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禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的建立 被引量:33
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作者 张应国 宋建领 +2 位作者 胡媛媛 王金萍 张富强 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第8期600-604,共5页
研究建立了禽流感病毒(AIV)A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型AIV.所建立的RT-PCR和多重RT-PCR从核酸提取、基因扩增到产物分析在3~4h内即... 研究建立了禽流感病毒(AIV)A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型AIV.所建立的RT-PCR和多重RT-PCR从核酸提取、基因扩增到产物分析在3~4h内即可完成,经对36株AIV及相关病毒分离物检测,与病毒分离鉴定的结果完全一致,且与相关病毒或其他亚型无交叉反应.采用多重RT-PCR检测80份棉拭子样品,并与病毒分离鉴定方法比较,二者H5N1、H9N2亚型的鉴定结果完全吻合.结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,为临诊样品中AIV型及H5N1、H9N2亚型鉴定和诊断的有效方法. 展开更多
关键词 禽流感病毒 多重RT-PCR H5N1亚型 hgn2亚型
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人参皂苷Rb1对H9N2流感病毒诱导急性肺损伤小鼠抗氧化酶的影响 被引量:6
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作者 刘宝剑 王存连 +5 位作者 徐明举 魏东 王国华 张瑞华 刘英 徐彤 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第1期38-43,I0011,共7页
目的 探讨人参皂苷Rb1(G-Rb1)对肺损伤小鼠抗氧化酶活力的影响.方法 将195只6~8周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、肺损伤模型组(ALI组)、人参皂苷Rb1组(G-Rb1组),每组65只.ALI与G-Rb1组采用100 μL SI A/swine/HeBei/012/2008/猪... 目的 探讨人参皂苷Rb1(G-Rb1)对肺损伤小鼠抗氧化酶活力的影响.方法 将195只6~8周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、肺损伤模型组(ALI组)、人参皂苷Rb1组(G-Rb1组),每组65只.ALI与G-Rb1组采用100 μL SI A/swine/HeBei/012/2008/猪流感病毒(H9N2 SIV)经鼻腔接种建立急性肺损伤模型,同时G-Rb1组腹腔注射人参皂苷Rb1液0.1 mL,剂量为10 mg/(kg·bw),连续7d;对照组鼻腔接种相同剂量生理盐水稀释的正常鸡胚尿囊液.观察临床症状、肺病理组织学变化,计算小鼠肺湿干重比、肺系数,检测小鼠肺组织T-SOD、MPO、CAT、GSH-PX活力.结果 从第2天末开始ALI组大部分小鼠出现高度的精神沉郁,呼吸极度困难,采食量明显减少,体重下降.肺部明显水肿、淤血和出血,炎性细胞渗出,对照组小鼠各器官未见异常.肺系数及肺干湿重比逐渐升高,第8天开始下降,第14天趋于正常.G-Rb1组症状明显轻于攻毒组,症状出现较缓,症状较轻,死亡时间延迟,死亡率降低.在第4、6、8天,与对照组比G-Rb1组和ALI组T-SOD及CAT活力显著降低(P&lt;0.01),组间比,G-Rb1组明显高于ALI组(P&lt;0.05);在各时间点,与对照组比,ALI组GSH-PX活力显著降低(P&lt;0.01),而G-Rb1组则显著升高(P&lt;0.01),实验组组间差异显著(P&lt;0.01).结论 G-Rb1在一定浓度范围内,具有提高小鼠抗氧化酶活力作用,一定程度上改善H9N2猪流感病毒对肺组织的氧化损伤. 展开更多
关键词 人参皂苷RB1 H9N2流感病毒 急性肺损伤 抗氧化酶
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华东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析 被引量:5
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作者 黄欣梅 李银 +3 位作者 刘宇卓 赵冬敏 杨婧 韩凯凯 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期382-388,共7页
为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008~2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素(HA)基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基... 为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008~2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素(HA)基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化位点进行分析。结果显示,17株H9N2亚型AIV HA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为84.6%~99.3%和86.0%~99.5%,均属于欧亚分支。其中15株鸡源病毒属于Y280-like亚系,2株鸭源病毒属于G1-like亚系。HA裂解位点都是非连续碱性氨基酸,属于低致病力毒株。HA受体结合位点149、150、191、198和234位氨基酸存在变异,尤其是234位氨基酸有14株毒株变为L,表现出人流感病毒受体结合特性。有2株毒株在145位氨基酸出现新的糖基化位点,5个毒株在218位氨基酸缺失1个糖基化位点,13个毒株在313位氨基酸增加了一个新的糖基化位点。研究结果表明华东地区近年来H9N2亚型AIV存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 HA基因 进化分析
