Quantification of six bioactive compounds in Zhenqi Fuzheng preparation by high-performance liquid chromatography coupled with diode array detector and evaporative light scattering detector

A simple and accurate high-performance liquid chromatography（HPLC）coupled with diode array detector（DAD）and evaporative light scattering detector（ELSD）was established for the determination of six bioactive compounds in Zhenqi Fuzheng preparation（ZFP）.The monitoring wavelengths were 254,275 and 328 nm.Under the optimum conditions,good separation was achieved,and the assay was fully validated in respect of precision,repeatability and accuracy.The proposed method was successfully applied to quantify the six ingredients in 31 batches of ZFP samples and evaluate the variation by hierarchical cluster analysis（HCA）,which demonstrated significant variations on the content of these compounds in the samples from different manufacturers with different preparation procedures.The developed HPLC method can be used as a valid analytical method to evaluate the intrinsic quality of this preparation.

HPLC-ELSD同时测定腺梗豨莶草中6个二萜成分的含量

为了研究腺梗豨莶草中6个二萜成分(对映海松烯型二萜:奇任醇、Hythiemoside B和豨莶精醇;对映贝壳杉烷型二萜:对映-17,18-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸、对映-16β,17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸和对映-16α氢-贝壳杉烷-17,19-二羧酸)的含量,本试验建立了高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定二萜类化合物含量。样品粉碎过筛加甲醇和乙酸乙酯回流提取,蒸发减压除去溶剂,甲醇溶解,0.45μm滤膜滤过,取续滤液进行测定。色谱条件:色谱柱为Waters Symmetry Shield^(TM)RP18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.3%甲酸水溶液-乙腈(v/v),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min。蒸发光散射检测器漂移管温度为103℃,雾化气流速为3.0 L/min。应用该方法测定腺梗豨莶草样品不同部位中6个二萜类化合物的含量,同时比较叶、枝、茎中对映海松烯型二萜、对映贝壳杉型二萜和总二萜含量的差异。结果显示,6个二萜成分在其线性范围内线性关系良好(r≥0.9992);日内和日间精密度相对标准偏差(RSD)均小于3.5%;回收率介于96.5%~101.5%,RSD均小于2.3%;腺梗豨莶草不同部位(叶、枝、茎)的二萜类化合物含量差异较大。结果表明,本试验所建立的HPLC-ELSD方法简便、准确、重复性好,为腺梗豨莶草药材全面的质量评价和临床应用中最佳药用部位的选择提供了参考。

高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定红参中的精氨酸单糖苷(AF)及精氨酸双糖苷(AFG)含量

目的建立一种同时测定人参加工品中精氨酸单糖苷(AF)和精氨酸双糖苷(AFG)含量的方法。[方法]用PrevailTMC18column(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱进行检测。流动相A:色谱乙腈,流动相B:5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟醋酸溶液。色谱条件为[0%A(0 min);0%A(5 min);15%A(8 min);35%A(25 min)];流速0.8 mL/min;漂移管温度为115℃;气体流量3.2 L/min。[结果]AF和AFG的检测限分别为0.015和0.010 mg/mL;线性关系相关系数分别为,AF:0.9997,AFG:0.9999,表明线性关系良好。AF和AFG检测的精密度,重复性,稳定性以及回收率的相对标准偏差分别为0.43%&0.37%,0.43%&0.55%,0.43%&0.49%,0.45%&0.15%。AF和AFG检测的回收率分别为99.5%&100%,表明方法稳定。经检测,高丽红参,中国红参和生晒参中AF含量分别为0.74%,0.91%和1.14%,AFG含量分别为6.69%,5.12%和0.85%。[结论]这种方法成功用于高丽红参,中国红参及生晒参中AF及AFG的检测;且红参中AF和AFG含量明显高于生晒参。该方法测定结果可靠,缩短了测定时间,较少杂质干扰。但因为本研究考察氨基酸种类较少,当衍生物种类较多时,仍需进一步考察其分离度。

HPLC-ELSD法测定梅子提取物中糖和糖醇的含量

建立了一种高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时测定梅子提取物中果糖、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖的方法。分离采用Grace Prevail Carbohydrate ES色谱柱,柱温为30℃;流动相为乙腈-水,流速为1.00 mL/min;检测使用蒸发光散射检测器,漂移管温度为60℃,氮气流速为2.50 L/min。结果表明,果糖、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖水合物、麦芽三糖、麦芽四糖分别在34.69~2 220.00、16.22~1 038.00、38.66~2 474.00、24.53~1 570.00、22.91~1 466.00、6.09~390.00、14.69~940.00μg/mL范围内线性关系良好,精密度良好,重复性的相对标准偏差(RSD)为1.00%~4.09%,各目标物的回收率为85.5%~110.1%,精密度为0.3%~4.6%(n=6)。本方法在30 min内实现了糖和糖醇的分离,灵敏度和重复性检测较好,有效避免了溶剂及温度的影响,测量结果较准确且操作方便,可用于批量检测梅子提取物中糖和糖醇的含量。

