cPKCγ膜转位在Herkinorin减轻MCAO小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨非阿片类阿片受体激动剂Herkinorin后处理的脑保护作用以及典型蛋白激酶Cγ(conventional protein kinase Cγ,c PKCγ)的作用。方法成年雄性C57BL/6小鼠按数字表法随机分为对照组(Naive),假手术组(Sham),模型组(ischemia/reperfusion,I/R),溶剂组(I/R+D,再灌注前腹腔注射同等剂量的DMSO),Herkinorin组(I/R+H,再灌注前腹腔注射10 mg/kg Herkinorin)。应用小鼠脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导缺血性脑卒中模型,通过神经行为和运动功能检测评估脑损伤程度,借助2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triph-enyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死体积,蛋白印迹检测c PKCγ膜转位(激活)水平。结果与I/R组比较,I/R+H组缺血再灌注后24 h和7 d的神经行为评分明显降低,爬杆实验、圆柱体实验和步错实验测评明显改善(P<0.05,n=6)。TTC染色显示I/R组梗死体积24 h为31.44%±5.44%,7 d为23.44%±7.95%,I/R+H组(24 h:17.19%±3.23%,7 d:13.26%±2.71%)脑梗死体积明显减少(P<0.05,n=6)。Western blotting结果显示,I/R组缺血核心区(Ic)和半影区(P)中c PKCγ膜转位水平都明显下降,而Herkinorin可明显减轻MCAO小鼠半影区内c PKCγ膜转位水平的降低(P<0.05,n=6)。结论 10 mg/kg Herkinorin腹腔注射能减轻MCAO小鼠皮质的缺血再灌注损伤,c PKCγ膜转位水平的变化可能参与Herkinorin后处理脑保护的分子机制。

Herkinorin预处理减轻缺血性卒中模型大鼠脑损伤

目的探讨Herkinorin预处理对短暂性大脑中动脉阻塞(tMCAO)大鼠脑组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)的调节及作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(tMCAO)、Herkinorin组(Herkinorin),Herkinorin组大鼠造模前腹腔给予Herkinorin(10 mg/kg)1周,每天1次。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能评分、TTC染色、TUNEL染色;Western blot检测IκBα、p65、p-p65、pro-IL-1β、IL-1β、pro-caspase1、caspase1 p20、NLRP3表达;免疫共沉淀(Co-IP)检测IκBα与β-抑制蛋白2(β-arrestin2)结合。结果与sham组相比,tMCAO组大鼠神经功能评分增加(P<0.01),脑梗死百分比与脑水肿率增加(P<0.01),脑组织缺血半影区中细胞凋亡水平增加(P<0.01),IκBα、p65表达水平下降(P<0.01),p-p65、IL-1β、caspase1 p20、NLRP3表达水平增加(P<0.01),IκBα与β-arrestin2结合水平下降(P<0.01);与tMCAO组相比,Herkinorin组大鼠神经功能评分下降(P<0.01),脑梗死百分比与脑水肿率降低(P<0.01),脑组织缺血半影区中细胞凋亡水平降低(P<0.01),IκBα、p65表达水平增加(P<0.01),p-p65、IL-1β、caspase1 p20、NLRP3表达水平降低(P<0.01),IκBα与β-arrestin2结合水平增加(P<0.01)。结论Herkinorin可能通过抑制NF-κB/NLRP3通路减轻tMCAO大鼠脑缺血/再灌注损伤。

突触蛋白-I磷酸化在herkinorin减轻新生小鼠皮层神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用及其与cPKCγ的关系

目的评价突触蛋白-Ⅰ(synapsin-Ⅰ)磷酸化在herkinorin减轻新生小鼠神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用及其与经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)的关系。方法原代培养新生cPKCγ^+/+和cPKCγ^-/-C57BL/6J小鼠皮层神经元,培养7 d,采用随机数字表法,将2种神经元各分为3组(n=5):对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)和herkinorin组(H组)。采用氧糖剥夺1 h、复氧复糖24 h的方法制备氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型。H组于氧糖剥夺即刻加入herkinorin 10μmol/L,孵育1 h,氧糖剥夺结束时洗脱。复氧复糖24 h时收集神经元,采用MTT法检测神经元存活率,采用免疫荧光染色法测定神经突起数量及树突长度。采用Western blot法检测神经元synapsin-Ⅰ和磷酸化synapsin-Ⅰ(p-synapsin-Ⅰ)的表达水平。结果与C组比较,OGD/R组和H组cPKCγ^+/+小鼠和cPKCγ^-/-小鼠神经元存活率降低,神经突起数量减少,树突长度缩短,神经元p-synapsin-Ⅰ表达下调(P<0.05);与OGD/R组比较,H组cPKCγ^+/+小鼠神经元存活率增加,神经突起数量增多,树突长度增长,神经元p-synapsin-Ⅰ表达上调(P<0.05),H组cPKCγ^-/-小鼠上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。cPKCγ^+/+小鼠和cPKCγ^-/-小鼠3组间神经元synapsin-Ⅰ表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论herkinorin可通过降低cPKCγ膜转位水平,抑制synapsin-Ⅰ磷酸化,减轻新生小鼠皮层神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤。