茵陈水提物对多药耐药蛋白3基因突变致新生儿肠外营养相关性胆汁淤积的保护作用

目的探讨茵陈水提物对多药耐药蛋白3(MDR3)基因突变导致的新生儿肠外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的保护作用及可能机制。方法①将人原代培养肝细胞应用体外细胞培养、CRISPR/Cas9慢病毒感染、MDR3突变基因导入等技术处理后,比较1%脂肪乳诱导处理前(0)和处理后16、32、48 h不同时间点肝细胞上清液中肝胆生化指标〔丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、间接胆红素(IBil)、总胆汁酸(TBA)〕的水平,确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间。②将人原代培养肝细胞株按随机数字表法分为空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组、茵陈水提物干预组。空白对照组只用培养液处理,MDR3基因野生型组应用慢病毒感染融入野生型MDR3基因和培养液培养,MDR3基因突变组应用慢病毒感染慢病毒导入MDR3(c.485T>A、c.2793insA、c.1031G>A、c.3347G>A)突变基因和培养液培养,茵陈水提物干预组应用慢病毒感染导入MDR3突变基因和培养液培养的基础上,加入100 g/L茵陈水提物预处理,然后将4组肝细胞分别加入1%脂肪乳诱导处理,处理时间为构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需时间。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定4组肝细胞上清液中肝胆生化(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组肝细胞编码MDR3、胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白(MRP)2~4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的三磷酸腺苷结合盒蛋白(ABCB4、ABCB11、ABCC2、ABCC3、ABCC4)和TNF基因mRNA的表达丰度。结果与空白对照组和MDR3基因野生型组比较,MDR3基因突变组在经1%脂肪乳诱导处理前和处理后16 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平比较差异无统计学意义,经1%脂肪乳诱导处理32 h和48 h MDR3基因突变组肝细胞上清液肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、IBil、TBA)水平均明显升高(均P<0.05),确定构建MDR3基因突变PNAC肝细胞模型脂肪酸诱导所需的时间为32 h。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提物干预组肝细胞在脂肪乳处理后32 h肝细胞上清液中肝胆生化指标(ALT、AST、TBil、DBil、TBA)水平均明显降低〔ALT(ng/L):148.3±2.3比164.9±7.0,AST(ng/L):2767.4±78.8比3239.4±107.1,TBi(lμmol/L):7.6±0.2比13.6±0.3,DBi(lμmol/L):1.8±0.1比5.7±0.2,TBA(μmol/L):3.4±0.2比6.7±0.1,均P<0.05〕;空白对照组、MDR3基因野生型组、MDR3基因突变组和茵陈水提物干预组肝细胞编码MDR3、MRP2、MRP3、MRP4的ABCB4、ABCC2、ABCC3、ABCC4基因mRNA表达丰度差异无统计学意义;TNF基因mRNA在MDR3基因突变组呈高表达(2-ΔΔCt:1.258±0.200比1.001±0.052),茵陈水提物干预组呈低表达(2-ΔΔCt:0.387±0.247比1.258±0.200),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR3基因突变组比较,茵陈水提取物干预组肝细胞编码BSEP的ABCB11基因mRNA的表达丰度明显增高(2-ΔΔCt:2.955±0.479比1.333±0.529,P<0.05)。结论茵陈水提物对MDR3基因突变导致的PNAC有一定保护作用,可能与拮抗炎症反应,降低TNF基因的mRNA表达和改善编码BSEP的ABCB11基因的mRNA表达有关。

茵陈化学成分、药理作用及在肝胆疾病中的临床应用研究进展

茵陈为肝胆系疾病常用中药,是经典利湿退黄药,具有清热利湿、利胆退黄的功效,其主要化学成分包括黄酮类、香豆素类、有机酸类、挥发油类化合物等;现代药理研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗癌、抗糖尿病及代谢综合征等作用,临床上主治黄疸尿少、湿温暑湿、湿疮瘙痒,治疗疟疾、肝炎、胆石症、胆囊炎、肝癌等疾病。对茵陈中的化学成分、药理作用机制、在肝胆系疾病的临床应用进行全面总结及分析,以期为茵陈的进一步开发和利用提供参考。

