藏药波棱瓜子总木脂素对刀豆球蛋白(ConA)致免疫性肝损伤小鼠保护作用及其机制探讨

目的:波棱瓜子是常见的用于治疗肝病的藏药,疗效确切.前期研究表明,总木脂素是波棱瓜子抗肝损伤的有效部位,但疗效尚不明确.本研究拟考察藏药波棱瓜子总木脂素对ConA致小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并进一步探讨其对抗肝损伤的作用机制.方法:采用尾静脉注射一次性ConA(20mg/kg)诱发小鼠免疫性肝损伤,造模8h后取血样和肝脏,考察不同剂量的波棱瓜子总木脂素对各组小鼠脏器系数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、骨过氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等生化指标活力或水平的影响;以HE染色对肝组织进行组织病理学检查;免疫组织化学法检测波棱瓜子总木脂素对各组小鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响.结果:波棱瓜子总木脂素可以降低ConA所致免疫性肝损伤小鼠肝脏系数及血清ALT、AST、ALP活力,显示出较好的保肝作用.同时波棱瓜子总木脂素也可降低肝损伤小鼠血清NO水平和MPO、NOS活力,并减少肝组织匀浆中MDA的含量,增强SOD和GSH-Px活性,表现出良好的抗氧化作用;免疫组化结果显示,波棱瓜子总木脂素还能抑制诸如TNF-α、IFN-γ、IL-4、NF-κB等促炎症因子的表达,促进抗炎症因子IL-10的表达,从而抑制肝脏炎症反应而发挥其保肝作用.病理观察结果也表明,波棱瓜子总木脂素能减轻ConA对肝组织的损伤.结论:波棱瓜子总木脂素对ConA致小鼠免疫性肝损伤都具有一定的保护作用,其保肝作用可能与其抗炎、抗氧化能力有关.

藏药波棱瓜子总木脂素对四氯化碳(CCl_4)致化学性肝损伤小鼠保护作用

研究了藏药波棱瓜子总木脂素对CCl4致小鼠化学性肝损伤的保护作用.通过建立四氯化碳诱导小鼠肝损伤模型,以测定不同剂量的波棱瓜子总木脂素对各组小鼠碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、脏器系数、肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等生化指标活力或水平的影响;以HE染色对肝组织进行组织病理学检查.实验结果表明波棱瓜子总木脂素可以降低CCl4所致化学性肝损伤小鼠肝脏系数及血清ALT、AST、ALP活力,增强SOD和GSH-Px活性,减少肝组织匀浆中MDA的含量,表现出对肝脏的保护和良好的抗氧化作用.故波棱瓜子总木脂素对CCl4致小鼠化学性肝损伤具有一定的保护作用.

波棱瓜子对免疫性肝损伤的免疫炎症调节作用

研究建立Con A致小鼠免疫性肝损伤动物模型,采用免疫组化染色SP法考察不同剂量波棱瓜子总木脂素对小鼠肝脏组织CD4、CD8、CXCL10、ICAM-1、IRF-1、SOCS1、STAT1蛋白的表达,分析波棱瓜子总木脂素对抑制粘附分子和趋化因子肝内蛋白的表达影响,以期研究讨论藏药波棱瓜子总木脂素对免疫性肝损伤的免疫炎症调节作用.实验结果表明,波棱瓜子总木脂素对Con A致免疫性肝损伤小鼠的CD4、ICAM-1、IRF-1蛋白含量无明显差异;而对CD8、CXCL10、SOCS1和STAT1蛋白的含量有不同程度的降低,显示出通过调节T细胞的免疫功能来保护肝脏.由上述结果可知,波棱瓜子总木脂素具有一定的免疫性炎症调节作用,该作用可能是波棱瓜子总木脂素对肝脏免疫性疾病的部分保护机制.

藏药波棱瓜子有效成分波棱素对ConA诱导的免疫性肝损伤的保护作用

目的通过建立ConA诱导的免疫性肝损伤动物模型,研究波棱瓜子有效成分波棱素对免疫性肝损伤的保护作用.方法一次性动物尾静脉注射刀豆球蛋白(20mg/kg)建立小鼠免疫性肝损伤模型,考察不同剂量的波棱素对小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH),以及肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量(或活性)的影响.结果小鼠尾静脉注射ConA后,模型组小鼠血清AST、ALT等活性明显升高,说明ConA诱导的损伤模型造模成功.给予波棱素药物后,与模型组相比较,波棱素能明显降低小鼠ALT、AST和LDH活性,降低小鼠肝组织MDA的含量;升高肝组织SOD和GSH-Px的活性.结论波棱素能明显减轻ConA诱导的小鼠肝组织损伤,改善其炎症反应,保护肝脏组织.

