B淋巴细胞信号转导相关接头蛋白Bam32与Hic-5的相互作用

32kDB淋巴细胞接头分子(Bam32)是调控B细胞抗原受体(Bcellantigenreceptor,BCR)信号转导通路的关键蛋白质分子之一.为了研究Bam32的功能及其作用机理,应用酵母双杂交技术筛选了能与Bam32相互作用的蛋白质分子.筛选发现1个呈强阳性反应的克隆,其基因编码Hic5,为paxillin蛋白家族成员之一.Paxillin是整合素(integrin)信号转导通路中的关键蛋白质分子,而整合素在细胞对细胞外基质分子的粘附、细胞运动等方面起了重要的作用,因此对Bam32与Hic5的相互作用进行了进一步研究.用293T细胞共转染和特异性免疫共沉淀法证实,Bam32可在哺乳动物细胞中与Hic5共沉淀,证明它们可以在细胞内相互作用.应用免疫共沉淀法和抗磷酸化酪氨酸抗体检测显示,激酶Lyn可导致Bam32和Hic5的磷酸化.这些研究结果提示,Bam32与Hic5的相互作用可能在激活下游分子的信号转导级联反应以及调节细胞的粘附和运动等功能中发挥了重要的作用.

Hic-5/ARA55蛋白的研究进展

Hic-5/ARA55基因最早是作为转化生长因子β1诱导基因（TGF-β1）和过氧化氢诱导的克隆从小鼠成骨细胞MC3T3中分离出来,属于LIM结构域蛋白家族,与桩蛋白具有高度同源性。Hic-5/ARA55蛋白主要位于细胞黏着斑,可以穿梭于细胞质和细胞核的蛋白质,

Hic-5基因在胆管纤维化中的表达

目的研究Hic-5基因在纤维化胆管组织中的作用机制。方法随机选取30只SD大鼠,分为正常组(n=10)、假手术组(n=10)和手术组(n=10)。造模21 d后,摘取大鼠胆管组织进行Masson染色,明确纤维化的胆管组织,分别采用免疫组织化学法和蛋白印迹法检测正常组、假手术组和手术组中Hic-5和TGF-β1的阳性表达,并分析其相关程度。结果 (1)Masson染色:手术组较正常组和假手术组出现明显的条梭状结构(蓝色)即纤维条索组织(P <0.001)。(2)免疫组织化学法和蛋白印迹法检测均显示:Hic-5和TGF-β1在手术组中较正常组和假手术组的表达升高明显(P <0.001),而正常组和假手术组间的差异无统计学意义(P> 0.05)。(3)Hic-5和TGF-β1在免疫组织化学法和蛋白印迹法检测分析结果中具有明显的相关性(r=0.989 8,P <0.001,r=0.776 4,P <0.01)。结论 (1)纤维化的大鼠胆管组织中Hic-5和TGF-β1的表达升高,说明两者与胆管纤维化的发生发展有着密切的关系;(2)Hic-5和TGF-β1在纤维化大鼠胆管组织中的表达和变化有着显著的正相关关系,说明两者可能相互作用共同导致了胆管纤维化。

Hic-5与纤维化疾病研究进展

纤维化疾病如病理性斑痕、肝纤维化、肾脏纤维化等是机体对损伤异常修复、细胞外基质（ECM）过多沉积的结果.尽管各纤维化疾病临床表现和发病因素不尽相同,但过度纤维化是它们的共同特征.纤维化疾病是静态的成纤维细胞激活进入ECM分化为分泌型肌成纤维细胞,转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）持续的自分泌是引起纤维化疾病的关键.在TGF-β1刺激下,静态成纤维细胞分化成肌成纤维样细胞,具有收缩特性,可以表达出大量α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,产生ECM成分包括胶原蛋白,形成纤维化.…… 作者简介：黄觉毅（1986-）,男,四川达州人,硕士研究生,主要进行肝纤维化的研究;E-mail：514286079@qq.com.

