广金钱草中总黄酮提取工艺研究

目的：用正交实验法优选广金钱草中总黄酮的提取工艺。方法：以50g原药材的总黄酮提取量为评价指标，选择提取用水倍量（倍）、提取时间（h）、提取次数（次）、醇沉浓度（％）为考察因素，采用正交实验法L9（3^4）确定广金钱草中总黄酮的最佳工艺，采用分光光度法对干浸膏中总黄酮的含量进行了测定，检测波长272nm。结果：最佳提取工艺条件为提取所用水量为15倍，提取次数为3次，回流提取时间为1．5h，醇沉浓度为50％，芦丁在4．36～21．8μg/ml浓度范围之内呈良好的线性关系。平均回收率为98．92％，RSD为1．85％。结论：总黄酮正交提取工艺的研究，结果比较可靠，含量测定方法简便、准确，可用于广金钱草干浸膏中总黄酮的含量测定。

指纹图谱追踪石淋通片工艺过程中黄酮类成分的转移率

目的采用指纹图谱追踪石淋通片工艺过程中黄酮类成分的转移率。方法采用HPLC法分析,色谱柱为Zorbax SB-Aq;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(梯度洗脱);检测波长为270nm;流速为1mL.min-1;柱温为40℃。结果广金钱草11个主要特征峰的转移率在42.02%～84.17%之间;主要工艺步骤指纹峰的相似度为0.9857～0.9999之间。结论石淋通片的工艺能大部分保留广金钱草黄酮类成分,为石淋通片的工艺评价提供了一定参考。

广金钱草与金钱草指纹图谱比较

目的:建立HPLC指纹图谱方法鉴别广金钱草与金钱草药材;方法:以ODS-C_(18)5μm,250mm×4.6mm色谱柱,水(A) -乙腈(B)为流动相,梯度洗脱方式:0～15min,保持85%A,15→60min,85%A→78%A,流速0.7mL·min^(-1),柱温30℃,进样量30μL,检测波长215,270,340nm;结果:广金钱草可得到以异牡荆素为参照的11个指纹峰,金钱草可得到以槲皮素为参照10个指纹峰进行比较;结论:通过指纹图谱方式,可针对性地鉴别广金钱草和金钱草。

广金钱草总黄酮胶囊Ⅰ期临床耐受性和安全性研究

目的:评价健康受试者单次和多次口服广金钱草总黄酮胶囊的临床安全性和耐受性。方法:本研究共选取64例健康受试者,男女各半,其中54例受试者随机双盲法分配到单次给药试验组,共分7个剂量组(剂量分别为133、399、798、1197、1596、1995、2394 mg),每剂量组人数(试验药+安慰剂)分别为4(4+0)、4(4+0)、6(6+0)、10(8+2)、10(8+2)、10(8+2)和10(8+2)例;10例(8+2)受试者进入连续多次给药试验组,给药剂量为一次665 mg,3次/日,连续10 d。给药前后对全部入组受试者的血常规、尿常规、血生化、ECG、凝血功能进行定时检测,并记录生命体征。结果:64例受试者全部完成研究且无严重不良反应。单次给药试验组46例受试者中有9例(19.6%)和安慰剂组8例受试者中有2例(25.0%)均出现了轻度不良反应;连续给药试验组8例受试者中有6例(75%)和安慰剂组2例中有1例(50%)出现轻度不良反应;上述出现的不良反应,受试者均转归,且研究者判断为与试验药物可能无关。结论:健康人体单日单次口服广金钱草总黄酮胶囊不超过2394 mg或连续服药665 mg/次,3次/日,具有较好的安全性和耐受性。建议Ⅱ期临床试验使用剂量不高于665 mg/次,3次/日。

桂林山豆根挥发油的GC-MS分析

采用水蒸气蒸馏法提取山豆根(Herba desmodii multiflori)中的挥发油,通过GC—MS分析其主要化学成分,鉴定出20种挥发性化合物,占挥发油总量的83.09%。该法简便、快速、灵敏度高,为合理开发利用山豆根提供了参考。