高速逆流色谱分离纯化波棱瓜子中化学成分

采用高速逆流色谱对波棱瓜子乙酸乙酯提取物进行分离纯化,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比2:6:3:5)为溶剂,上相为固定相,下相为流动相,流速2 mL/min,转速850 r/min,共分离得到2个高纯度化合物,经过高效液相色谱检测,纯度均高于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对波棱瓜子中的化学成分进行快速有效的分离纯化。

藏药波棱瓜种子萌发特性研究

通过种子活力的测定、发芽床及发芽温度的筛选和不同药剂浸种处理,研究了波棱瓜种子的萌发特性。结果表明:波棱瓜种子萌发具有一定程度的休眠特性,其最佳发芽基质为砂质发芽床;发芽最适温度为20℃;青霉素和聚乙二醇对波棱瓜种子发芽具有促进作用。用50℃的温水浸种后,采用300 mg/L的青霉素溶液处理,发芽势和发芽率分别比对照提高12%和20%,达到53.33%,极显著高于对照33.33%;用100 g/L的聚乙二醇溶液处理,波棱瓜种子的发芽势和发芽力分别比对照提高10%和14%。

藏药波棱瓜子提取液对四氯化碳致小鼠急性肝损伤保护机理的研究

肝损伤是一种常见危害人类和动物健康的疾病。通过研究波棱瓜子(Herpetospermum caudigerum Wall)提取液对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用,并对其作用机理进行初步分析。试验结果表明,其作用机理与抑制炎性细胞因子的表达等有关,可减轻肝损伤的程度。

藏药波棱瓜籽油脂中脂肪酸的HPLC与GC-MS分析

分别采用柱前衍生-高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)和气相色谱质谱法(GC-MS),分析了超临界CO2萃取得到的藏药波棱瓜籽油脂中脂肪酸的成分。用荧光衍生试剂1-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]-2-苯基咪唑[4,5-f]9,10-菲(TSPP)作为柱前衍生化试剂对39种饱和与不饱和脂肪酸标品进行衍生,经梯度洗脱实现了39种游离脂肪酸(FFA)衍生物完全分离,使用外标法定量,建立了同时测定39种脂肪酸绝对含量的方法,对超临界CO2萃取结合正交实验得到的波棱瓜籽油样品及超声波萃取与微波回流萃取油脂中的脂肪酸进行了定量分析,对比了这些样品中油酸、亚油酸、亚麻酸的质量百分含量及不饱和脂肪酸占总脂肪酸的含量。结果表明:波棱瓜籽油中油酸、亚油酸、亚麻酸质量百分含量分别高达34.65%(147.14mg/g,下同)、22.85%(97.03mg/g)、20.86%(88.56mg/g),不饱和脂肪酸占总脂肪酸的79%。同时,采用GC-MS分析,对比了酸催化与碱催化的甲酯化法分析波棱瓜籽油中脂肪酸的优劣,得出了GC-MS分析波棱瓜籽油脂肪酸的条件,并讨论了液相色谱与气质联用分析脂肪酸的特点。

正交实验研究波棱瓜籽黄酮化合物提取工艺

本文采用正交实验，对波棱瓜籽黄酮化合物的提取工艺进行了优化。结果表明各因素对波棱瓜籽黄酮化合物提取效果的影响程度为乙醇浓度〉提取次数〉温度〉料液比〉提取时间。从而确定的波棱瓜籽黄酮化合物的最佳提取工艺为乙醇浓度为90％，料液比为1：16（w／V），提取温度为80℃，提取时间为1h，重复提取4次。