Hic-5／ARA55抑制大肠癌细胞生长的实验研究

目的研究Hic-5／ARA55对大肠癌细胞生长的影响及其机制。方法流式细胞仪检测已稳定转染Hic-5／ARA55的大肠癌细胞系（Lovo-Hic-5／ARA55组）的细胞周期，用未转染质粒（Lovo组）和转染空质粒的Lovo细胞（Lovo-Vector组）作为对照。Western blot方法检测各组细胞之间主要细胞周期蛋白的表达差异，Luciferase Assay进一步研究Hic-5／ARA55与细胞周期蛋白的作用机制。建立裸鼠皮下种植瘤模型，7周后切取瘤体并称重，应用免疫组织化学方法检测各组皮下种植瘤的Hic-5／ARA55及相关细胞周期蛋白的表达差异。结果Lovo-Hic-5／ARA55组细胞由G0／G1期进入S期明显延迟，并且细胞周期蛋白P27表达升高，Lueiferase Assay证明Hic-5／ARA55在转录水平上调P27的表达。Lovo-Hic-5／ARA55组皮下种植瘤质量[（0．33±0．23）g]明显低于Lovo组[（1．20±0．39）g]和Lovo-Vector组[（1．30±0．49）g]，差异有统计学意义（P〈0．05）。Lovo-Hic-5／ARA55组种植瘤Hic-5／ARA55和P27均高表达，而Lovo组和Lovo-Vector组均低表达或阴性表达，差异有统计学意义（P〈0．05），并且Hic-5／ARA55和P27的表达呈正相关（r=0．816，P〈0．05）。结论Hic-5／ARA55在体外和裸鼠体内均通过在转录水平上调细胞周期抑制蛋白P27的表达来抑制大肠癌细胞的生长。

HIC-1基因在乳腺癌的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨癌高甲基化1(hypermethylated in cancer 1,HIC-1)基因在乳腺癌组织中的表达,以及恢复HIC-1基因表达对乳腺癌细胞增殖活力和凋亡的影响。方法:应用免疫组化方法测定乳腺癌组织芯片中80例癌组织的HIC-1蛋白表达,并分析其与临床病理的关系。应用甲基化特异性PCR法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中HIC-1基因启动子区域甲基化与基因表达的关系,5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)抑制甲基化后细胞HIC-1的表达水平变化。应用CCK-8方法和流式细胞仪测定恢复细胞HIC-1表达对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。结果:正常乳腺上皮组织HIC-1免疫组化染色呈强阳性,平均染色积分9.00±0,乳腺癌组织HIC-1染色明显降低,平均染色积分为4.58±1.22(P<0.001)。HIC-1的蛋白表达与病人年龄、发生部位以及是否出现淋巴结转移无关,但与肿瘤的组织学类型相关(P<0.05)。MDA-MB-231细胞HIC-1基因启动子区域呈完全甲基化,用5μM的5-aza-CdR处理后可抑制HIC-1基因启动子甲基化、恢复HIC-1表达,并呈现浓度依赖性。恢复HIC-1基因表达抑制MDA-MB-231细胞增殖活性,促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05)。结论:乳腺癌组织HIC蛋白表达和癌细胞HIC-1基因表达明显降低,去甲基化药物可恢复肿瘤细胞内HIC-1基因表达,从而达到抑制肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡的目的。

抑癌基因HIC-1甲基化状态在宫颈癌Hela细胞中的研究

目的:观察特异性甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-Aza-deoxycytidine)对宫颈癌Hela细胞株中HIC-1、P53启动子的去甲基化作用,对细胞增殖的影响,探讨P53与HIC-1之间的关系,以及HIC-1基因甲基化状态在宫颈肿瘤中的作用。方法:分别使用5、10、20μmol/L的5-Aza-CdR作用Hela细胞株1、3、5d,采用半定量RT-PCR检测P53、HPV、HIC-1表达的改变;用四甲基偶氮唑蓝法和直接计数法检测细胞生长与增殖状况。结果:Hela细胞株经三种不同浓度的5-Aza-CdR作用5d后Hela细胞形态上无明显改变;经药物处理后,细胞生长活力(A490值)受到不同程度的抑制,其作用在所检测的浓度范围内随5-Aza-CdR浓度的增加而增加,呈量效关系;5-Aza-CdR可有效上调HIC-1、P53基因在Hela细胞中的表达,并随浓度递增;而5-Aza-CdR干预前后,HPV18E6mRNA表达无明显改变。结论:HIC-1可能作为抑癌基因在宫颈癌的发生、发展中发挥重要作用,甲基化是调控其表达下调的重要机制,通过去甲基化有可能抑制宫颈癌病程进展。