基于Th1细胞功能研究中药合地塞米松对哮喘大鼠pJAKs/pSTATs的影响

目的观察中药淫羊藿女贞子煎剂及提取物配伍地塞米松对哮喘大鼠肺组织中与Th1细胞信号通路相关的JAKs及STATs蛋白磷酸化表达的影响。方法 SPF级雄性大鼠,随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松组(C组)、淫羊藿女贞子煎剂组(D组)、地塞米松合煎剂组(E组)、淫羊藿女贞子提取物组(F组)、地塞米松合提取物组(G组)。卵蛋白致敏,激发建立大鼠哮喘模型,腹腔注射地塞米松和/或灌胃淫羊藿女贞子煎剂或提取物,免疫荧光法检测肺组织JAKs(JAK1、JAK2)及STATs(STAT1、STAT2、STAT4)蛋白的磷酸化表达。结果与A组比较,B组大鼠肺组织pJAK1、pSTAT1、pSTAT2蛋白表达均显著升高(均P<0.01),pJAK2、pSTAT4蛋白表达显著降低(均P<0.01);与B组比较,各给药组pJAK1、pSTAT1、pSTAT2蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),pJAK2、pSTAT4蛋白表达显著升高(均P<0.01);与C组比较,E组、G组能pJAK1、pSTAT1、pSTAT2的蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),pJAK2、pSTAT2的蛋白表达显著升高(P<0.01或P<0.05)。与单用地塞米松比较,地塞米松合煎剂或提取物组能显著性调整pJAK1、pJAK2、PSTAT1、pSTAT2、pSTAT4蛋白的表达。结论调节哮喘大鼠肺组织中与Th1细胞信号通路相关的JAKs/STATs可能是淫羊藿女贞子煎剂及提取物协同激素治疗哮喘的作用机制之一。

淫羊藿女贞子合布地奈德对哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5的影响

目的研究中药淫羊藿女贞子煎剂及提取物配伍对布地奈德气道雾化的哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5蛋白磷酸化表达的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠,采用数字表法随机分为7组,分别是正常组、模型组、布地奈德组、煎剂组、布地奈德合煎剂组、提取物组、布地奈德合提取物组。卵蛋白致敏、激发建立大鼠哮喘模型,雾化吸入布地奈德和(或)灌胃淫羊藿女贞子煎剂或提取物,免疫荧光法检测肺组织JAKs(包括JAK1、JAK2、JAK3、TYK2)及STAT4、STAT5蛋白的磷酸化表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肺组织p JAK1、p JAK3、p TYK2和p STAT5蛋白表达均显著上调(P均<0.01),p JAK2和p STAT4显著下调(P均<0.01)。与模型组比较,5个给药组均能显著影响p JAKs各蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),上调p STAT4蛋白表达的阳性面积,下调p STAT5蛋白的阳性面积及积分光密度(IOD)(P<0.01或P<0.05)。与单用布地奈德比较,布地奈德合煎剂组或合提取物组对p JAKs蛋白表达和p STAT4、p STAT5蛋白表达的Area作用更优(P均<0.01)。结论在布地奈德治疗哮喘的同时合用中药淫羊藿女贞子,可通过调节JAK/STAT4-5蛋白的磷酸化表达产生协同增效作用。

淫羊藿女贞子配伍对哮喘大鼠模型Th1/Th2调节作用的研究

目的:研究淫羊藿女贞子配伍对哮喘大鼠模型Th1/Th2失衡的免疫调节作用。方法:采用OVA(ovalbumin,卵蛋白)致敏、激发复制大鼠慢性哮喘模型,以阿斯美胶囊为对照药,分别通过放免法及酶免法检测血及BALF(Bronchoalveolar lavage fluid,支气管肺泡灌洗液)中IL-4及IFN-γ的含量、免疫组化法检测肺组织IL-4和IFN-γ蛋白表达,RT-PCR技术检测肺组织T-bet和GATA-3 mRNA的表达,探讨淫羊藿女贞子对大鼠哮喘模型Th1/Th2调节途径的影响作用。结果:淫羊藿女贞子能显著抑制BALFIL-4含量(P<0.01),并降低血及BALF中IL-4/IFN-γ比值(P<0.05);对肺组织IL-4蛋白表达的Area有降低作用(P<0.05),并能抑制IL-4/IFN-γ Area的比值增高(P<0.01);上调肺组织T-bet mRNA表达,下调GATA-3 mRNA表达(P均<0.05)。结论:淫羊藿女贞子对哮喘大鼠Th1/Th2失衡有一定的调节作用。

