Hnrnpu＋/-小鼠表现出发育迟缓、活动水平下降和糖代谢异常

目的 建立核异质核糖核蛋白U（hnRNP U）基因全身性敲除小鼠模型,研究该基因在小鼠体内的功能.方法 通过同源重组的方法建立hnRNP U全身性敲除的小鼠模型.观察统计小鼠的出生以及生长情况,检查其组织器官发育,通过代谢笼检测其代谢水平,并用糖耐量试验检测其糖代谢变化.结果 hnRNP U全身性敲除纯合子小鼠（Hnrnpu-/-）死于胚胎期7.5 d前,而其杂合子小鼠也有部分在胚胎期死亡,出生的杂合子小鼠表现为生长发育迟缓、部分组织的重量减轻、骨密度降低以及肌肉含量减少.进一步实验表明,Hnrnpu＋/-小鼠夜间进食量、活动水平和产热量等降低,糖代谢能力下降.结论 通过同源重组方法成功建立hnRNP U全身性敲除小鼠模型,并在整体水平证实了该基因在小鼠发育和代谢稳态调节中起重要作用.

HNRNPU通过调控衰老相关基因CDK2表达促进胃癌的进展

目的:探讨RNA结合蛋白核不均一核糖核蛋白U(HNRNPU)在胃癌发生发展中的作用及机制。方法:在胃癌细胞MGC-803中过表达或者敲低HNRNPU,并获得稳定表达的细胞株。通过MTT、软琼脂克隆形成、基质胶侵袭等体外细胞功能实验,研究HNRNPU对胃癌增殖和侵袭的影响。综合分析GEO、ENCORI、KOBAS、CSGene等公用数据库,寻找胃癌中HNRNPU可能调控的靶基因,并在胃癌细胞系中,利用实时定量PCR、Western Blot进行验证。结果:过表达HNRNPU可以促进MGC-803的增殖和侵袭。通过对公用数据库的深入挖掘以及实验验证发现,在胃癌中HNRNPU可上调衰老相关基因细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达。结论:HNRNPU通过正向调控衰老相关基因CDK2表达,促进胃癌细胞的增殖和侵袭。

hnRNPU过表达抑制PIM1诱导的细胞衰老的机制研究

目的:探讨人前病毒整合位点1(PIM1)诱导细胞衰老的分子机制。方法:构建过表达PIM1的2BS细胞系,通过Western印迹法和衰老相关β-半乳糖苷酶染色实验测定过表达PIM1是否诱导细胞衰老。免疫沉淀联合质谱分析测定PIM1是否能有效免疫沉淀核异质核糖核蛋白U(hnRNPU)蛋白。运用Real-time PCR和Western印迹法测定PIM1是否影响hnRNPU mRNA和蛋白表达水平。构建同时过表达PIM1和hnRNPU的2BS细胞系,运用Western印迹法和衰老相关β-半乳糖苷酶染色实验检测hnNRPU过表达对PIM1诱导的细胞衰老的影响。结果:与空载对照组相比,过表达PIM1组中衰老信号通路关键基因p53、p21和p16的表达显著增加(p53,t=4.36,P<0.05;p21,t=3.814,P<0.05;p16,t=4.72,P<0.01),衰老细胞的比例增加(t=6.831,P<0.01)。免疫沉淀联合质谱分析结果显示PIM1能有效免疫沉淀hnRNPU蛋白。PIM1过表达对hnRNPU的mRNA表达水平没有影响(t=0.295,P=0.783),但是能抑制hnRNPU蛋白的表达(t=33.85,P<0.001)。与只过表达PIM1细胞相比,同时过表达PIM1和hnRNPU细胞,衰老信号通路关键基因p53、p21和p16的表达下降(p53,t=15.317,P<0.001;p21,t=8.012,P<0.01;p16,t=14.08,P<0.001),衰老细胞的比例降低(t=10.38,P<0.01)。结论:hnRNPU过表达抑制PIM1诱导的细胞衰老。

hnRNP U在恶性肿瘤中的研究进展

核不均一性核糖核蛋白(hnRNP)是真核细胞mRNA调控过程中的关键因子,通过干预mRNA的功能从而调控细胞的多种生物过程。其中,hnRNP U为hnRNP家族的重要成员,在多种恶性肿瘤的发生发展过程中发挥了重要作用。本文通过总结近年来hnRNP U的相关研究,对hnRNP U的功能及其在几种恶性肿瘤中的作用进行综述,并对hnRNP U在恶性肿瘤中潜在的诊断及治疗价值进行讨论。

