Ⅳ型胶原α5链基因突变致奥尔波特综合征两家系遗传学分析

目的:分析奥尔波特(Alport)综合征的遗传学特征。方法:对原因不明的反复尿检异常的2名先证者进行基于高通量测序技术的全外显子组测序,通过基因突变的致病性、孟德尔遗传规律和临床表型的综合分析,筛选出致病的基因突变,最后通过Sanger测序在家系成员中验证基因突变。结果:两个家系中分别鉴定出 COL4A5 基因上的2个杂合性剪接位点突变:c.2147-2A>T(IVS27)和c.646-2A>G(IVS11)(NM_033380),且这2个杂合突变分别与2个家系的患病成员呈现共分离关联。结论:Alport综合征主要通过女性直系患者遗传,临床上可以通过有效的遗传咨询进行产前诊断。

应用两种Ⅳ型胶原α5抗体诊断Alport综合征的比较

目的：Ⅳ型胶原α5染色在Alport综合征（AS）的诊断中起重要作用,很多肾病中心对肾组织和皮肤行Ⅳ型胶原α5染色以鉴别诊断AS.本研究利用南京军区南京总医院肾脏科标本库组织比较不同抗体、不同方法间的差异. 方法：选择2013年l～3月26例肾活检冰冻组织和15例皮肤石蜡组织,选用两家公司的抗体平行比较.单克隆鼠抗人Ⅳ型胶原α5抗体（Wieslab克隆号ALP 105）用间接免疫荧光法,单克隆鼠抗人Ⅳ型胶原α5抗体（Cosmo BioUSA克隆号CFT-45325）用直接免疫荧光法. 结果：两位病理医师随机盲看发现,两种抗体染色结果对肾脏冰冻组织诊断无差异,仅少量标本染色强度存在差别;对皮肤石蜡组织两种染色结果有较大差异. 结论：Cosmo BioUSA公司抗体利用一步法省时,费用相对较低,在肾脏冰冻组织染色可替代Wieslab公司通过认证的诊断试剂盒;而皮肤石蜡组织应选择Wieslab公司试剂盒.

探讨Ⅳ型遗传性血色病肝脏hepcidin mRNA表达及意义

目的探讨Ⅳ型遗传性血色病肝脏hepcidin mRNA表达及临床意义。方法对一例遗传性血色病先证者的家系进行遗传学问询,病史采集,体格检查,实验室检查,MRI检查及肝脏组织病理学检查,运用实时荧光定量PCR法检测肝脏hepcidin mRNA表达,并进行遗传性血色病发病相关基因的基因筛查。结果该家系15人有7例经MRI证实存在不同程度实质脏器铁沉积,3例接受肝活检者中的2例肝脏组织普鲁士蓝染色证实铁沉积,实时荧光定量PCR法检测显示肝脏hepcidin mRNA表达上调,外周静脉血基因筛查发现2q32的SLC40A1六号外显子有一处碱基发生点突变,即T173C。结论1.本家系罹患Ⅳ型遗传性血色病,遗传学特征为常染色体显性遗传,SLC40A1六号外显子有一处点突变,但该突变与国际上先前报道的突变位点并不相符,说明该基因突变可能是新的突变类型;2.本家系肝脏hepcidin mRNA表达上调,提示血清hepcidin水平升高,说明可能存在hepcidin抵抗现象,使机体对hepcidin负性调节低反应,从而导致铁代谢紊乱出现铁沉积并出现脏器功能损害。

伴食管平滑肌瘤的Alport综合征基因突变特征

目的 :认识我国伴食管平滑肌瘤的Alport综合征患者的基因型特点。 方法 :对 1例中国汉族伴食管平滑肌瘤的Alport综合征男性患者应用PCR方法扩增COL4A5基因的外显子 1、2和COL4A6基因的外显子 1 (部分序列 )、2及 3 ,同时应用Southern杂交的方法进行DNA重组分析。 结果 :经PCR扩增和Southern杂交的方法揭示患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因 5’端的大片段缺失 ,缺失范围可能至少包括COL4A5基因的外显子 1、COL4A6基因的外显子 1～ 2以及两基因间的启动子 ,估计此大片段缺失的断点在COL4A5基因的内含子 1至COL4A6基因的内含子 2中。 结论 :首次发现中国汉族中伴食管平滑肌瘤的Alport综合征患者具有COL4A5和COL4A6两个基因的缺失突变 ,该突变有可能累及COL4A6基因的内含子 2。

Alport综合征4家系16例分析

目的 探索Alport综合征的发病规律 ,以争取早诊断 ,指导生育 ,阻止患儿出生。方法 采用统计典型家系的方法逐一分析其发病率、肾脏症状及肾外症状发生率 ,疾病严重程序及与性别的关系。结果 部分病例有较明显的遗传规律 ,如显示X 联锁显性遗传 ,病情严重程序男大于女 ,女性最小发病年龄 8个月。其余家系未能明确其遗传规律。结论 对不典型家族史者 ,凡出现肾功能损害及耳聋者 ,应及时筛查 ,可行皮肤组织免疫荧光检查 。