淫羊藿女贞子配伍提高哮喘大鼠对地塞米松作用的敏感度研究

目的探讨中药淫羊藿女贞子合用的煎剂及其提取物在地塞米松干预大鼠哮喘的模型中,对于糖皮质激素受体(GR)作用途径的影响,以评价中药提高哮喘大鼠对糖皮质激素作用的敏感度。方法 SPF级雄性SD大鼠卵蛋白诱发哮喘造模,在地塞米松治疗的同时给予淫羊藿女贞子合用的煎剂或提取物。采用免疫组化、Western blot法及实时荧光PCR技术检测肺组织GRα、GRβ、HSP90的蛋白及m RNA的表达。结果与正常组相比,模型组肺组织中GRα与HSP90蛋白和m RNA的表达、GRβm RNA的表达、GRα/GRβ,GRα/HSP90在m RNA水平和GRβ/HSP90在蛋白水平有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,地塞米松组GRα表达明显下调(P<0.05);淫羊藿女贞子煎液及提取物单用及合用地塞米松组均能明显上调肺组织中GRα和HSP90的表达、GRα/GRβ和GRα/HSP90在m RNA水平的比值(P<0.05或P<0.01),抑制GRβm RNA表达以及GRβ/HSP90(P均<0.01)。结论淫羊藿女贞子煎剂及提取物均能通过改善GR亚型与HSP90的表达,调整GR作用途径而提高哮喘大鼠对地塞米松作用的敏感度。

基于神经网络模型评价淫羊藿女贞子配伍对衰老大鼠自由基损伤的作用

目的:研究大鼠血清氧化调节因子的增龄性改变及平补阴阳中药淫羊藿女贞子的影响作用。方法:8个月龄雄性SD大鼠,随机分为7组,饲养至相应月龄,包括9个月龄组、12个月龄组、15个月龄组、17个月龄组,淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿女贞子组(配伍组),以3、6个月龄雄性大鼠为青年对照组。各用药组饲养至15个月龄后开始灌胃给予相应药物2个月。取血清检测以下指标:总抗氧化能力(TT-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、总一氧化氮合成酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、结构型一氧化氮合酶(cNOS)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)。结果:与青年大鼠比较,17个月龄大鼠血清SOD、GSH、GSH-PX及T-AOC水平显著降低(均P<0.01),NO、tNOS、iNOS、MDA及8-OHDG含量显著升高(P<0.05或0.01),cNOS差异无统计学意义。与17个月龄大鼠比较,配伍组SOD、GSH、GSH-PX及T-AOC水平显著升高(均P<0.01),NO、tNOS、iNOS、cNOS、MDA及8-OHDG含量均显著降低(P<0.05或0.01)。基于多层感知(Multi-Layer Perceptron,MLP)神经网络模型,结果显示淫羊藿女贞子合用可使17个月龄自然衰老大鼠的上述指标的改变逆转至(10.45±0.87)个月,作用优于淫羊藿、女贞子单用。结论:淫羊藿女贞子配伍延缓衰老的作用与其改善衰老大鼠血清自由基损伤有关。

淫羊藿女贞子配伍(4∶3)影响自然衰老大鼠脾脏及胸腺的研究

目的探讨自然衰老大鼠胸腺及脾脏的病理和脾脏自由基损伤的增龄性改变,并研究淫羊藿女贞子单用及配伍作用的差异。方法8月龄雄性SD大鼠,随机分为7组,饲养至相应月龄,包括9月龄组、12月龄组、15月龄组、17月龄组、淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿女贞子组(配伍组),以3、6月龄雄性大鼠为青年对照组。各用药组饲养至15月龄后开始灌胃给予相应药物2个月后处死。剖取脾脏和胸腺。计算脏器指数,HE染色观察病理改变,检测脾脏总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。结果与青年大鼠比较,17月龄老年大鼠脾脏及胸腺出现退行性的病理改变,且脾脏出现自由基累积,抗氧化能力减弱。与17月龄大鼠比较,淫羊藿女贞子配伍组能显著改善脾脏及胸腺退行性病理改变,增加脾脏SOD水平(P<0.01)。基于多层感知(multi-layer perceptron,MLP)神经网络模型进行综合分析,证实配伍组对自然衰老大鼠脾脏及胸腺的综合作用,但该作用与淫羊藿、女贞子单用比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论淫羊藿女贞子合用能够延缓免疫器官的衰老相关的退行性的改变。