人肺癌细胞株中hnRNP A_2/B_1表达的研究

目的 研究人肺癌细胞株中核内不均一核糖核蛋白 (hnRNP)A2 /B1及hnRNPB1的表达。方法 采用特异性hnRNPA2 /B1及hnRNPB1引物 ,应用RT PCR方法研究肺癌细胞株hnRNPA2 /B1mRNA的表达 ,以抗hnRNPB1单克隆抗体免疫细胞化学染色方法研究肺癌细胞hnRNPA2 /B1蛋白的亚细胞定位。结果 RT PCR显示人肺腺癌细胞株SPC A1及Y 90 ,小细胞肺癌细胞株NCI H44 6及鳞癌细胞株A43 1均表达hnRNPA2 /B2 及hnRNPB1,其PCR产物分子量分别在 661及 10 3 9bp左右 ,与预期大小的hnRNPA2 /B1cD NA片断相符。免疫细胞化学研究发现 ,肺腺癌细胞株SPC A1及Y 90 ,小细胞肺癌细胞株NCI H44 6及鳞癌A43 1的细胞浆及细胞核内均可见特异的hnRNPB1染色 ,鳞癌A43 1及小细胞肺癌NCI H44 6hnRNPB1染色较肺腺癌细胞株SPC A1及Y 90明显。结论 肺癌细胞株hnRNPA2 /B1及hnRNPB1表达明显增高。

HSVⅠ感染L-02细胞对核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)表达影响

单纯疱疹病毒(HSVⅠ)对宿主细胞转录及mRNA修饰翻译通路的调控是一个系统的、复杂的体系,探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及与宿主细胞之间的相互作用。基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,通过Western blot,Northern blot等技术方法验证其在病毒复制过程中不同时段对其表达影响。

hnRNPs参与肿瘤发生机制的研究进展

核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPs)是一大类RNA结合蛋白,在结构上具有类似性,其大多包含2个RNA结合区域和一个核定位区域,它们参与核酸代谢的多个方面,包括选择性剪接、mRNA稳定、转录和翻译调控等生理过程。近年来对hnRNPs的深入研究表明,其与癌症的发生发展密切相关,可通过选择性剪接来调节细胞癌基因和抑癌基因或凋亡基因的表达,影响肿瘤能量代谢,维持端粒酶高活性,促进上皮间质转化以及促进血管形成等多种机制参与癌症的发生发展。本文对hnRNPs家族及其生理功能,其与肺癌、宫颈癌、乳腺癌、各消化道肿瘤的关系,以及其参与肿瘤形成的相关途径做一综述,旨在探讨肿瘤治疗新靶点。

hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析

目的构建包含有核不均一核糖核蛋白(hnRNP)A1蛋白编码区序列的真核表达质粒pEGFP-C1-hnRNP A1,并对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的hnRNP A1蛋白进行细胞应激共定位分析。方法提取HeLa细胞总RNA,以针对hnRNPA1-3′非翻译区的特异性片段为反转录引物,反转录出包含hnRNP A1编码区序列的cDNA,并以其为模板,降落PCR法扩增出带EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点的目的基因,利用双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pEGFP-C1,在T4-DNA连接酶的催化下将两者连接构建成pEGFP-C1-hnRNP A1重组质粒,然后将重组质粒转染入HeLa细胞内,以激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP-hnRNP A1的荧光表达情况,Western印迹法检测EGFP与hnRNP A1的融合表达情况,最后进行细胞原位杂交及细胞免疫荧光检测在氧化应激状态下EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA(应激颗粒的标记成分)及DPC1a(加工体的标记蛋白)的应激共定位。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误,激光共聚焦荧光显微镜观察和Western印迹结果检测到绿色荧光融合蛋白的表达;EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA呈现共定位,但与DPC1a无共定位关系。结论重组pEGFP-C1-hnRNPA1质粒成功构建并表达,应激状态下EGFP标记的hnRNPA1参与应激颗粒的构成。