茵陈标准汤剂与其饮片中的化学成分比较

目的 比较茵陈标准汤剂及其饮片中的化学成分,为阐明其药效物质奠定基础。方法 制备茵陈标准汤剂和饮片供试品溶液,采用超快速液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UFLC-Q-TOF-MS/MS)技术在负离子模式下进行检测,利用PeakView 1.6质谱分析软件提取各样品总离子流图,通过与对照品、文献数据、化合物在线检索数据库PubChem等比对,鉴定茵陈标准汤剂及其饮片中的化学成分,并进行差异成分分析。结果 在茵陈标准汤剂及其饮片中共鉴定出化学成分125个,包括有机酸类成分50个、黄酮类成分39个、香豆素类成分3个、氨基酸类成分2个、木脂素类成分5个、其他类成分26个。茵陈标准汤剂中的3-甲氧基-咖啡酸-4-O-葡萄糖苷、对羟基苯甲酸、咖啡酸4-O-葡萄糖苷、spiraeoside、phenyl β-D-glucoside未在其饮片中检测到,而饮片中的6′-6′绿原酸二聚体、槲皮素-5-葡萄糖苷、apigenin 7-methyl ether 5-(6″-malonylglucoside)、槲皮素-3-O-阿拉伯糖苷、6″-caffeoylhyperin、6-O-caffeoyl-D-glucoside未在标准汤剂中检测到。结论 茵陈饮片中的大部分成分传递到了标准汤剂中,但有少数成分在煎煮过程中全部或部分发生了化学反应,在标准汤剂中转化成了其他成分或形成了新成分。

高效液相色谱法测定花蕾期茵陈中黄酮类成分的含量

目的:建立花蕾期茵陈4个黄酮类成分的含量测定方法。方法:样品用醋酸乙酯超声提取30min。KromasilODS柱,流动相乙腈四氢呋喃 1%醋酸水溶液(2 5∶2 1. 5∶76 ) ,检测波长347nm。结果:茵陈花蕾中的4个黄酮类成分5 ,7,4′. 三羟基 6 ,2′,5′. 三甲氧基黄酮(arcapillin) ,5 ,3′,4′. 三羟基 6 ,7 .二甲氧基黄酮(cirsiliol) ,蓟黄素(cirsimaritin)和3′甲氧基蓟黄素(cirsilineol)在该色谱条件下获良好分离,分别在0 . 0 35～0 5 6 ,0 . 0 4 3～0 . 6 9,0 . 0 4 0～0. 6 5 ,0 . 0 4 0～0 6 4 μg线性关系良好(r =0 . 9992 ,0 9999,0 . 9997,0 9997) ,加样回收率分别为96. 8% ,97. 3% ,96. 8% ,98 .5 % ,重复性分别为2 . 5 % ,3 0 % ,1 5 % ,3. 2 %。结论:该方法分离度好,为花蕾期茵陈及其制剂的质量控制提供。

绵茵陈药材中绿原酸定性定量方法研究

目的 :对商品绵茵陈中绿原酸的鉴别及含量测定方法进行研究。方法 :薄层色谱法鉴别 ,采用以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板 ,以醋酸丁酯 甲酸 水 (7∶2 .5∶2 .5 )上层溶液为展开剂 ;高效液相色谱法进行含量测定 ,样品用 85 %甲醇回流提取 ,ZorbaxSB ODS柱 ,甲醇 3%醋酸水溶液 (15∶85 )为流动相 ,检测波长 32 7nm。结果 :薄层层析鉴别重现性好 ;在上述液相色谱条件下 ,绿原酸获良好分离 ,进样量在 0 .0 75～ 0 .6 μg与峰面积呈线性关系 (r =0 .9999) ,加样回收率为 10 0 .9% ,重现性为 1.4 %。对收集的 10批药材进行了定性鉴别和含量测定。结论 :为绵茵陈质控提供了可靠的方法。

HPLC测定金银花、菌陈及其10种中成药中绿原酸的含量

本文应用０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠－甲醇（７５：２５，ｐＨ３．２）为流动相，在ＯＤＳ反相柱上采用外标法测定了市售的金银花、茵陈及其１０种中成药中绿原酸的含量。本法简便、快速、灵敏、重现性好。绿原酸的检测线性范围为２０～１２０μｇ／ｍｌ，ｒ＝０．９９９７。样品加样回收率为９９．３９％，ＲＳＤ为１．２３％。

谱效结合方法对绵茵陈大孔吸附树脂精制工艺的评价

目的分别以HPLC指纹图谱的主成分保留率和急性肝损伤的药效模型为指标,评价绵茵陈提取液的大孔吸附树脂精制工艺的合理性。方法以HPLC指纹图谱的主峰保留率为指标,对绵茵陈提取液的精制工艺进行评价;建立CCl4致小鼠急性肝损伤模型,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),并观察肝组织病理学变化;进行小鼠灌胃给药的急性毒性实验,考察绵茵陈提取液精制前后口服给药的安全性。结果绵茵陈提取液精制前后的HPLC指纹图谱基本一致;绵茵陈提取液精制前后的保肝作用无显著差异;绵茵陈提取液精制前后均未发现明显的急性毒性反应。结论以HPLC指纹图谱和药效学实验相结合的评价方法,证实了绵茵陈提取液大孔吸附树脂精制工艺的合理性。