不同提取法对广金钱草总黄酮抗氧化活性的影响研究

目的研究不同提取法对广金钱草总黄酮提取物体外抗氧化活性的影响。方法以乙醇为溶剂采用回流法和超声法提取广金钱草总黄酮,并对两种提取法所得提取物进行一系列体外抗氧化活性的测定。结果回流法提取物清除DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基的IC50值分别为0.037mg/ml、0.034mg/ml和0.034mg/ml。超声法提取物清除DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基的IC50值分别为0.041mg/ml、0.050mg/ml和0.036mg/ml。结论用回流法和超声法提取广金钱草总黄酮具有良好的抗氧化性和清除自由基的作用,但回流提取法提取物的抗氧化性和清除自由基的作用较超声法强。

石淋通片与广金钱草指纹图谱相关性的初步研究

【目的】建立石淋通片高效液相色谱(HPLC)法指纹图谱研究方法,并采用广金钱草指纹图谱评价石淋通片的质量。【方法】采用HPLC法分析,色谱柱为Zorbax SB-Aq,流动相为乙腈—体积分数0.05%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为270 nm,流速为1 mL/min,柱温为40℃。【结果】不同厂家石淋通片均具有广金钱草的11个黄酮类共有峰,但不同厂家产品质量有很大差异。【结论】采用指纹图谱与含量测定相结合可作为石淋通片质量控制方法之一。

排石Ⅰ号颗粒剂质量标准研究

目的研究排石Ⅰ号颗粒的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对制剂中广金钱草、泽泻进行定性鉴别，考要亭效液相色谱法测定排石Ⅰ号颗粒中的绿原酸的含量。结果金钱草、泽泻的薄层色谱鉴别专属性强；绿原酸进样芎妻0．01032～0．10320mg／ml范围内呈良好的线性关系，r=0．9998。平均回收率为99．95％，RSD=1.50％（n。6）。结论该方法简便、灵敏、准确、重现性好，可作为排石Ⅰ号颗粒剂的质量控制标准。

健康人体对广金钱草总黄酮胶囊单次给药的耐受试验研究

目的：探讨健康志愿者单次口服不同剂量广金钱草总黄酮胶囊的安全性和耐受性。方法：采用随机双盲安慰剂对照（试验组∶安慰剂组＝4∶1）、单剂量递增设计，将54例符合入选标准的受试者分为试验组46例、安慰剂组8例。试验组受试者分别单剂量口服广金钱草总黄酮胶囊133、399、798、1197、1596、1995、2394 mg，给药后定时进行血常规、尿常规、血生化、心电图、凝血功能监测，并记录生命体征和不良反应发生情况。结果：54例受试者均完成研究，试验组46例受试者中有9例出现了不良反应（占试验组受试者的19.6％）；安慰剂组8例受试者中，2例发生了不良反应（占安慰剂组受试者的25-0％），不能除外与试验药物的可能关系，其他受试者无不良反应发生。结论：健康人体单次服用133～2394 mg广金钱草总黄酮胶囊较为安全，耐受性良好。

广金钱草及其煎剂HPLC指纹图谱的相关性研究

目的建立广金钱草HPLC指纹图谱分析方法,研究金钱草饮片及其煎剂指纹图谱的相关性。方法采用HPLC法分析。结果广金钱草及其煎剂均标示出11个共有峰,主要特征峰的提取率在53.39%~87.40%之间;饮片与煎剂之间的相似度为0.981~0.997之间。结论本法准确可靠,重复性好,为广金钱草的物质基础研究提供了一定参考。

超声波辅助提取广金钱草总黄酮的工艺研究

为了充分合理利用广金钱草的自然资源,探索超声波辅助提取广金钱草总黄酮的工艺条件。以广金钱草提取干浸膏中总黄酮的含量为指标,采用单因素和正交试验确定超声波辅助提取广金钱草总黄酮的工艺条件。优化的的工艺条件为提取溶剂乙醇浓度为70%,超声时间为30min,料液比为1︰20,超声次数为3次。超声波辅助提取广金钱草总黄酮的工艺研究结果比较可靠,而且简单易行,具有提取温度低、时间短、含量高的优点。

石淋通颗粒质量标准的研究

目的制定石淋通颗粒的质量标准。方法对处方中的广金钱草进行了薄层鉴别。用紫外分光光度法测定了制剂中总黄酮的含量。检测波长为274nm。结果薄层鉴别方法专属性强,含量测定通过方法学考察,总黄酮以芦丁计在0.050125mg^0.30075mg范围内,呈良好的线性关系。芦丁的平均回收率为99.40%(n=9),RSD为0.93%。结论方法简便、准确、重现性好。可用于控制石淋通颗粒质量。