肺癌患者外周血中HnRNP B_1的临床研究

目的探讨外周血中HnRNP A2/B1表达及其在肺癌诊断中的价值。方法采用特异性HnRNP A2/B1检测60例肺癌患者外周血中HnRNP A2/B1的表达。结果RT-PCR结果显示,60例肺癌患者外周血中49例HnRNP A2/B1mRNA表达阳性,HnRNP A2/B1mRNA半定量值0.657±0.326;对照组30例中3例阳性,半定量值0.159±0.286,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。检测外周血HnRNP A2/B1mRNA诊断肺癌的敏感性81%,特异性90%。结论肺癌患者外周血中HnRNP A2/B1表达增高,外周血检测HnRNP A2/B1在诊断肺癌中具有较高的敏感性和特异性。

核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)对单纯疱疹病毒(HSVⅠ)复制影响

本文研究了单纯疱疹病毒(HSVⅠ)在感染与复制过程中影响宿主细胞RNA转录,蛋白表达,进而为病毒的潜伏和持续感染创造必要条件.采用基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,构建pcDNA-hnRNP H2真核表达载体及hnRNP H2稳定转染的293T细胞系的方法,研究在核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)稳定过表达后对HSVⅠ病毒复制周期的影响.结果表明,病毒滴度和生长曲线显示,hnRNP H2可以显著影响病毒复制周期.过表达hnRNP h2的细胞系与对照相比,其病毒滴度明显下降,hnRNP H2在HSVⅠ病毒复制中起到比较明显的抑制作用,其作用机理还有待进一步研究.

WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.

禾谷镰刀菌异质核糖核蛋白FGSG_07478功能研究

[目的]异质核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoproteins,hnRNP)是一类RNA结合蛋白,在RNA代谢的各个方面发挥着重要作用。将目前已注释的镰刀菌hnRNP G在禾谷镰刀菌基因组中进行比对,得到其同源蛋白FGSG_07478。本研究旨在考察该蛋白在禾谷镰刀菌生长发育、抵抗逆境、产毒和致病等方面的作用。[方法]基于同源重组原理和聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化方法,获得FGSG_07478基因敲除突变体ΔFGSG_07478,观察测定其在营养生长、无性繁殖、有性生殖、抵抗逆境中的变化,同时进行小麦胚芽鞘接种试验验证其致病力。通过超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测ΔFGSG_07478产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的能力,并利用RT-qPCR检测野生型菌株PH-1和突变菌株ΔFGSG_07478中参与DON生物合成的7个TRI基因的相对表达量。[结果]突变菌株ΔFGSG_07478的生长速率较野生型菌株PH-1慢16.2%,产孢量降低43.4%;有性生殖诱导结果显示ΔFGSG_07478的有性生殖能力减弱,较野生型产生更少的子囊壳。胁迫因子敏感性测定结果显示,ΔFGSG_07478对H_(2)O_(2)和十二烷基硫酸钠(SDS)等胁迫因子的敏感性显著增加,对刚果红的抗性显著增加。此外,与野生型相比,虽然致病力无明显差异,ΔFGSG_07478的DON生物合成量显著减少,TRI4、TRI5、TRI6、TRI8、TRI10、TRI12和TRI101等基因表达水平显著降低。[结论]FGSG_07478在禾谷镰刀菌的生长发育、有性生殖、逆境胁迫以及产毒过程中发挥着重要作用。

hnRNP U复合物结构及功能

核不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPs）是一组RNA结合蛋白,它们与人体健康密切相关,参与肿瘤发生、病毒感染、细胞凋亡等多种病理生理过程的调节.hnRNP U是其中分子量最大的磷酸化蛋白质,对基因的转录、定位和表达特别是性染色体的表观失活过程发挥着重要作用.hnRNP U多以DNA/RNA蛋白复合物形式参与细胞功能调节.

痰中检测核不均一核糖核蛋白A2/B1早期诊断肺癌的意义

目的:探讨检测痰中核不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在肺癌早期诊断中的意义。方法:收集63例疑诊肺癌患者的痰标本,分别采用痰涂片、痰细胞块切片细胞学检查(镜检找到癌细胞即诊断为肺癌)及痰细胞块切片免疫组织化学检测hnRNP A2/B1(表达阳性即诊断为肺癌)进行诊断,比较2种诊断方法的结果。结果:痰涂片及痰细胞块切片细胞学检查诊断肺癌的敏感度为31.8%,特异度为100%。痰细胞块检测hnRNP A2/B1诊断肺癌的敏感度为80%,特异度为68.4%。检测痰hnRNP A2/B1的敏感度显著高于痰细胞学检查(P<0.01)。结论:痰细胞块结合免疫组织化学法检测hnRNP A2/B1有助于发现早期肺癌。