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不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异 被引量:3
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作者 王建琳 曹志伟 +1 位作者 王冬冬 尹燕博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期907-913,共7页
本试验拟研究不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的动态变化,为不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导IFN-Ⅰ产生差异的机制提供依据。150只6周龄SPF鸡随机分为3组,分别静脉接种PB... 本试验拟研究不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导SPF鸡、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的动态变化,为不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导IFN-Ⅰ产生差异的机制提供依据。150只6周龄SPF鸡随机分为3组,分别静脉接种PBS、105 EID50毒株SD/196和SD/818各0.2mL,分别于接种后的第1、3、5、7和10天每组剖杀8只,收集具有明显病变差异的组织;180枚10日龄SPF鸡胚分别尿囊腔接种PBS、104 EID50的SD/196毒株和SD/818毒株各0.1mL,分别于接种后的第4、8、16、24、32和48小时每组收集胚体10个;鸡胚成纤维细胞分别接种PBS、SD/196和SD/818毒株病毒液(1moi)进行37℃培养,于感染后的第4、8、16、24、32和48小时收集细胞;动态收集的病变组织、胚体和成纤维细胞通过荧光定量PCR测定TLR-7和Mx基因mRNA水平的表达。结果显示,肺、肾、十二指肠和法氏囊为主要病变差异组织,除鸡胚TLR-7的表达外,毒株SD/818大部分时间点诱导主要病变差异组织、鸡胚和成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达显著高于毒株SD/196(P<0.05)。结果表明不同致病性H9N2亚型禽流感病毒明显诱导了SPF鸡主要病变差异组织、SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞中TLR-7和Mx基因mRNA的表达,且较高致病性毒株SD/818诱导表达量明显高于较低致病性毒株SD/196。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 致病性 SPF鸡 TLR- 7 Mx
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Astragalus polysaccharide enhances immunity and inhibits H9N2 avian influenza virus in vitro and in vivo 被引量:48
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作者 Sanpha Kallon Xiaorong Li +7 位作者 Jun Ji Cuiying Chen Qianyun Xi Shuang Chang Chunyi Xue Jingyun Ma Qingmei Xie Youngliang Zhang 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS 2013年第4期325-335,共11页
This study investigated the humoral immunization of Astragalus polysaccharide (APS) against HgN2 avian influenza virus (H9N2 AIV) infection in chickens. The effects of APS treatment on H9N2 infection was evaluated... This study investigated the humoral immunization of Astragalus polysaccharide (APS) against HgN2 avian influenza virus (H9N2 AIV) infection in chickens. The effects of APS treatment on H9N2 infection was evaluated by an Mqq- [3(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 3-diphenyl tetrazolium bromide] assay and analysis of MFIC and cytokine mRNA expression. The effect on lymphocyte and serum antibody titers in vivo was also investigated. IL-4, IL-6, IL-10, LITAF, IL-12 