结核分枝杆菌higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫机制的研究

目的探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫的作用。方法从Mtb H37Rv基因组上扩增获得目的基因,与载体连接后电转化入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)构建重组菌,对空载菌Ms_vec和重组菌Ms_higBA进行应激实验和Raw264.7小鼠巨噬细胞感染实验,检测细菌菌落形成单位(CFU)和细胞因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40,干扰素(interferon,IFN)-γ,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和诱导型一氧化氮合酶(inductible nitric oxide synthase,iNOS)的转录水平变化。结果成功构建Ms_higBA重组菌。应激实验结果表明higBA确能提高细菌在体外培养特定条件下的生存能力。胞内感染实验证明higBA能提高细菌在巨噬细胞内存活能力,影响细胞因子的转录水平。结论Mtb的higBA基因在细菌应激反应和胞内感染免疫中发挥了作用。

副猪嗜血杆菌HigB和HigA基因的原核表达及功能分析

副猪嗜血杆菌属于条件性致病菌,可引起猪的格拉泽病,表现为多发性浆膜炎和关节炎。毒素抗毒素系统(TA)广泛存在于细菌中,其参与各种应激状态下的生理调节,利于机体适应复杂环境。克隆编码副猪嗜血杆菌的HigBA毒素抗毒素蛋白的基因,并对其进行原核表达和分析鉴定。结果发现,HigB对生长有抑制作用,而HigA可以中和这种作用,HigBA构成一对毒素抗毒素系统。HigB在高温和高密度时,表达量显著增加,显示其参与逆境环境下的生理调控。