血浆和腹膜透析液中万古霉素浓度的测定及在腹膜透析相关性腹膜炎患者中的应用

目的:建立测定血浆和腹膜透析液中万古霉素浓度的HPLC法,为腹膜透析相关性腹膜炎患者的药物浓度监测提供参考。方法:采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇∶乙腈∶0.05 mol/L KH2PO4=11∶2∶87为流动相,检测波长236 nm,柱温30℃,流速1.0 ml/min,检测血浆和腹膜透析液中万古霉素的浓度。结果:血浆中的万古霉素浓度在0.2~40μg/ml范围内线性关系良好(r=0.998),定量限为0.2μg/ml,提取回收率为85.11%~89.15%,方法回收率为86.72%~89.51%。腹膜透析液中的万古霉素浓度在0.2~16μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999),定量限为0.2μg/ml,提取回收率为88.13%~90.18%,方法回收率为87.10%~103.24%。本研究共纳入36例腹膜透析相关性腹膜炎患者,31例(86.11%)患者的血浆和腹膜透析液中万古霉素浓度达标;而尿量>500 ml/d的患者,其血浆和腹膜透析液中万古霉素浓度偏低。结论:该方法可满足腹膜炎患者的万古霉素浓度监测,对于尿量>500 ml/d的患者,需适当增加万古霉素的剂量并加强监测,以维持安全有效的药物浓度。

Galectin-1在高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的:研究人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)中galectin-1的表达和在高糖腹透液(peritoneal dialysate solution,PDS)刺激下galectin-1表达的变化及其与上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法:以HPMCs为研究对象,实验分为:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),含1.5%葡萄糖的PDS(1.5%PDS)组,2.5%PDS组及4.25%PDS组。培养48 h后,采用实时定量PCR和Western印迹检测galectin-1,vimentin和zo-1 mRNA和蛋白的表达水平,分析galectin-1与vimentin和zo-1表达的相关性。使用阳离子脂质体转染galectin-1 siRNA至HPMCs内,实验分为:正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖),高糖组(4.25%PDS)和转染组(galectin-1 siRNA+4.25%PDS)。观察galectin siRNA干预后vimentin和zo-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果:不同浓度PDS刺激HPMCs 48 h后,与对照组比,galectin-1mRNA表达上调,尤以4.25%PDS组明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05),且具有浓度依赖性;同时vimentin mRNA表达上调,以2.5%PDS组和4.25%PDS组更明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05);而zo-1 mRNA和蛋白水平的表达均明显下调(P<0.05)。不同浓度高糖PDS刺激下galectin-1 mRNA和蛋白表达水平与vimentin mRNA和蛋白表达水平呈正相关(P<0.05);与zo-1 mRNA和蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。Galectin-1 siRNA干预后vimentin mRNA和蛋白水平的表达较高糖组明显下调(P<0.05),而zo-1 mRNA和蛋白水平的表达较高糖组明显上调(P<0.05)。结论:Galectin-1与高糖PDS诱导的HPMCs EMT相关,galectin-1 siRNA能够抑制高糖PDS诱导的HPMCs转分化。Galectin-1可能参与腹膜纤维化的发生环节,成为防治腹膜纤维化的新靶点。

几丁糖对高糖腹透液刺激大鼠腹膜间皮细胞TGF-β1表达的影响

目的探讨高糖腹透液(4.25%)对大鼠二代腹膜间皮细胞TGF-β1表达的影响及几丁糖(chitosan)的干预作用。方法取第2代鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMC)(经细胞形态和免疫组化鉴定),随机分为4组(n=4),A组即对照组:DMEM/F12培养基培养;B组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液;C组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液+几丁糖1.2mg/L;D组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液+几丁糖0.4mg/L。培养24h收集细胞提取RNA,48h收集细胞提取蛋白,RT-PCR检测腹膜间皮细胞TGF-β1mRNA的表达。Western印迹检测TGF-β1的蛋白表达。结果①RPMC经高糖腹透液(4.25%)刺激后,TGF-β1mRNA和蛋白的表达均上升,与0h比较,TGF-β1mRNA和蛋白的表达分别于24、48h时达到高峰,A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24h时,几丁糖使TGF-β1mRNA的表达下降明显(P<0.05),B组分别为A组的2.51倍、C组的2.13倍、D组的1.68倍,D组为C组的1.26倍且抑制程度与几丁糖浓度呈正相关(r=0.948,P<0.01)。48h时,几丁糖使TGF-β1的蛋白水平下降明显,B组分别为A组的1.85倍、C组的1.52倍、D组的1.24倍,D组为C组的1.23倍。C、D两组分别与B组比较差异有统计学意义(P<0.05),且抑制程度与几丁糖浓度呈正相关(r=0.831,P<0.05)。结论①高糖腹透液可刺激RPMCTGF-β1mRNA和蛋白表达上调;②几丁糖可抑制腹膜纤维化的中枢性因子TGF-β1表达的活性。