and antibody titers to H9N2 AIV wet enhanced in the first week after APS treatment. The results indicated that APS treatment reduces H9N2 AIV replication and promotes early humoral immune responses in young chickens.This study investigated the humoral immunization of Astragalus polysaccharide (APS) against HgN2 avian influenza virus (H9N2 AIV) infection in chickens. The effects of APS treatment on HgN2 infection was evaluated by an M]q- [3(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 3-diphenyl tetrazolium bromide] assay and analysis of MHC and cytokine mRNA expression. The effect on lymphocyte and serum antibody titers in vivo was also investigated. IL-4, IL-6, IL-10, LITAF, IL-12 and antibody titers to PIgN2 AIV were enhanced in the first week after APS treatment. The results indicated that APS treatment reduces HgN2 AIV replication and promotes early humoral immune responses in young chickens. 展开更多
关键词 Astrogalus polysaccharide hgn2 avian influenza virus Immune effect
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H9N2禽流感病毒反向遗传系统转录/表达载体的构建和验证 被引量:5
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作者 卢建红 邵卫星 +3 位作者 龙进学 刘玉良 石火英 刘秀梵 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期388-392,共5页
设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物,用RT-PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因... 设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物,用RT-PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因,而其它5个内部基因来自A/WSN/33,进行了6种3+5组合形式的基因重排,把相应组合的转录/表达质粒共转染COS-1细胞,均产生了预期组合、有感染性的H9N2亚型流感病毒,表明亲缘关系遥远的流感病毒可以互相获取基因片段产生重组病毒,提示表面结构基因和单个内部基因不足以限制H9N2AIV在哺乳动物细胞上的宿主范围,同时也验证了构建的8个转录/表达载体均能有效工作,为进一步研究H9N2亚型AIV基因结构与功能、AIV与宿主之间的关系打下了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 反向遗传技术 基因重排
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抗H9N2 AIV HA单克隆抗体的制备及其在胶体金层析检测中的初步应用 被引量:3
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作者 詹爱军 王新卫 +2 位作者 陈枝楠 卢体康 花群义 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第9期123-126,共4页
用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均... 用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。用制备的抗H9亚型AIV HA的单克隆抗体做成胶体金层析检测试纸条,可以检测到200个EID50的H9亚型AIV,为监测该亚型AIV试剂盒的进一步商品化奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型AIV 单克隆抗体 胶体金层析检测
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H9N2亚型禽流感病毒对鸭免疫器官的组织学影响 被引量:5
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作者 李静萍 盖晋宏 +1 位作者 魏锁成 胡庆平 《西北民族大学学报(自然科学版)》 2008年第3期56-58,共3页
120只12日龄的健康樱桃谷肉鸭平均分成两组,第一组接种H9N2禽流感病毒,第二组为健康对照组.接种后15 d采集免疫器官进行组织学观察;同时采集临床疑似感染H9N2亚型禽流感病毒的病鸭进行对比检查.结果表明:①脾脏淋巴滤泡减少,脾实质内淋... 120只12日龄的健康樱桃谷肉鸭平均分成两组,第一组接种H9N2禽流感病毒,第二组为健康对照组.接种后15 d采集免疫器官进行组织学观察;同时采集临床疑似感染H9N2亚型禽流感病毒的病鸭进行对比检查.结果表明:①脾脏淋巴滤泡减少,脾实质内淋巴细胞大量坏死、崩解.②胸腺小叶发育不良,淋巴细胞减少,网状内皮细胞增生.③法氏囊淋巴滤泡减少,组织中淋巴细胞坏死、崩解.④骨髓出血、水肿,髓系细胞坏死、崩解.对照组没有相应的病理变化.自然感染病例与人工接种感染病例组织学变化相同,表明樱桃谷肉鸭感染H9N2亚型禽流感病毒后,可造成严重免疫抑制. 展开更多