复方广金钱草合剂改善肾草酸钙结石大鼠肾功能的效果及其机制

目的:探讨复方广金钱草合剂改善肾草酸钙结石大鼠肾功能的效果及其机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠40只随机分为观察组和对照组,每组20只。观察组采用L-羟脯氨酸注射法诱导创立肾草酸钙结石大鼠模型,并以复方广金钱草合剂灌胃干预28 d。分别于对照组入组后和观察组建模前、建模后1 d、建模后28 d收集尿液标本,进行尿量、尿蛋白、尿肌酐、尿钙等肾功能相关指标的检测。并在收集尿液标本的同时取2组尾静脉血2 mL,进行血肌酐、血尿素氮等肾功能指标的检测。观察组干预28 d均双肾标本,其中左肾制成10%匀浆进行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平检测,右肾组织切片并通过免疫组织化学检测骨桥蛋白(OPN)和转化生长因子-β(TGF-β)等炎性相关蛋白表达情况。结果:与对照组比较,观察组建模后1 d尿量降低,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组建模前比较,观察组建模后1 d尿量降低,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组建模后1 d比较,观察组建模后28 d尿量升高,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,观察组肾组织MDA水平以及OPN、TGF-β阳性表达率升高,SOD、GSH-Px水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方广金钱草合剂可改善肾草酸钙结石大鼠肾功能,而改善氧化应激和炎性反应可能为其作用机制。

广金钱草对肝内胆汁淤积大鼠的干预作用

目的研究广金钱草提取物对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导急性肝内胆汁淤积大鼠的保护作用。方法SD大鼠共分7组:正常对照组,模型组,阳性对照(熊去氧胆酸)组,广金钱草水煎液组,广金钱草正丁醇萃取物高、中、低剂量组。建立ANIT胆汁淤积大鼠模型,除正常对照组和模型组外,其余各组分别灌胃给予相应药物干预。大鼠手术插管收集胆汁后,腹主动脉取血。测定给药后各时间点胆汁流量,并检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、总胆汁酸(TBA)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、一氧化氮(NO)、环磷酸腺苷(cAMP)、谷胱苷肽(GSH)水平及胆汁中TBA、GSH水平。结果与模型组比较,广金钱草正丁醇萃取物高、中、低剂量能显著增加胆汁淤积大鼠的胆汁分泌量(P<0.01),显著降低血清中GPT、GOT、ALP、TBA水平,同时升高NO、cAMP、GSH水平(P<0.01,P<0.05);并能显著增加胆汁中TBA水平(P<0.01),降低胆汁中GSH水平(P<0.01)。结论广金钱草具有抗ANIT诱导的急性胆汁淤积、保护肝脏及促进胆汁分泌的作用。

金钱草及混伪品的红外光谱法鉴别

本文采用红外光谱法结合二阶导数光谱法对金钱草及混伪品的红外光谱特征进行分析与鉴定。金钱草及混伪品的一维红外图谱和二阶导数红外图谱整体上较相似,但在2000~400 cm^(-1)范围内的峰形、峰位和峰强度有一定的差异。红外光谱反映了金钱草及其混伪品中黄酮及黄酮苷类、酯类、多糖、酚类等芳香化合物特征,不同品种这些化合物的组成及含量有一定的差异。本法具有准确、简便、直观等优点,适合金钱草及混伪品的鉴别与区分,为金钱草及其制剂开发和临床合理用药提供基础。