茵陈挥发油的超临界CO_2萃取法与水蒸气蒸馏法提取的比较

采用超临界CO2 萃取法与水蒸气蒸馏法从茵陈中提取挥发油 ,用GC -MS法测定其化学成分和相对含量 ,对两种提取方法所得的挥发油进行比较 ,水蒸气蒸馏法提取茵陈挥发油的产率为0.03 %(w) ,主要成分为匙叶桉油烯醇、吉玛烯D、反式_石竹烯、2,4_戊二炔苯、β_金合欢烯等;超临界CO2 萃取法提取的产率为0.15 %(w) ,主要成分为百里酚、β_红没药烯、2_异丙基_4_甲基_1_甲氧基苯、异百里酚、2_特丁基_4_(2,4,4_三甲基戊基)苯酚、β_杜松烯等。

绵茵陈提取液的大孔树脂静态吸附工艺影响因素考察

目的:考察绵茵陈提取液的静态吸附工艺的影响因素,以确定其大孔吸附树脂工艺路线和参数。方法:以吸光度和绿原酸的比吸附量为指标,静态吸附法考察9种树脂的吸附效果和绵茵陈提取液在F树脂的吸附时间曲线;采用析因实验设计,静态吸附法考察上柱药液浓度和pH对绿原酸吸附的影响;以绵茵陈提取液和洗脱液的HPLC指纹图谱为指标,考察其精制效果。结果:不同树脂对绵茵陈提取液中成分的吸附效果有差异;绵茵陈提取液在F树脂的吸附平衡时间为6 h;上柱药液浓度和pH是影响吸附的重要因素。验证实验表明该工艺在有效保留HPLC指纹图谱成分的同时,使提取液的得膏率降低到2.5%。结论:该结果可为绵茵陈提取液的大孔树脂精制工艺路线的确定提供参考。

基于数据挖掘的肝瘟病阳黄-阴阳黄-阴黄辨证模式用药规律研究

目的总结"阳黄-阴阳黄-阴黄"辨证模式治疗肝瘟病用药规律。方法基于"中医临床科研信息一体化技术平台",制定纳入和排除标准,规则化处理后建立肝瘟病用药数据库,采用频数分析、复杂网络分析、点式互信息等分析方法进行数据挖掘。结果肝瘟病总体用药频次依次为:茵陈(1 368),赤芍(1 309),丹参(1 250),甘草(1 086),白术(1 038)等;其中阳黄证以茵陈(1 062),赤芍(1 016),丹参(970),甘草(823),石菖蒲(796),白术(760)等为主;阴阳黄证以茵陈(285),赤芍(272),白术(268),丹参(260),薏苡仁(245)等为主。核心用药中阳黄证为茵陈、赤芍、丹参;阴阳黄证为白术、茵陈、薏苡仁、附子、丹参、赤芍。阳黄、阴阳黄阶段即开始配伍自术、附子等温阳药物。结论肝瘟病用药总以清热利湿解毒、凉血活血化瘀、益气健脾为主。阳黄证以清热利湿解毒、凉血化瘀为主,阴阳黄证以温阳健脾、活血退黄为主,早期应用温法干预治疗可延缓阴黄化进程。

超声波和微波辅助法提取茵陈总黄酮的条件研究

以70%乙醇为提取溶剂,分别用超声波和微波辅助法提取茵陈黄酮类化合物,以总黄酮提取率为考察指标,通过正交实验设计优选最佳工艺条件.结果表明:超声波辅助提取的最佳条件为提取时间60min、温度60℃、5g原料使用溶剂125mL、超声波功率200W;微波辅助提取的最佳条件为提取时间24 min、5g原料使用溶剂125mL、微波功率350W.最佳提取条件下,超声波辅助提取率(3.29%)略高于微波辅助提取率(3.09%,)微波辅助提取法能明显节省提取时间.

茵陈挥发油毛细管气相色谱指纹分类

目的 茵陈挥发油毛细管气相色谱指纹谱分类鉴别。方法 以样本指纹谱之间的离差平方和及典型成分的含量为指标进行系统聚类分析。结果 茵陈挥发油毛细管气相色谱指纹谱系统聚类分析法既保留了样本完整的特征数据又准确地进行了分类识别。结论 中药挥发油毛细管气相色谱指纹谱可不经压缩而准确地进行分类识别 ,便于引用及再现。

茵陈总黄酮的提取及初步纯化

研究了3种极性不同的大孔吸附树脂对茵陈黄酮的静态吸附行为,筛选出了较优的吸附分离树脂,并对洗脱剂进行了优化.络合显色法用于茵陈总黄酮含量的测定.结果表明:DM-301对茵陈黄酮吸附效果最好,70%的乙醇(体积比)作洗脱剂洗脱效果最好,解吸率最高.茵陈总黄酮的粗黄酮粉得率为17.8%,粗黄酮粉总黄酮含量为17.3%,茵陈总黄酮含量为干重的3.08%.

