束,生存67例(97.1%);在随访24 w、48 w、96 w和168 w,26例供体为血清HBsAg阳性与43例供体为血清HBsAg阴性或17例血清HBV DNA阳性与52例血清HBV DNA阴性受者血清ALT、AST和肌酐(sCr)水平均无显著性差异(P>0.05)。结论血清HBsAg阳性肾移植受者在正规的抗病毒治疗情况下可以维持肝肾功能正常,受体基线血清HBV DNA载量、供体血清HBsAg状态和移植后使用免疫抑制剂均未见影响预后。

昆明地区HBsAg与抗-HBs双阳性慢性HBV感染患者流行病学调查及PreS/S基因突变特征

目的探讨昆明地区HBsAg与抗-HBs(Anti-HBs)双阳性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者流行病学及PreS/S基因突变特征。方法选择2018年5月—2022年4月于云南大学附属医院住院及门诊定量检测乙肝两对半的438例慢性HBV感染患者为观察对象,将202例HBsAg(+)/抗-HBs(+)患者作为观察组,将236例HBsAg(+)/抗-HBs(-)患者作为对照组,对比两组患者临床特征。使用巢式聚合酶链反应扩增出PreS/S基因全长序列,确定基因型并分析PreS/S基因突变特征。结果观察组患者在<10岁及高于80岁人群中的流行率较高,而对照组在20~49岁人群中的流行率较高。与对照组比较,观察组患者年龄、HBsAg<250 IU/mL比例、C型HBV感染及乙肝携带者比例均显著增加(P<0.05)。成功扩增PreS/S并测序成功的观察组样本共132例,其中B型基因81例,C型基因51例;对照组样本中B型基因110例,C型基因65例。B型基因患者中,与对照组比较,观察组N末端区域突变率明显增加(P<0.05)。C型基因患者中,与对照组比较,观察组MHR、a决定簇及N末端区域突变率明显增加(P<0.05)。在观察组中,81例B型基因患者中PreS基因缺失突变14例(17.28%),51例C型基因患者中PreS基因缺失突变19例(37.25%),而在对照组中未发现PreS基因缺失突变。结论HBsAg/抗-HBs双阳性HBV感染者在<10岁及高于80岁HBsAg阳性人群多见,HBsAg/抗-HBs双阳性可能与HBsAg突变及PreS基因突变有关。

8种国产HBsAg试剂盒检测变异HBsAg的效果评价

目的评价国内8种HBsAg诊断试剂检测体外表达的18种变异HBsAg的效果。方法用8种ELISA试剂检测真核细胞表达的18种变异HBsAg的免疫反应性。结果8种试剂盒检测变异HBsAg的能力不同,漏检率为16.7%～44.4%。K122I、T123N、C124R和G145R变异的HBsAg漏检率最高。结论8种HBsAg检测试剂盒都不能很好地检出部分变异HB-sAg,应改进试剂性能,提高对变异HBsAg的检出率。

Elecsys HBsAg确证试验在灰区及弱反应性标本检测中的应用

目的探讨ElecsysHBsAg确证试验在ELISA定性试验和ECLIA定量试验临界灰区及弱反应性标本检测中的临床应用价值。方法所有被检测血清标本均来自门诊和住院患者，对其中145例ELISA法检出的灰区及弱反应性标本分别进行E1ecsysHBsAg定量试验及确证试验，并对结果进行了比较分析。结果血清HBsAg经EUSA法检测OD／CUTOFF结果在0．85～O．99之间标本共35例，其中1例ElecsysHBsAg定量及确证试验阳性占2．9％（1／35）；OD／CUTOFF结果在1．0～1．99弱反应性标本共54例，ElecsysHBsAg定量试验有反应性14例，占25．9％（14／54），ElecsysHBsAg确证试验阳性18例占33．3％（18／54）；OD／CUTOFF结果在2．0～4．99共31例，有17例ElecsysHBsAg定量及确证试验阳性占54．8％（17／31）；OD／CUTOFF结果在5．O～7．99共25例，有21例ElecsysHBsAg定量及确证试验阳性占84．0％（21／25）。通过对EuSA法与ECLIA法、ELISA法与ElecsysHBsAg确证试验检测HBsAg结果比较差异具有统计学意义（P〈O．01）。结论ELISA法检测HBsAg灰区及较低含量的弱反应性标本、可疑或乙肝感染模式不常见的标本需再次用敏感性更高的ECLIA等方法复检以防假阴性或假阳性出现，有条件的实验室可用Elect；ysHBsAg确证试验进一步确认。

弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅲ.pcDNA3-HBsAg-GRA1免疫小鼠的保护性观察

目的观察重组质粒pcDNA3HBsAgGRA1DNA接种诱导的保护性免疫应答。方法质粒DNA免疫BALB/c小鼠;ELISA法检测GRA1、HBsAg抗体及亚类水平;提取各免疫组小鼠肌肉组织DNA进行PCR检测;弓形虫RH强毒株攻击感染各免疫组小鼠。结果经pcDNA3HBsAgGRA1免疫组小鼠产生抗GRA1和HBsAg抗体,且抗GRA1的抗体水平明显高于GRA1单独和GRA1与HBsAg混合免疫组。弓形虫RH强毒株攻击感染pcDNA3HBsAgGRA1免疫组小鼠,其存活时间明显长于其他各组,结果提示HBsAg可能起免疫佐剂作用。结论将GRA1与HBsAg融合明显增强了GRA1的免疫原性和保护性。

HBsAg Mab胶体金探针制备与鉴定的实验研究

目的:研制合格的乙肝表面抗原单克隆抗体(HBsAg Mab)标记的胶体金探针。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备15nm的胶体金;所制备的胶体金通过透射电镜和紫外分光计度计鉴定其大小和均匀度。通过CVAI曲线,确定胶体金标记HBsAg Mab蛋白用量;采用斑点免疫吸附试验对探针进行鉴定。结果:制备的15nm胶体金颗粒均匀;紫外分光光度计400-700nm扫描结果最大吸收波长为518nm,峰宽较窄;纯化的HBsAg Mab浓度为65mg/mL;在PH为8．2时,每毫升胶体金的蛋白最适保护量为32．5μg;采用斑点免疫吸附试验鉴定探针质量合格,可保存3个月。结论:制备的HBsAg Mab胶体金探针质量合格,为进一步研究提供手段。

HBsAg动态变化与慢性乙型肝炎进程的关系

随着HBs Ag定量检测在临床上的运用,近年研究发现HBs Ag水平不仅反映了双链共价闭合DNA的转录活性,而且可以预测疾病进展风险与慢性HBV感染患者的抗病毒治疗应答。现就HBs Ag水平在HBV感染自然病程中的变化作一综述,并指出HBs Ag水平的变化可能为慢性乙型肝炎的治疗提供一个新思路。

输血前患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体检测结果临床研究

目的:观察输血前患者血乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗HCV)、艾滋病抗体(抗HIV)和梅毒抗体检测结果。方法:取医院输血治疗患者3542例,治疗前对患者采用化学发光免疫测定(CLIA)法和ELISA法检测血清标本中血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体指标,分析其检测结果并提出相应的解决对策。结果:3542例输血患者中704例血HBsAg阳性,52例抗HCV阳性、3例抗HIV阳性,200例梅毒抗体阳性;男性血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感染率,高于女性(P<0.05)。3542例输血患者中不同年龄段均存在血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感,对于血HBsAg、抗HCV多发生在21~40岁年龄段;抗HIV多发生在41~60岁年龄段;梅毒抗体发生在41~>60岁年龄段。959例血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感染病例分布科室较多,排在前三位分别为消化内科、普外科及肿瘤科,分别占33.98%、20.96%及17.00%。结论:输血前加强患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体指标检测,能降低血液传染性疾病发生率,值得推广应用。

透射电镜观察p21-(HBsAg/HBsAg)转基因小鼠肝癌细胞凋亡

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡。方法用透射电镜观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡的形态学改变。结果细胞凋亡早期,细胞核染色体发生边集,核形不规整,核膜表面凹凸;凋亡中期,核内染色质凝聚,趋边呈月牙状,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩;凋亡晚期,核固缩,细胞膜出芽形成小泡,可见凋亡小体。结论p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡具有典型性病变特征,是研究HBV感染诱发肝癌发病机理的合适动物模型。

探讨ELISA方法中HBsAg弱阳性标本复查方式及其意义

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)方法中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)弱阳性标本复查方式,确保结果的准确可靠。方法用ELISA法筛查出144例如下的标本:①S/CO值0.8～0.99,14例;②S/CO值在1.0～1.99,60例;③S/CO值在2.0～4.99,38例;④S/CO值在5.0～15,32例,以上标本均进行Elecsys HBsAg定量试验和HBsAg确证试验,对结果进一步确证。结果 144例标本中,三种方法都阳性的标本有62例,Elecsys HBsAg定量试验阳性62例,HBsAg确证试验阳性64例,ELISA与Elecsys HBsAg定量试验,ELISA与HBsAg确证试验比较,均有显著性差异(P<0.05),Elecsys HBsAg定量试验与HBsAg确证试验比较,结果没有显著性差异(P>0.05)。结论 ELISA试验做为临床乙肝的筛查方法容易出现假阳性,弱阳性标本可以用Elecsys HBsAg定量试验进行快速复查。