基于UPLC-Q/TOF-MS的广金钱草水提物抗肾草酸钙结石大鼠的血清代谢组学研究

目的基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)技术探讨广金钱草水提物对肾草酸钙结石大鼠血清中内源性标志物的影响,从血清代谢组学角度阐释广金钱草水提物抗肾草酸钙结石的分子机制。方法将SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、广金钱草组(2.2 g·kg-1),每组10只。灌胃给药1 h后,模型组及广金钱草治疗组再灌胃给予15%乙二醇水溶液,灌胃体积10 mL·kg-1,连续21 d。观察大鼠一般情况并测定体质量;检测大鼠血清尿酸、尿素氮、血清肌酐、血Ca和血Mg等肾功能生化指标;计算大鼠肾脏肥大指数;HE染色观察肾脏组织病理形态。应用UPLC-Q/TOF-MS技术进行血清样品的分离和数据采集,通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)分析广金钱草水提物对内源性代谢物的影响,鉴定肾草酸钙结石模型大鼠的生物标记物和代谢通路,以确定广金钱草对肾草酸钙结石干预作用的代谢途径。结果共筛选和鉴定出与肾草酸钙结石密切相关的16个生物标记物,以及14条代谢通路。广金钱草可能通过对氨基酸代谢、甘油磷脂代谢、泛酸和辅酶A代谢等多条代谢通路发挥调节作用,可回调酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、甜菜碱、尿苷、泛酸等12个代谢物。结论广金钱草水提物抗肾草酸钙结石的作用可能与其通过多条代谢通路改善内源性代谢物的水平,恢复机体正常代谢活动有关。

厌食康颗粒的质量控制

目的:建立厌食康颗粒的质量检测方法。方法:用薄层色谱法对该颗粒剂中的广山楂、陈皮、小槐花进行了鉴别;用高效液相色谱法测定该颗粒剂中的橙皮苷(Hesperidin)含量。结果:薄层色谱中斑点清晰,易于识别;橙皮苷进样量在0.4096～2.0480μg内呈线性关系,r=0.999,平均加样回收率为99.2％,RSD为0.7％。结论:本方法可有效地控制厌食康颗粒的质量。

畲药嘎狗粘质量标准的建立

目的：研究嘎狗粘的质量标准,为制定合理的质控方法提供科学依据。方法：运用显微特征、薄层色谱法、高效液相色谱法对嘎狗粘中各成分进行定性、定量测定;对醇溶性浸出物、水分和总灰分进行测定。结果：嘎狗粘显微特征、薄层色谱鉴别特征明显;槲皮素、山柰素分别在0.002-0.050μg（r=1.000 0）、0.004-0.100μg（r=0.999 9）范围内呈线性,平均加样回收率分别为97.89%（RSD=0.89%,n=6）,98.93%（RSD=1.31%,n=6）。结论：研究所得方法简便、准确、重复性好,可有效地控制嘎狗粘的质量。

HPLC法测定广金钱草茎、叶中4种黄酮类成分的含量

目的:测定9批不同产地广金钱草茎、叶中新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素的含量。方法:采用高效液相色谱法,采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.2%磷酸水溶液(14∶86),流速0.8ml·min-1,检测波长335 nm,柱温为30℃。结果:新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素线性范围分别为13.5~540.8 ng、33.0~1321.6 ng、26.0~1040.6 ng、13.6~543.6 ng(r>0.999);精密度、稳定性、重复性试验的RSD小于3.0%;平均回收率分别为98.2%、98.6%、99.9%和98.0%,RSD分别为1.4%、0.9%、1.7%和1.1%(n=9)。广金钱草叶中4种成分的含量远大于茎。结论:建立的方法简单、灵敏、准确、可靠,重复性好,建立的方法可用于广金钱草的质量控制,也为如何保证广金钱草的质量提供了理论依据。

治疗泌尿系结石专利中药复方的用药规律探讨

【目的】挖掘国家专利数据库中治疗泌尿系结石专利内服中药复方的用药规律。【方法】在“国家知识产权局”网站(http://www.cnipa.gov.cn/)中检索关于泌尿系结石的内服中药复方专利,将中药录入中医传承辅助平台(V2.5),统计药物频次,进行药物关联组合及关联规则分析,并提取核心药物组合和潜在的新方组合。【结果】共纳入308首处方,涉及443味中药。其中用药频次较高的中药为金钱草、鸡内金、海金沙、石韦、甘草、牛膝、滑石等;常用药物组合为“鸡内金,金钱草”“海金沙,金钱草”“鸡内金,海金沙”“石韦,金钱草”;高频药物关联规则为“车前子→金钱草”“石韦→金钱草”“滑石→金钱草”等;挖掘得到核心药物组合23个以及潜在新方组合8个。【结论】泌尿系结石的中药治疗以祛邪扶正、标本同治为原则,用药针对泌尿系结石的“湿、热、瘀、虚”的病机特点;祛邪以清热祛湿、利尿通淋、理气活血化瘀为法,扶正以补肾健脾、益气摄精为法。挖掘得到的新方组合可为泌尿系结石的临床用药及中药新方研发提供思路及方向。