清肝消痤颗粒定性定量方法研究

目的:建立清肝消痤颗粒(栀子、菌陈、浙贝母、丹参、野菊花)的质量标准。方法:采用薄层色谱法对处方中的栀子、菌陈、浙贝母、丹参进行鉴别;采用HPLC测定制剂中栀子苷的含量。结果:TIC色谱中检出栀子、菌陈、浙贝母、丹参;HPLC含量测定中,栀子苷在0．185～7．38μg之间呈良好的线性关系,r=0．999 9,平均回收率为99．7％,BSD为1．8％(n=6)。结论:所建立的鉴别方法专属性强,定量方法简便、准确,可用于清肝消痤颗粒的质量控制。

参榆颗粒的质量标准研究

目的建立参榆颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对方中丹参、地榆、黄芩、茵陈进行薄层鉴别;采用高效液相色谱法对制剂中没食子酸、黄芩苷进行含量测定。结果薄层鉴别斑点清晰、分离度好、专属性强、阴性对照无干扰。含量测定中没食子酸在10～90μg/mL(r=0.999 9)的范围内线性关系良好;平均回收率为101.89%,RSD为1.45%;黄芩苷在0.208 8～1.252 8μg(r=0.999 9)的范围内线性关系良好;平均回收率为103.4%,RSD为2.46%。结论本方法能有效控制参榆颗粒的质量。

四逆软肝方病证结合治疗肝硬化特色分析

肝硬化为慢性、难治性、不可逆性、高死亡率、顽固性疾病。笔者认为肝硬化的病因病机复杂多样,但始动病因为湿热疫毒,病机为肝肾阴虚、痰瘀互结、本虚标实、虚实夹杂,结合现代医学临床表现及病证分型,在治疗上立足中医整体观、辨证论治,以清热利湿、疏肝健脾、活血化痰、软坚散结、益气养阴为基本大法,创制四逆软肝方治疗肝硬化,临床疗效颇著,实现了肝硬化难以逆转的"四逆"。

茵陈对妊娠期肝内胆汁淤积症模型大鼠血清及胎盘组织内皮素的影响

目的研究茵陈水煎剂对妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）模型大鼠血清及胎盘组织内皮素（ET）的影响。方法以苯甲酸雌二醇针剂复制SD大鼠ICP模型；以50％茵陈水煎剂灌胃；采用ABC—ELISA法测定大鼠血清及胎盘组织ET值。结果茵陈治疗可增加胎鼠平均体重，降低胎鼠死亡率，降低孕鼠血清及胎盘组织ET水平。结论茵陈能显著降低ICP大鼠血清及胎盘组织ET水平，明显改善妊娠结局。

高效液相色谱法测定花蕾期茵陈中3′-甲氧基蓟黄素的含量

目的 :建立花蕾期茵陈中 3′ 甲氧基蓟黄素的含量测定方法。方法 :样品用甲醇回流提取 ,提取液经聚酰胺小柱净化。ODS柱 ,甲醇 乙腈 0 .5 %醋酸水溶液 (2 4∶19∶5 7)为流动相 ,检测波长 34 7nm。结果 :3′ 甲氧基蓟黄素获良好分离 ,0 .1～ 0 .8μg线性关系良好 (r =0 .9998) ,加样回收率为 10 1.3% ,重现性为 3.0 4%。 结论

茵陈的化学成分和药理作用研究进展

目的对茵陈药材在化学成分和药理作用方面的研究进行综述。方法通过系统的文献调研,以近年来的50余篇中外文文献为依据对茵陈的化学成分和药理作用进行归纳总结。结果与结论近年来从茵陈中发现了多个新化合物,实验表明该药材具有保肝利胆、降血脂、抗凝血和抗病毒等药理作用。

绵茵陈提取液的大孔树脂动态吸附工艺研究

目的:考察绵茵陈提取液在F型大孔树脂的动态吸附工艺。方法:以绵茵陈药液中绿原酸、吸光度结合HPLC指纹图谱为指标,考察其在F树脂的动态吸附及洗脱过程,确定最大上样量以及洗脱溶媒种类和用量。结果:动态吸附考察结果表明绵茵陈提取液在该树脂的最大上样量以绿原酸计为20.9mg/g干树脂,并确定5倍柱体积80乙醇为洗脱溶媒;重复验证实验表明该工艺在有效保留HPLC指纹图谱全成分的同时,使提取液的得膏率降低到2.5。结论:该精制工艺路线达到了富集有效成分的目的。