乙肝病毒表面抗原(HBsAg)基因工程疫苗的研究进展

在乙肝病毒 (HBV)的结构蛋白中 ,与疫苗有关的主要是HBsAg。HBsAg基因已在不同的生物体系中获得成功的表达 ,其基因工程疫苗的研究也取得了长足的进展 。

血站实验室采用不同模式检测HBsAg的性能评价

目的对6家血站实验室单独使用1种和联合使用2种酶联免疫（ELISA）试剂检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）进行性能评价,为各实验室制定合理的HBsAg筛查策略提供参考依据。方法将来自16家实验室的898份HBsAg初筛反应性标本分别寄送至6家血站实验室,使用2种ELISA试剂检测HBsAg。采用化学发光法和中和试验作为确认方法。分别在各实验室选择1种性能相对优异的试剂作为比较试剂,利用统计学方法分析各实验室单独使用1种试剂和联合使用2种试剂的灵敏度、特异性和符合率。结果 898份HBsAg初筛反应性标本中,剔除16份数据不完整的标本,在余下的882份标本中,确认阳性571份,确认阴性311份。各实验室使用的2种试剂其灵敏度差异较大（P〈0.05）,其中在实验室B、D、E和F中,灵敏度相对优异的试剂其符合率亦更高（P〈0.05）。性能相对优异的试剂单独检测和2种试剂联合检测进行性能比较,各实验室2种检测模式的灵敏度差异无统计学意义（P〉0.05）;实验室C、D和F单一试剂检测的特异性优于2种试剂联合检测（P〈0.05）,其余实验室2种检测模式的特异性差异无统计学意义（P〉0.05）;实验室D和F单一试剂检测的符合率优于2种试剂联合检测（P〈0.05）,其余实验室2种检测模式的符合率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在血站实验室使用ELISA试剂盒进行HBsAg检测,存在单独使用1种试剂的检测性能等同于或优于联合使用2种试剂的情况,是否采用单一试剂代替2种试剂联合检测作为HBsAg的筛查策略,需进行科学的评估和确认。

培养条件对HBsAg转基因人参细胞的生长及表达量的影响

目的研究培养条件对HBsAg转基因人参细胞生长及HBsAg表达量的影响。方法通过单因子实验,分别考察碳源、氮源、有机成分对HBsAg转基因人参细胞生长和HBsAg表达量的影响,并通过不同组合实验,探索氮源浓度、有机成分和起始pH的最佳组合。结果在3%蔗糖、10mmol/L氮源、0·25%乳清蛋白和起始pH6·2的情况下,细胞生长量略有增加,HBsAg的表达量增加1倍。结论通过改善培养条件,可以提高HBsAg转基因人参细胞的生长速度和抗原表达量。

经抗病毒治疗的慢性HBV感染者发生HBsAg阴转的影响因素

目的了解有抗病毒治疗史的慢性HBV感染者发生HBsAg阴转的流行病学特征,为推进慢性乙肝患者的社区规范管理提供依据。方法对确诊的有抗病毒治疗史的慢性HBV感染者开展前瞻性队列研究,采用Cox回归模型,分析人口学特征、生活方式、HBeAg、ALT等与HBsAg阴转的相关性,并对仅HBsAg阴转者与HBsAg转换者的有关特征进行比较。结果 2010年观察慢性HBV感染者1 818例,随访到2014年,有72例发生HBsAg阴转,发生率为1.4/100人年。使用干扰素药物感染者的HBsAg阴转率(1.1/100人年)低于服用核苷类药物者(1.4/100人年)(P>0.05);基线HBeAg阳性者未发生HBsAg阴转;基线ALT<40 U/L感染者HBsAg阴转率(1.6/100人年)高于基线ALT≥40 U/L者(0.8/100人年)(P<0.05);50.7%的HBsAg阴转者发生了HBsAg血清学转换。结论经抗病毒治疗的慢性HBV感染者HBsAg阴转率较低,近半数对象发生了HBsAg转换,感染者ALT基线正常、HBeAg阴性是慢性HBV感染者发生HBsAg阴转的影响因素。