氟伐他汀对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的:探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响。方法:体外培养HPMCs,同步化24 h后,分为正常对照组、HGPDS组、HGPDS+Flu组、单纯氟伐他汀组、DMSO对照组,各组分别刺激不同时间后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活力,RT-PCR检测FN的mRNA表达,ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化。结果:与正常对照组比较,HGPDS明显抑制细胞活力,HGPDS联合Flu共同培养24、36 h,细胞活力有所恢复,其中,1×10-6mol/L Flu作用24 h,细胞活力改善差异有统计学意义(P<0.05);与正常对照组比较,HGPDS明显增加人腹膜间皮细胞FN mRNA及蛋白表达(P<0.05),并呈时间依赖性,其中FN mRNA于6 h达高峰,FN蛋白于24 h达高峰。Flu可抑制HGPDS诱导的FN的高表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论:HGPDS诱导体外培养人腹膜间皮细胞FN表达增加,此作用可被Flu抑制。

高效液相色谱法测定病人腹膜透析液中头孢唑啉的含量

高效液相色谱法测定病人腹膜透析液中头孢唑啉的含量赵玉兰，李楠，孙映和，张杰（中国人民解放军总医院中心仪器室北京１００８５３）１前言头孢唑啉钠是目前临床上常用的抗感染药，广泛用于腹膜透析病人的感染预防。但对其预防感染的实用价值和用药剂量还需进一步探讨。...

高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌VEGF的影响及氟伐他汀的干预作用

目的:观察氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法:体外培养HPMCs,同步化48 h后,分组如下:正常对照组、HGPDS组、HGPDS+Flu组、单纯Flu组。倒置显微镜观察各组细胞形态,RT-PCR法检测各组VEGF的mRNA表达,Western blot检测各组VEGF蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,在HGPDS作用下,48 h后细胞由铺路石样转变为长梭形,1×10-6mol/L Flu可部分逆转HPMCs的形态改变。与正常对照组相比,在HGPDS作用下,人腹膜间皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达明显增多(P<0.05),并呈时间依赖性,VEGF mRNA和蛋白分别在HGPDS干预后12 h和48 h达高峰(P<0.05)。Flu可明显抑制HGPDS诱导的VEGF的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论:适当浓度的Flu可以抑制HGPDS刺激体外培养人腹膜间皮细胞VEGF表达增加。

慢性肾衰竭SD大鼠腹膜透析模型的建立与应用

以5/6肾切除SD大鼠CRF模型为基础,将自主研制的套管式腹膜透析管置入大鼠腹腔进行腹膜透析(PD)治疗。以2.27%Glu腹透液,按100 mL/kg,4 h/次,2次/日,时间2周的方案治疗,记录引流量,通过液体清除、溶质清除评估腹透治疗效果。将透析大鼠分成3组,分别喂高、中、低盐饲料2周,观察残余肾的变化。结果表明,24只CRF大鼠顺利接受PD治疗。平均每只大鼠的单次透析治疗超滤量为1.11 mL±6.91 mL。单次透析治疗随着留腹时间延长,腹透液中肌酐水平逐渐升高,4 h后达到平台期。PD治疗2周后,大鼠的血肌酐和血尿素氮水平均显著下降(P<0.05,P<0.01)。高盐摄入加重CRF PD大鼠残余肾的损害,中、低盐负荷组之间差异不显著(P>0.05)。该模型有效地解决了堵管问题,完全确保腹透液引流的通畅充分;通过制定有效的CRF大鼠腹膜透析治疗方案,为进一步开展腹膜透析治疗研究奠定了基础。

氟伐他汀在大鼠腹膜透析模型中对腹膜的保护作用

目的：探讨氟伐他汀（fluvastatin,Flu）对腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）大鼠腹膜组织形态影响的初步研究。方法：通过SD雄性大鼠（体重180-200 g）腹腔注射4.25%浓度的葡萄糖腹透液的方式模拟腹膜透析。随机分为5个组：①正常对照组;②4.25%腹透液组;③单纯Flu组;④生理盐水组;⑤Flu干预的4.25%腹透液组。4周后留取各组大鼠壁层腹膜组织,光镜观察各组大鼠壁层腹膜形态学的变化,同时采用RT-PCR法测定各组大鼠腹膜转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）及纤维连接蛋白（fibronectin,FN）mRNA的表达。结果：光镜下HE染色显示4.25%腹透液组大鼠腹膜较正常对照组显著增厚,Flu干预组的壁层腹膜厚度薄于未干预组,生理盐水组和单纯Flu组大鼠腹膜的形态较正常对照组未见明显改变。4.25%腹透液组大鼠腹膜TGF-β1及FN mRNA的表达量均高于正常对照组（均P 〈 0.05）,Flu干预组两者mRNA的表达量均明显低于未干预组（均P 〈 0.05）,生理盐水组和单纯Flu组大鼠腹膜两者的mRNA表达量较正常组无明显统计学意义。结论：长期使用高糖腹透液会改变腹膜的结构,氟伐他汀在一定程度上对腹膜有保护作用,但具体机制仍需进一步研究。

建立高质量目标导向性腹膜透析

2006年国际腹膜透析协会发布腹膜透析(PD)临床实践指南,指出应充分透析以解决终末期肾病患者溶质清除与容量控制问题.2020年该指南获得更新,提出建立高质量目标导向性PD,强调透析患者生命质量重要意义,指出需要建立紧密的医患合作与共同决策机制,科学利用有限资源,妥善保护残余肾功能,维持液体平衡、营养状态和代谢毒素清除,并关怀衰老患者实际需求.本文结合相关文献和国家肾脏疾病临床研究中心实践经验,对指南更新部分进行介绍,解读指南亮点内容即透析患者生命质量与建立高质量目标导向性PD.

黄芪注射液对高糖腹透液作用下人腹膜间皮细胞AQP-1表达的影响

目的:探讨高糖腹透液对人腹膜间皮细胞(HPMC)水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响及黄芪注射液的干预作用。方法:采用HPMC体外培养模型,将HPMC分为5组:空白组、模型组、黄芪高、中、低剂量组。分别培养6、24、48h。Western blot法测定AQP-1蛋白的表达;RT-PCR检测24h时间段AQP-1 mRNA的表达。结果:Western Blot结果显示:给药6h后各组AQP-1蛋白表达无明显差异;24h后发现黄芪高、中剂量组能明显上调AQP-1蛋白表达,48h后发现仅黄芪高剂量组能上调AQP-1蛋白表达。RT-PCR结果显示:与模型组相比黄芪高、中、低剂量组AQP-1 mRNA的表达均明显上调(P<0.01),黄芪高剂量组作用更显著。结论:黄芪注射液能上调高糖环境下HPMC AQP-1的表达。

采用蛋白质组分析高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞的影响

目的 研究腹透液中葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMCs)分泌蛋白质影响,并采 用蛋白质组学方法分析其对腹膜纤维化和腹膜功能的影响。方法 采用胰蛋白酶消化法从人腹 膜组织中分离HPMCs,第3代用于实验。实验分组:对照组(F12培养基)和高糖组(F12培养基+ 4％葡萄糖),分别观察24 h和48 h。经二维凝胶电泳(2-DE)分离人腹膜间皮细胞总蛋白,每组 重复3次,PDQuest图象分析软件比较对照组和高糖组平均凝胶,求差异蛋白质。采用基质辅助 激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质。结果 获得12块经2-DE 分离的分离胶,每组3块。通过PDQuest图象分析软件发现24 h高糖组与对照组比较有27种蛋 白质表达有差异(P<0．05);48 h高糖组与对照组比较有50种蛋白质的表达有差异(P<0．05), 表达上调有22个蛋白质斑点,表达下调有55个蛋白质斑点;对其中23个差异蛋白质斑点进行 了肽质指纹图分析,鉴定出23种蛋白质,其中有2个点为同一蛋白质。这些蛋白质涉及到高糖 对HPMCs的细胞骨架、糖代谢、黏附、细胞因子、抗氧化剂、表面活性剂等物质的调节。结论 高 糖导致腹膜纤维化是多因素、多途径,要防止腹膜透析腹膜纤维化保护腹膜透析效能,最好避免 过多使用高糖透析液。

干细胞外泌体减轻高糖腹膜透析液诱导的腹膜炎症

目的探讨间充质干细胞外泌体是否可减轻高糖腹膜透析液诱导的腹膜炎。方法选取雄性6~8周龄C57BL/6小鼠24只,体重20~25 g,随机分成4组:正常对照组、生理盐水组、4.25%含糖腹透液组、4.25%含糖腹透液+外泌体组。正常对照组不采取任何干预措施;生理盐水组每次腹腔内注射0.9%生理盐水0.1 ml/g;4.25%含糖腹透液组每次腹腔注射4.25%含糖腹透液0.1 ml/g;4.25%含糖腹透液+外泌体组每次腹腔注射4.25%含糖腹透液0.1 ml/g,并在第28天和35天腹腔注射外泌体200μg/kg。以上各组小鼠腹腔注射0.9%生理盐水或4.25%含糖腹透液每日2次,连续6周。6周后,评估小鼠腹膜转运及超滤功能;取壁层腹膜行PAS染色,评估腹膜增厚程度;免疫组化检测MPO、巨噬细胞标志F4/80、CD68,评估炎症细胞浸润情况;实时定量RT-PCR检测IL-6、IL-1β、TNF-α,评估炎症因子表达水平;免疫组化检测GSL-1,评估微血管及毛细血管新生程度。结果4.25%含糖腹透液组腹膜厚度显著高于正常对照组和生理盐水组(P<0.01)。与4.25%含糖腹透液组相比,4.25%含糖腹透液+外泌体组的腹膜增厚程度、腹膜间皮中性粒细胞和巨噬细胞数量、腹膜间皮新生血管数量、以及腹膜炎症因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)的mRNA表达水平均明显下降(P<0.05)。与正常对照组、生理盐水组、4.25%含糖腹透液+外泌体组相比,4.25%含糖腹透液组小鼠的腹膜功能表现为葡萄糖平衡作用快、尿素氮清除力强,但超滤功能显著下降(P<0.05)。结论干细胞外泌体可有效减轻高糖腹膜透析液诱导的腹膜炎症水平,改善腹膜超滤功能。