淫羊藿、女贞子配伍激素对哮喘大鼠ET/NO平衡的影响作用

目的研究淫羊藿、女贞子配伍糖皮质激素对哮喘大鼠ET/NO平衡的影响作用。方法在建立普通大鼠哮喘模型的基础上,给予腹腔注射地塞米松2周治疗,同时配合灌胃淫羊藿女贞子煎液,检测肺组织匀浆中ET-1、NO、NOS(分型)含量,并计算ET-1/NO、ET-1/NOS比值。结果哮喘模型组较正常对照组肺组织ET-1、NO、tNOS、iNOS含量均显著上升,但cNOS含量显著降低,ET/NO无显著改变,ET/cNOS显著升高。与哮喘模型组比较,激素干预组,淫羊藿女贞子组,淫羊藿女贞子合激素组ET-1、iNOS含量、ET/cNOS均显著降低;淫羊藿女贞子合激素组NO含量显著降低;淫羊藿女贞子合激素组、淫羊藿女贞子组的cNOS含量显著上升。结论淫羊藿女贞子配伍激素防治哮喘的作用与调节ET/NO(NOS)平衡作用有关。

基于神经网络模型评价淫羊藿、女贞子配伍对自然衰老大鼠肾脏、睾丸及肾上腺的影响

目的:研究自然衰老大鼠肾脏、睾丸和肾上腺的病理变化、肾脏自由基损伤的增龄性改变,以及中药淫羊藿、女贞子对其的影响,基于神经网络模型评价药物作用的差异。方法:8月龄雄性SD大鼠,随机分为7组,包括9月龄组、12月龄组、15月龄组、17月龄组、淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿女贞子组(配伍组);另以3月、6月龄雄性大鼠为青年对照组。3个用药组饲养至15月龄后开始灌胃给予相应药物2个月后处死,其他组大鼠饲养至相应月龄后处死。剖取肾脏、肾上腺及睾丸,HE染色观察病理改变;制备肾脏匀浆,检测相关指标与水平的变化。结果:与青年大鼠比较,17月龄组老年大鼠肾脏、睾丸及肾上腺出现退行性的病理改变,且肾脏组织一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平降低,总一氧化氮合成酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及丙二醛(MDA)水平升高(P<0.05或P<0.01)。与17月龄组比较,配伍组肾上腺及睾丸退行性病理改变减轻,肾脏组织T-AOC、SOD、GSH、NO水平升高,tNOS、iNOS及MDA水平降低(P<0.05或P<0.01)。基于多层感知(MLP)神经网络模型评价药物的综合作用,结果显示,淫羊藿、女贞子配伍可使17月龄自然衰老大鼠的上述指标改变逆转至(9.79±1.44)个月。结论:淫羊藿、女贞子配伍具有延缓衰老的作用,可能与改善衰老大鼠肾上腺及睾丸退行性病理改变、提高肾脏抗氧化能力有关。

淫羊藿女贞子配伍调节哮喘大鼠NO/ET及HPA轴作用的研究

目的:观察淫羊藿女贞子配伍对哮喘大鼠模型NO/ET及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的调节作用。方法:采用卵蛋白(OVA)致敏、激发复制大鼠慢性哮喘模型,以阿斯美胶囊为对照药,检测血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中内皮素(ET),NO,诱生型一氧化氮合酶(iNOS),原生型一氧化氮合酶(cNOS)的含量,血清皮质酮(CORT)、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平,肺组织糖皮质激素受体(GCR)蛋白表达。结果:淫羊藿女贞子能抑制BALF中ET,NO浓度的升高(P<0.05);能明显下调血及BALF iNOS水平(P<0.01或P<0.05),升高血及BAFL中cNOS水平(P<0.01或P<0.05);明显升高血清CORT含量(P<0.01);上调肺组织GCR的蛋白表达(P<0.05)。结论:淫羊藿女贞子防治哮喘的作用与其对ET,NO(NOS),HPA轴调节作用有关。

淫羊藿合女贞子对激素干预哮喘大鼠糖皮质激素受体亚型及转录因子的影响

目的:研究地塞米松合用中药淫羊藿女贞子对哮喘大鼠糖皮质激素受体(GR)亚型及转录因子的影响。方法:实验大鼠随机分为7组:正常对照(N)组、哮喘模型(A)组、激素干预(GC)组、淫羊藿女贞子(YN)组、淫羊藿女贞子合激素干预Ⅰ组(YN+GC组Ⅰ)、淫羊藿女贞子合激素干预Ⅱ组(YN+GC组Ⅱ)、淫羊藿女贞子合激素干预Ⅲ组(YN+GC组Ⅲ)。哮喘大鼠在激素干预不同阶段合用淫羊藿女贞子,激素撤停2周后处死,检测血清GR亚型含量、肺组织GR亚型mRNA和54种转录因子蛋白表达。结果:中药合激素干预的3个组均显著抑制血清中GRβ含量,但上调肺GRβmRNA表达。GC组肺组织有43种转录因子表达较哮喘组下调,仅有1种上调;与GC组比较,中药合激素干预的3个组分别有49种、45种、46种转录因子表达上调。结论:淫羊藿女贞子合用地塞米松的协同抗炎及抑制激素的副作用与影响GR亚型及上调肺转录因子的表达有关。