HBsAg定量在乙型肝炎相关性肝癌患者中检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)定量在乙型肝炎肝硬化和肝硬化并发肝细胞癌(HCC)患者中的变化,以期为乙型肝炎相关性肝癌的早期诊断提供临床指导意义。方法采用回顾性分析方法,选取我院乙型肝炎肝硬化并发肝癌患者54例,选取同期住院的单纯乙型肝炎肝硬化患者72例作为对照,分析两组患者HBsAg定量和HBV DNA定量水平的差异。结果乙型肝炎相关性肝癌患者HBsAg定量及HBV DNA水平均明显低于单纯乙型肝炎肝硬化患者,差异有统计学意义(P<0.001)。结论HBsAg定量在肝硬化进展为肝细胞癌的过程中逐渐下降,HBsAg定量可以作为肝细胞癌发生和发展的预测因素,为乙型肝炎相关性肝癌的早期诊断提供临床意义。

HBsAg重组腺病毒载体的构建及在树突状细胞的表达

目的构建能高效转导HBsAg基因的重组腺病毒Ad-S,证实其能在小鼠树突状细胞内表达,以用于基因治疗的实验研究。方法应用AdEasyTMXL腺病毒载体系统,首先将HBV S基因克隆到p-shuttle-CMV形成重组穿梭载体,用PmeⅠ酶切使之线性化,电转化到BJ5183-AD-1细胞中形成重组腺病毒Ad-S质粒,后者以PacⅠ酶切线性化,转染到AD293细胞包装为重组腺病毒Ad-S。Ad-GFP或Ad-S以MOI为100转染经GM-CSF、IL-4和TNF-α等细胞因子诱导培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞,用流式细胞仪分析细胞荧光表达,Western blot、RIA和ELISA法检测HBsAg的表达。结果PCR、序列测定和酶切鉴定证明HBsAg重组腺病毒Ad-S构建正确,扩增到的病毒颗粒滴度为108/ml;流式细胞仪分析细胞荧光表达率为(92.93±2.35)%,荧光强度达236.67±45.72;Western blot、RIA和ELISA法均检测到Ad-S转染的树突状细胞能表达HBsAg。结论HBsAg重组腺病毒Ad-S构建正确并能高效转染树突状细胞和表达HBsAg,为进一步研究腺病毒介导HBsAg基因修饰的DC疫苗的免疫治疗作用奠定了基础。

流式细胞术分析p21^(HBsAg/HBsAg)转基因小鼠肝细胞凋亡

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡。方法用流式细胞仪检测6、12、18、24月龄p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21+/+野生型小鼠新鲜肝脏组织。结果转基因小鼠肝细胞凋亡率低于同月龄野生型小鼠。结论HBsAg基因的转入和表达,抑制转基因小鼠肝细胞凋亡。

慢性乙肝治疗路线图和HBV DNA、HBeAg、HBsAg定量的监测意义

慢性乙型肝炎病毒感染呈世界分布并且引起不良结局,是极为严重的健康问题。慢性乙型肝炎治疗最重要的目标是长期抑制病毒以改善预后,防止出现肝硬化、肝衰竭和肝癌。目前,抗病毒药物主要有干扰素和口服核苷(酸)类似物,核苷(酸)类似物的缺点主要在于长期治疗中出现耐药。路线图概念被用于监测耐药预测疗效。HBV DNA定量水平被作为路线图较好的监测指标。由于血清转换率及清除率过低,HBeAg、HBsAg定量检测不适合用于路线图监测,但对于使用聚乙二醇干扰素的慢性乙肝患者,可作为预测治疗应答的指标。

电化学发光与酶免疫分析检测HBsAg的比较

目的:比较电化学发光(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg的结果。方法:选择HBsAg阳性标准品和99例4种模式样本[①HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+);②HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+);③HBsAg(+)/HBcAb(+);④HBeAg(+)HBcAb(+)],分别采用ECLIA和ELISA一步法、二步法检测HBsAg。结果:ECLIA的日内CV比ELISA一步法、二步法分别提高3.3%和3.2%,日间CV分别提高3.5%和3.3%,敏感度各为0.063、0.5和0.25 ng/m。l①②③模式3种方法HBsAg 100%阳性率。④模式2例ECLIA 1∶50稀释和ELISA二步法为阳性,而ECLIA原倍和ELISA一步法为阴性。①模式1∶50稀释后的HBsAg CO I值比原倍血清高。结论:ELISA一步法检测HBsAg,简便快速,标本的含量较低或浓度过高可出现假阴性。为避免一步法Hook效应造成的假阴性,可采用经典的两步法。ECLIA灵敏度高,但也存在Hook效应,必要时应稀释标本进行检测或进行中和确证试验。