血卟啉单甲醚对卵巢癌细胞系SKOV3的光动力学杀伤效应

背景与目的:光动力学治疗(photodynamictherapy,PDT)近年来逐渐成为一种新的可供选择的卵巢癌治疗手段。血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)是我国自主开发研制的一种新型光敏剂,本实验目的在于体外实验研究HMME在卵巢癌细胞系SKOV3细胞中的荧光显微成像,并验证其对SKOV3的光动力杀伤作用。方法:30μg/mlHMME与细胞孵育不同时间后,置于高灵敏度荧光显微镜与激光共聚焦显微镜下检测HMME荧光及其细胞内的定位,形态学软件分析其荧光强度;不同浓度(5～50μg/ml)HMME与细胞孵育3h后,以不同能量激光(1.5、3、6、12J/cm2)照射,MTT比色法检测细胞的存活率;以5μg/ml、3J/cm2,20μg/ml、6J/cm2剂量处理细胞,4h及24h后分别收集细胞行AnnexinV/PI双染色,流式细胞仪分析细胞死亡方式。结果:HMME呈红色荧光弥漫性分布于细胞浆内,细胞内荧光强度于用药3h后达到高峰。高浓度HMME单独使用可能对细胞具有暗毒性,而单独激光照射对细胞存活无影响。随着HMME浓度与激光剂量的增加,细胞存活率逐渐下降。当HMME浓度增高到≥40μg/ml时,加大药物浓度与激光剂量细胞存活率并不随之降低。流式细胞仪分析结果显示HMME光动力学处理后死亡细胞主要为坏死细胞。结论:HMME对SKOV3细胞具有光动力学杀伤效应。