基底膜α(Ⅳ)链染色正常的Alport综合征基因突变特点

目的 检测、分析编码基底膜Ⅳ型胶原α5链基因COL4A5突变及其特点 ,正确理解α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果及意义。方法 报告 1例 7岁男性患儿 ,血尿半年 ,肾功能、听力及眼部检查均正常 ;肾脏病理电镜示基底膜大部分均匀变薄 ;有血尿、肾功能不全家族史。应用间接免疫荧光学方法检测该患儿肾脏基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链。应用逆转录 聚合酶链反应和直接测序的方法分析α5 (Ⅳ )链mR NA ,应用PCR和直接测序方法分析COL4A5基因。结果 患儿肾小球基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链染色均正常。mRNA和基因组DNA分析均证实碱基替代突变 (917G >A) ,导致α5链第 2 39位甘氨酸被精氨酸取代 ,为新发现的突变。结论 首次报道了皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色正常 (阳性 )的我国X连锁型Alport综合征男性患者COL4A5基因突变及特点。提示应正确应用和理解基底膜α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果 ,X连锁型Alport综合征男性患者皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色即便正常 (阳性 ) ,当家族史及其它临床资料仍怀疑Alport综合征时 ,应进行COL4A5基因的检测和分析。

47例Alport综合征临床与病理分析

目的分析不同年龄组Alport综合征患儿的临床与病理特点。方法回顾性分析我院1990年1月-2007年1月47例住院并且明确诊断为Alport综合征患儿的临床及病理资料。结果男32例，女15例，男女比例2．1：1，年龄15个月～13岁，平均9．0岁。47例患儿中39例有明确家族史，其中X连锁显性遗传37例；常染色体隐性遗传2例。28例（59．3％）患儿首发症状为肉眼血尿或镜下血尿，14例（29．8％）患儿为蛋白尿、水肿。Alport综合征临床表现为孤立性血尿11例（23．4％）、血尿合并蛋白尿17例（36．2％）、肾病综合征14例（29．8％）、肾功能不全5例（10．6％）；孤立性血尿型、血尿合并蛋白尿型见于研究病例中的所有年龄组儿童，而肾病综合征型、肾功能不全型仅见于7～13岁年龄组儿童。肾组织病理显示，33例（70．2％）光镜改变为系膜增生性病变（MsPGN），13例（27．6％）表现为局灶节段性肾小球硬化（FSGS），1例（2．1％）表现为膜增生性。肾小球肾炎（MPGN）。免疫荧光多以IgM沉积为主19例（40．4％），以IgA沉积为主9例（19．1％），以IgG沉积为主9例（19．1％），免疫荧光阴性10例（21．4％）。电镜下39例出现典型的肾小球基底膜病变，8例显示基底膜变薄。47例患儿中46例肾脏和（或）皮肤Ⅳ胶原仪链分布异常。结论Alport综合征男性患儿发病率高于女性。不同年龄组Alport综合征肾脏表现有明显差异，血尿伴随疾病始终，但随着病程延长，尿蛋白量逐渐增加。Alport综合征肾脏病理光镜下无特征表现，主要以系膜增生为主，小年龄组患儿电镜下GBM病变不典型，需结合Ⅳ胶原α链免疫荧光检测明确诊断。

Alport综合征22个家系临床病理分析

目的 提高对Alport综合征 (AS)的认识 ,评价IV型胶原检测的临床意义。方法 分析2 2个AS家系 2 6例患者的临床病理资料 ,皮肤和肾组织Ⅳ型胶原α链检测采用间接免疫荧光法。结果 2 2个家系以多种遗传方式遗传 ,以X伴性显性 (XD)遗传最多 ,占 5 4 5 %。 2 6例患者平均发病年龄 2 4 9岁 ,92 3%有血尿 ,88 5 %有蛋白尿 ,3例肾病综合征 (NS)均为男性 ,16例患者有肾功能受累 ,发生肾功能衰竭 (肾衰 )平均年龄 2 9 2岁 ,男性明显早于女性。 3/ 19例眼呈前锥形晶体 ,1例有黄斑周围黄白色颗粒沉积。 6 3 6 %有感音性耳聋。肾脏病理检查光镜、免疫荧光 (IF)均无特异性发现 ,电镜示肾小球基底膜 (GBM)呈弥漫厚薄不均、分层改变。 6例肾移植 ,5例存活。 6例男性XD AS患者α5 (IV)链在皮肤和 (或 )肾组织基底膜上IF呈阴性 ,肾组织α3(IV)链IF亦呈阴性 ;3例女性XD AS患者表皮基底膜上α5 (IV)链IF呈不连续沉积。结论 AS是一种比较常见、遗传呈异质性的疾病 ,GBM超微结构改变具特征性 ,而IV型胶原不同α链检测与电镜同样具有重要诊断价值。

常染色体隐性遗传Alport综合征一家系COL4A3及COL4A4基因突变分析

目的通过对有近亲婚配史的Alport综合征一家系Ⅳ型胶原α3和α4链的COL4A3/COL4A4基因分析,明确常染色体隐性遗传Alport综合征的基因突变,为该病的基因诊断和家系遗传咨询提供更为全面的理论基础。方法PCR扩增先证者DNA COL4A3/COL4A4基因的共98个外显子,经直接测序,寻找突变位点,对有意义的突变经限制性内切酶AvaⅡ酶切在家系中分析验证。结果在该患者中共发现1个错义突变和10个序列变异。其中在COL4A3基因上发现一个位于42号外显子上的错义突变G3725A,导致蛋白质Gly1242Asp的突变。错义突变在患者中是纯合子,携带者中是杂合子,其他正常家系成员及筛查100条正常人染色体。未发现该突变。10个序列变异为单核苷酸多态性改变。结论报道了一个国内较少见的常染色体隐性遗传Alport综合征家系,同时经基因突变筛查发现Ⅳ型胶原α3链的一个新的致病性的基因突变。