淫羊藿女贞子对激素干预撤停阶段大鼠哮喘模型HPA轴及骨代谢的影响

目的:探索淫羊藿女贞子配伍对哮喘模型大鼠激素撤停阶段下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴及骨代谢的影响。方法:比较各组血清皮质醇(COR),及骨钙素(BGP),血浆促肾上腺皮质激素(ACTH),下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量的差异。结果:与激素干预哮喘模型组比较,淫羊藿女贞子合激素干预Ⅰ,Ⅱ组血浆ACTH含量显著降低,下丘脑CRH含量无明显差异;淫羊藿女贞子合激素干预Ⅱ组血清BGP,COR含量显著升高。结论:淫羊藿女贞子对激素干预哮喘模型有改善糖皮质激素(GC)类药物对内源性GC的抑制作用,改善骨代谢。

淫羊藿女贞子对激素干预哮喘大鼠模型气道炎症的影响研究

目的比较研究哮喘大鼠模型地塞米松干预撤停不同阶段(撤停前、撤停中、撤停后)合用淫羊藿女贞子的协同抗炎作用。方法卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型,腹腔注射地塞米松模拟激素干预过程,分别在激素干预不同阶段合用中药淫羊藿女贞子,观察比较药物对激素干预各阶段哮喘模型支气管肺泡灌洗液(branchoalveolar lavage fluids,BALF)涂片嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)计数,BALF中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukine,IL)-4、IL-5、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果①激素撤停前阶段:淫羊藿女贞子合用激素干预组能下调哮喘模型EOS数量和IL-5、IL-4、TNF-α含量,上调IFN-γ表达,调节Th1/Th2失衡。②激素撤停中阶段:淫羊藿合用女贞子合激素干预Ⅰ、Ⅱ组能显著下调哮喘模型大鼠EOS数量、IL-5水平;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ组能显著提高IFN-γ/IL-4比值;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组可显著抑制TNF-α含量。③激素撤停后阶段:激素干预组EOS炎症加重;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ组能下调哮喘模型大鼠EOS数量,淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组对IL-5也有显著的抑制作用;淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能降低IL-4含量,升高IFN-γ含量,仅淫羊藿女贞子合激素干预Ⅰ组对IFN-γ/IL-4有显著调节作用,还能显著降低TNF-α含量。结论激素应用可有效地抑制EOS为主的气道炎症。但随着激素用量的撤减及停用,其抗炎作用减弱,气道炎症加重。淫羊藿女贞子在激素撤停早期介入与糖皮质激素的协同增效抗炎作用更优。

淫羊藿女贞子对激素干预哮喘大鼠模型气道炎症的影响研究

目的比较研究哮喘大鼠模型地塞米松干预撤停不同阶段（撤停前、撤停中、撤停后）合用淫羊藿女贞子的协同抗炎作用。方法卵清白蛋白（ovalbumin，（）VA）致敏激发建立大鼠哮喘模型，腹腔注射地塞米松模拟激素干预过程，分别在激素干预不同阶段合用中药淫羊藿女贞子，观察比较药物对激素干预各阶段哮喘模型支气管肺泡灌洗液（branchoalve01arlavagefluids，BAI．F）涂片嗜酸粒细胞（eosinophils，E0s）计数，BALF中γ-干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白介素（interleukine，IL）一4、IL-5、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）含量。结果①激素撤停前阶段：淫羊藿女贞子合用激素干预组能下调哮喘模型EOS数量和IL-5、IL-4、TNF-α含量，上调IFN-γ表达，调节Th1／Th2失衡。②激素撤停中阶段：淫羊藿合用女贞子合激素干预Ⅰ、Ⅱ组能显著下调哮喘模型大鼠EOS数量、IL-5水平；淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ组能显著提高IFN-γ／IL-4比值；淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组可显著抑制TNF-α含量。③激素撤停后阶段：激素干预组EOS炎症加重；淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ组能下调哮喘模型大鼠EOS数量，淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅱ组对IL-5也有显著的抑制作用；淫羊藿女贞子合用激素干预Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能降低IL-4含量，升高IFN-γ含量，仅淫羊藿女贞子合激素干预Ⅰ组对IFN-7／IL-4有显著调节作用，还能显著降低TNF-a含量。结论激素应用可有效地抑制EOS为主的气道炎症。但随着激素用量的撤减及停用，其抗炎作用减弱，气道炎症加重。淫羊藿女贞子在激素撤停早期介入与糖皮质激素的协同增效抗炎作用更优。