关键词 hgn2禽流感病毒 樱桃谷肉鸭 免疫器官 组织学
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一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒的致病性及其HA基因遗传进化分析 被引量:1
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作者 汪萍 刘丽娅 +4 位作者 金映红 沙依兰.卡依扎 陆桂丽 夏俊 成进 《动物医学进展》 北大核心 2017年第1期41-44,共4页
为了解H9N2亚型禽流感病毒在新疆蛋鸡养殖场的致病性及遗传进化特点,对一株分离自蛋鸡的禽流感病毒A/Chicken/Xinjiang/01/2010(H9N2)进行了致病性及遗传进化分析。结果显示,分离株的MDT为92h,ICPI指数为1.125,IVPI指数为0.14,HA裂解位... 为了解H9N2亚型禽流感病毒在新疆蛋鸡养殖场的致病性及遗传进化特点,对一株分离自蛋鸡的禽流感病毒A/Chicken/Xinjiang/01/2010(H9N2)进行了致病性及遗传进化分析。结果显示,分离株的MDT为92h,ICPI指数为1.125,IVPI指数为0.14,HA裂解位点处氨基酸序列为335 RSSRGLF342,这些特征均证实该分离株为低致病性AIV。HA基因遗传进化分析表明,该分离株在系统进化树上与A/swine/XJWLMQ/7/09(H9N2)及3株野生鸟类新疆分离株的亲缘关系最为接近,该分离株HA基因属于欧亚谱系的A/chicken/Beijing/94(H9N2)和A/chicken/Hongkong/G9/97(H9N2)的一个分支。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 蛋鸡 致病性 遗传进化
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2013年云南省H9N2亚型禽流感病毒两个进化分支毒株抗原性变异分析 被引量:1
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作者 石凤海 胡媛媛 +5 位作者 张文东 孔强 张应国 范泉水 赵焕云 张富强 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期6-11,共6页
为明确2013年云南省H9N2亚型禽流感病毒Ⅲ-1和Ⅲ-2小分支间是否存在抗原性差异,以及这种抗原性差异是否与氨基酸位点变异有关,从2个小分支中选取7个毒株与疫苗株进行系统发育分析和血清学交叉比对试验。结果表明,2个小分支HA基因核苷酸... 为明确2013年云南省H9N2亚型禽流感病毒Ⅲ-1和Ⅲ-2小分支间是否存在抗原性差异,以及这种抗原性差异是否与氨基酸位点变异有关,从2个小分支中选取7个毒株与疫苗株进行系统发育分析和血清学交叉比对试验。结果表明,2个小分支HA基因核苷酸序列同源性为86.6%~98.4%,与2000年前疫苗株亲缘关系较远,Ⅲ-1分支与2000年后疫苗株(ACKLGQ113和ACKDL2010)亲缘关系较近。血清学交叉比对试验结果经统计学分析显示,Ⅲ-1和Ⅲ-2小分支间抗原性存在差别。氨基酸比对结果表明,不同进化亚分支毒株与疫苗株相比氨基酸存在变异;与已报道的抗原表位关键性位点相比,Ⅲ-1分支中部分毒株抗原表位关键性位点存在变异,Ⅲ-2分支毒株无变异,但在其他8个氨基酸位点存在特有变异,是否存在未知抗原表位关键性位点,以及其他氨基酸位点变异是否会辅助性影响抗原变异,还有待进一步研究。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 进化分支 抗原性变异分析
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H9N2亚型猪源性流感病毒对C57BL/6小鼠致病性的研究
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作者 夏小伟 李珮瑶 +4 位作者 王嘉威 徐明举 张瑞华 王存连 徐彤 《河北北方学院学报(自然科学版)》 2018年第6期1-6,共6页
目的探讨A/swine/heBei/012/2008/(H9N2)猪源性流感病毒(H9N2-SIV)对C57BL/6近交系小鼠的致病特征,为进一步利用该品系瞬时电位受体M2基因(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)敲除小鼠模型研究H9N2-SIV致血管内皮细胞损... 目的探讨A/swine/heBei/012/2008/(H9N2)猪源性流感病毒(H9N2-SIV)对C57BL/6近交系小鼠的致病特征,为进一步利用该品系瞬时电位受体M2基因(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)敲除小鼠模型研究H9N2-SIV致血管内皮细胞损伤的作用机制奠定基础。方法经鼻腔接种途径感染C57BL/6小鼠,观测临床症状、采食量及体质量变化、死亡率、组织病理学变化;测定病毒在组织内的复制滴度及半数致死量(50%lethal dose,LD50)。结果感染后2~8d,感染小鼠精神高度沉郁,采食量降低、体质量严重下降并出现严重的呼吸困难。5~8d内60%小鼠死亡;肺脏严重水肿、出血;病理组织学变化以肺严重水肿、出血、坏死和炎性细胞渗出为主;病毒分离显示包括脑在内的所有肺外器官均分离出H9N2病毒,但肺组织病毒滴度最高,第3天和第7天分别为5.2log2和8.1log2;该毒株的LD50为10-2.5/0.1mL。结论H9N2-SIV在未经预先适应的情况下能够引起C57BL/6小鼠以肺部损伤为主的致死性全身感染,证实以C57BL/6小鼠为基础构建TRPM2基因敲除模型可作为进一步研究H9N2-SIV致血管内皮细胞损伤作用机制的动物模型。 展开更多