异质性胞核核糖核蛋白A2在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的探讨异质性胞核核糖核蛋白A2(hnRNP A2)在类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)诊断中的临床意义,建立简便、快捷的ELISA检测方法,并与国外Anti-RA33 Ab试剂盒的结果对比,以作为验证国内试剂盒可用性的依据。方法以高纯度的具有抗原反应性的重组hnRNP A2蛋白作为抗原,对临床上包括137例RA在内的多种结缔组织病患者的血清中的相应抗体进行ELISA检测。应用国外Anti-RA33 Ab试剂盒ELISA法检测并对比检测结果。结果hnRNP A2在RA患者中的敏感性为37.23%,特异性为85.44%,抗hnRNP A2/RA33抗体在RA患者中阳性率均明显高于其他疾病组(P<0.05)。抗hnRNP A2/RA33抗体在早期RA患者中的阳性率为43.75%。与国外Anti-RA33 Ab试剂盒检测结果比较,在各组患者中检测抗RA33抗体的阳性率无明显差别(P>0.05),且总体符合率高达86.88%。另外,该抗体与年龄、病程、晨僵时间、血沉、C反应蛋白、关节功能、X线分期、类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子抗体(APF)及抗CCP抗体之间均无相关性(P>0.05)。结论我们初步纯化了RA33抗原,对hnRNP A2进行了基因的克隆、重组蛋白的表达和纯化,并以其为抗原,用ELISA方法检测抗hnRNP A2/RA33抗体是早期诊断RA的可靠方法。与国外Anti-RA33 Ab试剂盒的检测结果对比无明显差异,自制的抗RA33抗体试剂盒可以可靠地应用于临床检验。

长链非编码RNA STMN1P2在乳腺癌中的作用及机制研究

背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤进展中发挥重要调控作用,我们的前期研究通过lncRNA表达谱芯片筛选发现,微管不稳定蛋白1假基因2(stathmin 1 pseudogene 2,STMN1P2)在乳腺癌中高表达,但其生物学功能以及在乳腺癌中的作用尚未见报道。探讨lncRNA STMN1P2在乳腺癌中的作用及其机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)在复旦大学附属肿瘤医院收治的27例乳腺癌患者的乳腺癌组织、癌旁组织以及3种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、BT-549、MCF-7和人乳腺上皮细胞系MCF-10A中验证STMN1P2的表达水平。下调或上调STMN1P2的表达后,进行transwell、细胞凋亡和细胞周期检测,研究STMN1P2的生物学功能。通过RNA pull-down实验结合蛋白质印迹法(Western blot)挖掘STMN1P2的结合蛋白,探究潜在的分子机制。结果:STMN1P2在乳腺癌组织和细胞系中的表达显著上调(P<0.05)。干扰STMN1P2后,BT-549细胞的迁移能力显著减弱(P<0.05);过表达STMN1P2后,MDA-MB-231细胞的迁移能力显著增强(P<0.05)。而STMN1P2对细胞凋亡和细胞周期影响不明显。RNA pull-down实验结果显示,核内不均一核糖核蛋白U(heterogeneous nuclearribonucleoproteinU,hnRNPU)可能为STMN1P2结合蛋白,且hnRNPU的mRNA和蛋白水平均受STMN1P2调控(P<0.05)。挽救实验结果显示,抑制hnRNPU表达能够逆转STMN1P2的促细胞迁移作用(P<0.05)。结论:STMN1P2可能通过结合hnRNPU发挥促进乳腺癌细胞迁移的作用。

富含鸟嘌呤序列的RNA结合因子(GRSF1)研究进展

富含鸟嘌呤序列的RNA结合因子1(GRSF1)是RNA结合蛋白,属于异质核核糖核酸蛋白(hnRNP)F/H家族,该蛋白家族成员均含有两个以上类RNA识别基序(qRRMs)和至少一个辅助结构域。qRRM(类RNA识别基序)与RRM(RNA识别基序)相似但作用方式不同。在发育、衰老、肿瘤等领域,GRSF1发挥着重要作用。随着生物信息学和测序技术的发展,GRSF1的功能和作用机制被逐渐揭示,但并未得到充分解析。该文对GRSF1结构特点、表达调控和作用机制进行了概述,并总结了其在发育、细胞衰老、肿瘤发生等领域的研究进展,为深入探究GRSF1的作用机制及挖掘其生物功能奠定基础。