人Hes1-shRNA，Hes5-shRNA慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定

目的构建人Hesl-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体，为Notch—Hes信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人Hes1，Hes5基因mRNA序列分别设计、合成多对互补的DNA单链寡核苷酸，退火后克隆至pENTR／U6入门载体。通过入门载体瞬时转染神经胶质瘤U251细胞筛选有效干扰序列。将含有效干扰序列的入门载体与pLenti6／BLOCK—iT—DEST载体进行LR重组构建Hesl—shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体，经脂质体介导入293FT细胞，包装成慢病毒。用该慢病毒感染U251细胞，Western印迹法分别检测Hes1，Hes5蛋白的表达。结果分别构建了针对Hes1和Hes5基因的特异性shRNA慢病毒表达载体，其包装获得慢病毒可有效感染U251细胞并分别对HeM，Hes5蛋白的表达有显著抑制作用。结论成功构建了Hesl—shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体。