关键词 H9N2亚型猪源性流感 C57BL/6小鼠 致病性
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H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及其表位鉴定 被引量:1
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作者 刘晓婧 凌红丽 +5 位作者 蒋贻海 张园园 赵明 杨光烈 于春梅 薄宗义 《安徽农业科学》 CAS 2017年第10期129-131,192,共4页
[目的]制备H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体和鉴定表位。[方法]选取H9N2亚型禽流感病毒(AIV)WD-1株的纯化抗原免疫BALB/c小鼠,对获得2株抗H9N2亚型禽流感病毒的特异性单抗4C10和6E3表位进行鉴定。[结果]单抗4C10和6E3分别属于IgG1和IgG2b... [目的]制备H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体和鉴定表位。[方法]选取H9N2亚型禽流感病毒(AIV)WD-1株的纯化抗原免疫BALB/c小鼠,对获得2株抗H9N2亚型禽流感病毒的特异性单抗4C10和6E3表位进行鉴定。[结果]单抗4C10和6E3分别属于IgG1和IgG2b亚型,ELISA检测效价分别为1∶10~3和1∶10~5;HI效价分别为2^(15)和2^(14);2株单抗均具有鸡胚中和活性。利用噬菌体展示表位技术对2株单抗的抗原表位进行鉴定,结果显示均为针对HA蛋白的1个线性表位。[结论]该研究为禽流感病毒快速诊断方法的建立提供了依据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 单抗 抗原表位
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马立克病毒感染对鸡体液免疫的影响 被引量:2
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作者 蔡秀磊 李玉保 +1 位作者 李娟 刘思当 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期143-144,共2页
为了验证和探讨马立克病毒(MDV)对肉鸡的免疫抑制作用,同时对比研究MDV疫苗和强毒株对机体免疫力的影响,试验通过人工攻毒MDV,建立MD模型,各组SPF鸡于2日龄注射NDV+H9N2AIV灭活苗,7日龄时以LaSota株NDV弱毒疫苗饮水免疫,在SPF... 为了验证和探讨马立克病毒(MDV)对肉鸡的免疫抑制作用,同时对比研究MDV疫苗和强毒株对机体免疫力的影响,试验通过人工攻毒MDV,建立MD模型,各组SPF鸡于2日龄注射NDV+H9N2AIV灭活苗,7日龄时以LaSota株NDV弱毒疫苗饮水免疫,在SPF鸡14,21,28,35,42日龄时,各组无菌采血25份,分离血清,利用血凝/血凝抑制试验研究各组ND和H9N2的体液抗体水平。结果表明:在整个试验周期,疫苗对照组和空白对照组NDV和H9N2AIV抗体水平差异不显著;攻毒组SPF鸡在21~42日龄时,NDV和H9N2AIV抗体水平显著或极显著低于对照组。 展开更多
关键词 马立克病毒(MDV) 新城疫 H9N2亚型禽流感 体液免疫
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Adjuvant effects mediated by the carbohydrate recognition domain ofAgrocybe aegerita lectin interacting with avian influenza H9N2 viral surface glycosylated proteins
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作者 Li-bao MA Bao-yang XU +6 位作者 Min HUANG Lv-hui SUN Qing YANG Yi-jie CHEN Ya-lin YIN Qi-gai HE Hui SUN 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2017年第8期653-661,共9页
Objective: To evaluate the potential adjuvant effect of Agrocybe aegerita lectin (AAL), which was isolatedfrom mushroom, against a virulent H9N2 strain in vivo and in vitro. Methods: In trial 1, 50 BALB/c male mi... Objective: To evaluate the potential adjuvant effect of Agrocybe aegerita lectin (AAL), which was isolatedfrom mushroom, against a virulent H9N2 strain in vivo and in vitro. Methods: In trial 1, 50 BALB/c male mice (8 weeksold) were divided into five groups (n=10 each group) which received a subcutaneous injection of inactivated HgN2(control), inactivated HgN2+0.2% (w/w) alum, inactivated HgN2+0.5 mg recombinant AAL/kg body weight (BW), inac-tivated HgN2+1.0 mg AAl_/kg BW, and inactivated H9N2+2.5 mg AAL/kg BW, respectively, four times at 7-d intervals. Intrial 2, 30 BALB/c male mice (8 weeks old) were divided into three groups (n=10 each group) which received a sub-cutaneous injection of inactivated HgN2 (control), inactivated HmN2+2.5 mg recombinant wild-type AAL (AAL-wt)/kg BWand inactivated H9N2+2.5 mg carbohydrate recognition domain (CRD) mutant AAL (AAL-mutR63H)/kg BW,respectively, four times at 7-d intervals. Seven days after the final immunization, serum samples were collectedfrom each group for analysis. Hemagglutination assay, immunogold electron microscope, lectin blotting, and co-immunoprecipitation were used to study the interaction between hAL and HgN2 in vitro. Results: IgG, IgG1, and IgG2aantibody levels were significantly increased in the sera of mice co-immunized with inactivated HgN2 and AAL whencompared to mice immunized with inactivated H^N2 alone. No significant increase of the IgG antibody level was de-tected in the sera of the mice co-immunized with inactivated HgN2 and AAL-mutR63H. Moreover, AAL-wt, but notmutant AAL-mutR63H, adhered to the surface of H9N2 virus. The interaction between AAL and the H9N2 virus wasfurther demonstrated to be associated with the CRD of AAL binding to the surface glycosylated proteins, hemagglutininand neuraminidase. Conclusions: Our findings indicated that AAL could be a safe and effective adjuvant capable ofboosting humoral immunity against HgN2 viruses in mice through its interaction with the viral surface glycosylatedproteins, hemagglutinin and neuraminidase. 展开更多
关键词 Adjuvant AGROCYBE aegerita LECTIN CARBOHYDRATE recognition domain GLYCOSYLATED protein AVIAN in-fluenza hgn2 virus
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SB203580对猪流感病毒诱导小鼠急性肺损伤中炎症因子的影响
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作者 魏东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期756-760,共5页
为探讨SB203580对猪流感病毒(SIV)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)中炎症因子的影响,将180只6~8周龄SPF级BALB/c雌性小鼠,随机平均分成SIV感染组(感染组)、SIV感染+SB203580组(SB组)和对照组,于感染后2、4、6、8和14d,分别进行临床症... 为探讨SB203580对猪流感病毒(SIV)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)中炎症因子的影响,将180只6~8周龄SPF级BALB/c雌性小鼠,随机平均分成SIV感染组(感染组)、SIV感染+SB203580组(SB组)和对照组,于感染后2、4、6、8和14d,分别进行临床症状、肺脏病理组织学观察和肺组织中炎症因子测定。结果显示,感染组和SB组小鼠均表现明显的ALI症状,但SB组小鼠症状较轻,肺损伤程度明显低于感染组;感染组和SB组中炎症因子水平均高于对照组,SB组小鼠肺脏炎症因子水平较感染组降低。说明p38MAPK特异性抑制剂SB203580可以下调磷酸化p38MAPK的表达水平,降低炎症因子的表达,减轻ALI中肺组织的病理损伤。 展开更多
关键词 SB203580 p38MAPK H9N2亚型猪流感病毒 BALB/C小鼠 急性肺损伤 炎症因子
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青海湖地区5株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列进化分析 被引量:8