栽培措施对藏药波棱瓜种子产量品质形成的影响

为研究不同栽培措施对藏药波棱瓜种子品质和产量的影响。设置不同催芽方法、不同播期、不同密度、不同施肥方案进行小区对比试验,分别以种子千粒重、单株产量、单位面积产量为指标对比分析。结果表明,ABT6号生根粉(GGR6)200mg·L^-1溶液和青霉素200mg·L^-1溶液浸种催芽可显著提高种子出苗率、种子千粒重及产量;5月播期的种子千粒重最高,6月播期的单位面积产量最高;EM益生菌肥和追施磷肥可显著提高种子千粒重和单位面积产量;不同措施所产波棱瓜子的检验均符合部颁藏药材标准。筛选出的催芽方法、播期、施肥方案对波棱瓜的人工栽培和种子生产有重要指导意义。

基于线性回归分析模型的藏药波棱瓜子产量预测及其影响因子解析

目的:研究多因子对藏药波棱瓜子产量的影响,为制定波棱瓜生产规程提供依据。方法:在对波棱瓜采取不同催芽方法、播期、雌雄比、密度、施肥、农艺措施等多因子小区试验的基础上,通过数量化方法Ⅰ拟合曲线分析,筛选影响人工栽培波棱瓜产量的关键措施。结果:经多因子筛选,确定影响波棱瓜子产量(Y)的贡献值最大的关键因子分别为播期(X1)、施肥(X4)、雌雄比(X6)。结论:建立的波棱瓜产量预测模型,可为波棱瓜子生产技术优化和产量预测提供依据。

波棱瓜子木脂素纳米混悬剂的制备

目的制备波棱瓜子木脂素(波棱甲素、波棱素、波棱酮、波棱内酯A)纳米混悬剂。方法微量介质研磨法制备纳米混悬剂,考察研磨速度、研磨介质用量、研磨时间对平均粒径、多分散指数、稳定系数的影响,扫描电镜下观察形态,测定体外溶出度。结果波棱甲素、波棱素、波棱酮、波棱内酯A最佳研磨速度分别为1 000、800、1 000、1 000r/min,研磨介质用量分别为4.0、4.0、5.0、5.0mL,研磨时间分别为2.0、1.0、6.0、6.0h,平均粒径小于300nm,多分散指数小于0.30(波棱甲素除外),稳定系数大于0.80。纳米混悬剂明显提高了波棱甲素、波棱酮体外溶出度。结论该方法简单、稳定、可行,可用于制备波棱瓜子木脂素纳米混悬剂。

波棱瓜子脂肪油对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的观察波棱瓜子脂肪油(HSO)对卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)联合诱导免疫性肝损伤小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用BCG+LPS诱导造成免疫性肝损伤小鼠模型,ig给予HSO(7、10、14.5 mL·kg-1)连续12 d,比较各组脏器指数,测定小鼠血清中ALT、AST、NO的含量及肝脏组织匀浆中SOD、MDA的含量,用HE染色切片观察肝组织的病理学变化。结果 HSO可显著降低免疫性肝损伤小鼠的肝脏指数及脾脏指数;改善肝脏组织的病理学变化;降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST的水平和NO的含量;升高肝匀浆中SOD的活性,降低MDA的含量。结论 HSO对BCG+LPS诱导小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用,其保肝的机制可能与增强抗氧化活性有关。

藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的通过研究藏药波棱瓜子总木脂素(TLHPS)对大鼠肝星状HSC-T6细胞的增殖抑制作用及诱导其凋亡的作用,进一步探讨TLHPS抗肝纤维化的作用机制。方法实验分为对照组,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组,阳性药秋水仙碱0.1μg/mL组。用加入各组药物的培养基分别培养HSC-T6细胞24、48、72 h,采用CCK8法检测各组细胞24、48、72 h的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组对HSC-T6细胞24、48、72 h时的增殖抑制率明显增高(P<0.01),且各组HSC-T6细胞早期凋亡率与晚期凋亡率明显升高(P<0.05,0.01),G0/G1期细胞数明显增多(P<0.01),G2/M期细胞数无明显差异(P>0.05),S期细胞数明显减少(P<0.01)。Western blotting结果显示,与对照组相比,TLHPS10、20、30、40μg/mL组Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,0.01),TLHPS 40μg/mL组Bax蛋白表达明显升高(P<0.01),TLHPS 20、30、40μg/mL组NF-κB表达明显降低(P<0.01)。结论 TLHPS抗肝纤维化的作用机制可能是通过降低Bcl-2、NF-κB的表达抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡。