HVT免疫鸡羽毛根中病毒抗原的检测

１日龄非免疫鸡，ＨＶＴ常规剂量免疫后，于第３周起，每周采集一次羽毛根，分别作常规ＭＤＶ琼扩抗原的检测，结果显示：在免疫后第３～８周检测，均未观察到特异性ＡＧＰ沉淀线；若取较多数量的富含羽髓的羽毛根，经２ｍｌ磷酸缓冲液（ＰＢＳ）浸提、浓缩胶浓缩约４０倍后，再作上述检测，则分别于免疫接种后的第３～５周都有特异性的ＡＧＰ沉淀线出现，且与感染细胞上清中浓缩的ＨＶＴ及ＭＤＶ琼扩抗原所形成的沉淀线基本吻合，而第６周检测时，仅与ＨＶＴ阳性血清呈微弱阳性，用同样方法对免疫后第６周后的检测结果均表明为阴性。由此推断，免疫鸡羽毛根中含有较低水平的、并与致病性ＭＤＶ抗原具有交叉反应性的ＨＶＴ琼扩抗原，但采用常规ＡＧＰ法不能直接检测到。

鸡马立克火鸡疱疹病毒(Fc-126株)的标准化研究 VI.HVT克隆株的稳定性、保存期测定及田间试验效果

对ＨＶＴ克隆株进行了稳定性测定，结果表明克隆株稀释后室温存放１小时，病毒滴度损失不超过３０％，符合有关规定。在－７０℃和－２０℃下保存，克隆株保存期分别至少可达到３年和２．５年。用克隆株试制的３批产品在野外使用效果良好，无任何不良反应。

马立克氏病病毒和火鸡疱疹病毒在鸡胚细胞培养上生长特性的比较

比较了马立克氏病病毒(MDV)不同毒株(GA、Md5、Md11/75c、SB1)和火鸡疱疹病毒(HVT)Fc126株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的空斑形态,测定了MDV-GA和HVT-Fc126的生长速度,并观察了它们的超微结构。发现不同毒株的空斑形态不同,毒株的毒力越强,其空斑越小。生长速度测定表明,毒力越强的毒株,CPE出现越晚;接毒量愈多,CPE出现愈早。还发现HVT-Fc126可能存在病毒的第二次释放,而MDV-GA未见此种现象。超微结构动态观察表明,MDV-GA的感染形式可能主要是通过合胞体从一个细胞核进入另一个细胞核,而HVT-Fc126除了此种形式外,还可能通过细胞膜上的微绒毛释放到细胞外而形成第二次感染。超微结构观察还表明,MDV-GA和HVT-Fc126均在感染细胞内形成;MDV-GA主要存在于胞核内,胞质中很少见,而HVT-Fc126在胞核和胞质中均可看到。这两株病毒大小相似,核衣壳直径均为90～100nm。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的研究

通过对不同保护剂基质与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒（HVT）相溶性的研究及冻干曲线的优化，成功研制出一种适宜HVT的耐热冻干保护剂，用其与相匹配的48h自然回温冻干曲线冻干的HVT耐热活疫苗，其病毒冻干损失比SPGA常规疫苗减少约50%，在2-8℃条件下可保存24个月，37℃保存10d病毒存活率达50.5%，而SPGA规程苗仅为31.6%，经约50万羽份的田间试验，证明安全有效并显示出良好的耐热性能，达到国外同类产品水平。

火鸡疱疹病毒繁殖非必须基因重组病毒用转移载体的构建

目的 构建用于基因工程疫苗制作的火鸡疱疹病毒 (HVT)外源基因转移用载体。方法 利用PCR技术 ,从感染火鸡疱疹病毒的鸡胚成纤维细胞 (CEF)基因组中成功地扩增出火鸡疱疹病毒的繁殖非必须基因 US基因 ,将该PCR产物克隆进PGEM T载体中 ,利用末端平滑化技术和连接反应 ,把报告基因LacZ基因插入到US基因中。结果 构建出了用于制作重组HVT病毒的转移载体。结论 本研究以LacZ作为报告基因 ,成功的将其插入到US基因中 。

重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展

重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)、鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)等。对疱疹病毒基因组序列进行分析显示,其基因组大,复制非必需区域多,容纳外源基因的能力强。同时疱疹病毒具有宿主范围广泛、免疫持续期长、安全性较好及相关基因操作技术成熟等优点。笔者总结了当前构建重组动物疱疹病毒的主要方法,包括传统同源重组技术、细菌人工染色体(BAC)技术、Fosmid文库及CRISPR/Cas9基因编辑技术,简述了各个方法的基本原理及技术特点,比较了各个方法的优缺点,并分析了各个方法的最适运用条件,从而更准确地为研究工作提供理论及技术参考;对外源基因的表达方式进行分析,论证了不同启动子对外源基因表达的调控作用不同,同时对不同疱疹病毒的常用插入位点进行了研究成果的列举总结,并对当前重组病毒HVT、PRV、DEV及ILTV活载体疫苗的研究进展进行总结,对相关生物制品的注册应用信息进行了归纳,介绍了高选择率外源基因及高成功率插入位点,从而为相关生物制品的研制提供理论参考。