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作者 刘琳玉 姜双应 +13 位作者 汪立杰 易虎 赵生仓 唐志坚 徐翠玲 董婕 高荣保 张烨 邹淑梅 李晓丹 杨磊 杨静 陈涛 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期109-118,共10页
2012年7~9月从来源于青海湖地区活禽市场的环境样本中分离到5株H9N2亚型禽流感病毒,为了了解其基因遗传进化情况,本研究通过RT—PCR技术扩增分离毒株的8个基因片段,并进行全基因序列测定。对其分子特征及全基因序列进行遗传进化分... 2012年7~9月从来源于青海湖地区活禽市场的环境样本中分离到5株H9N2亚型禽流感病毒,为了了解其基因遗传进化情况,本研究通过RT—PCR技术扩增分离毒株的8个基因片段,并进行全基因序列测定。对其分子特征及全基因序列进行遗传进化分析。结果显示5株病毒的HA基因片段的核苷酸相似度为93.2%~99.1%。NA基因核苷酸的相似度为94.5%~99.8%。A/environment/qinghai/017/2012的裂解位点为PSKSSRGLF,其它4个毒株的HA裂解位点均为PSRSSRGLF。5个病毒的HA基因第226位受体结合位点均为L。M1基因片段中发生了N30D和T215A替换。遗传进化分析表明5株病毒同2005年湖南分离的A/chicken/Hunan/5260/2005(HgN2)毒株类似,为一种重配基因型禽流感病毒。其中HA、NA、NS基因片段属于Y280-like支系,MP基因片段属于G1-like支系,NP、PBl、PB2、PA四个基因片段属于F98-like支系。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感病毒 基因组 分子特征 遗传进化分析
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猪流感病毒H9N2亚型济南株HA、NA基因的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 朱晓林 凌宗帅 +4 位作者 邱莹 谢之景 赵宏坤 姜世金 张兴晓 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期211-214,共4页
根据GenBank中流感病毒H9N2亚型HA基因与NA基因序列,分别设计扩增HA基因与NA基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒H9N2济南株(SW/SD/JT/07)HA基因和NA基因,分别将RT-PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果表明,SW/SD... 根据GenBank中流感病毒H9N2亚型HA基因与NA基因序列,分别设计扩增HA基因与NA基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增猪流感病毒H9N2济南株(SW/SD/JT/07)HA基因和NA基因,分别将RT-PCR扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果表明,SW/SD/JT/07 HA基因长度为1701bp,编码566个氨基酸,HA0切割位点序列为R-S-S-R-G,属非高致病性毒株;HA蛋白有8个糖基化位点,与参考毒株糖基化位点数一致;HA蛋白有5个受体结合位点,其中在190位氨基酸与其余参考毒株存在差异。SW/SD/JT/07 NA基因长度为1413bp,编码470个氨基酸,NA蛋白基质结合部与参考毒株一致,高度保守;NA蛋白有5个抗原位点,在325位为D其余参考毒株均为N,SW/SD/JT/07与DC/HB/W1/04,CK/GS/2/99在398位为E,其余参考毒株为D或N;SW/SD/JT/07 NA蛋白与CK/SH/F/98,DC/HB/W1/04,CK/GS/2/99,SW/GD/WXL/04,SW/SD/W4/03,SW/YN/Simao2/07一样在茎区63,64,65位发生氨基酸缺失。SW/SD/JT/07 HA基因与参考毒株的同源性82.5%~98.6%,NA基因与参考毒株的同源性82.2%~99.1%。SW/SD/JT/07 HA基因与NA基因系统发生树分析表明,SW/SD/JT/07与AIV H9N2亚型亲缘关系密切。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H9N2亚型 HA基因 NA基因 克隆 序列分析
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H9亚型禽流感病毒与大肠杆菌并发感染的诊断 被引量:2
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作者 彭小峻 王国宝 +1 位作者 王艳 黄瑶 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第19期2338-2340,共3页
目的对苏北某鸡场送检病鸡,剖检显示严重的心包炎、肝周炎,部分脏器出血,进行实验室诊断。方法取病鸡肝脏划线接种麦康凯平板,同时取病鸡肝脏、脾脏及胰腺,病料混合研磨后接种3枚10日龄SPF鸡胚,每个鸡胚接种0. 2 ml研磨液。将平板上长... 目的对苏北某鸡场送检病鸡,剖检显示严重的心包炎、肝周炎,部分脏器出血,进行实验室诊断。方法取病鸡肝脏划线接种麦康凯平板,同时取病鸡肝脏、脾脏及胰腺,病料混合研磨后接种3枚10日龄SPF鸡胚,每个鸡胚接种0. 2 ml研磨液。将平板上长出的细菌纯化后进行细菌生化实验及16S r DNA基因测序鉴定。死亡鸡胚收集尿囊液进行试纸条检测、血凝及血凝抑制实验。结果生化试验、16S rDNA扩增序列分析结果显示麦康凯上红色菌落为大肠杆菌,分离病毒具有血凝性且能被禽流感H9亚型特异性血清抑制。结论本病例为H9亚型AIV与大肠杆菌混合感染。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 大肠杆菌 混合感染
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