HPLC-ELSD法同时测定食品中的10种糖和糖醇

建立高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)同时测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖、赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇的方法。方法采用Grace Previl Carbohydrate ES色谱柱,柱温30℃;乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min;蒸发光散射检测器,飘移管温度95℃,氮气流量2.5L/min。结果表明:5种糖和5种糖醇均在线性0.2～20mg/mL范围内,线性良好,精密度RSD小于5%,回收率91.53%～105.2%。本方法在30min内完成了10种糖和糖醇的分离,灵敏度高,重现性好,可以用于无糖食品中糖和糖醇含量的测定。

HPLC-ELSD法同时测定连翘叶中齐墩果酸和熊果酸

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(high performance liquid chromatography-evaporative lightscattering detector,HPLC-ELSD)法同时测定连翘叶中齐墩果酸和熊果酸。方法:色谱柱:Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温25℃,流动相:甲醇-0.4%冰醋酸溶液(93:7,V/V),流速0.4mL/min;蒸发光散射检测器检测条件:漂移管温度80℃,气体压力25psi。结果:齐墩果酸在0.107～2.136μg范围内线性关系良好(r=0.9991),熊果酸在0.179～3.584μg范围内线性关系良好(r=0.9993);齐墩果酸和熊果酸的回收率分别为98.67%和9 8.5 6%。结论:此方法简便、准确,重现性良好,为评价连翘叶的质量提供可靠的分析方法。

HPLC-ELSD法测定生物柴油中的游离甘油

采用液液萃取及高效液相色谱-蒸发光散射检测技术,建立了生物柴油中游离甘油含量的测定方法。待测生物柴油经乙腈-水(75∶25)抽提并离心分离后,取部分下层水相进行分析。优化的色谱条件为:色谱柱Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(75∶25);流速1.0 mL/min;柱温35℃;进样量30μL;ELSD载气压力360 kPa,漂移管温度28℃。结果表明,在优化条件下,生物柴油中游离甘油的含量在3.73～302.0 mg/kg范围内呈良好线性,相关系数r=0.999 8,检出限(S/N≥3)为2.1 mg/kg,其加标回收率为98%～101%,相对标准偏差(RSD)为0.59%～1.8%。方法灵敏、准确且重复性好,可为生物柴油中游离甘油含量的测定提供一种快速高效的方法。

HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量

应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）对不同种类鸡蛋中胆固醇的含量进行测定。采用C18色谱柱为固定相，以甲醇为流动相，流速为1mL·min^-1柱温为25℃；蒸发光散射检测器的氮气流速为2L·min^-1漂移管温度为85℃。结果表明，胆固醇进样量在4．008-40．080μg范围内，其对数与峰面积的对数呈良好的线性关系，相关系数R=0．9991，低、中、高三个浓度回收率为95．4％～99．1％。该方法操作简便、快速，精密度好，结果准确可靠。

HPLC-ELSD法测定去痛片中氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁的含量

目的:建立 HPLC-ELSD 法测定去痛片中4种成分的含量。方法:采用 Diamonsil^(TM) C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),0.1%三氟醋酸(TFA)溶液和甲醇为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为室温。ELSD 为检测器,漂移管温度为55℃,雾化气体为空气,气压为315 Pa。结果:氨基比林在0.7520～15.04μg范围内线性关系良好(r=0.9987),平均回收率为100.2%,RSD 为0.87%;咖啡因在0.2546～3.819μg范围内线性关系良好(r=0.9969),平均回收率为98.53%,RSD为0.77%;苯巴比妥在0.0757～1.514μg范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为101.6%,RSD 为0.67%;非那西丁在0.7500～15.00μg范围内线性关系良好(r=0.9963),平均回收率为101.1%,RSD 为0.47%。结论:本方法较标准方法简便、可靠,适合去痛片的含量控制。

HPLC-ELSD法测定益气补血片中黄芪甲苷的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定益气补血片中黄芪甲苷含量,用于指导该药的质量控制。方法:采用Sepax BR-C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水(35∶65)为流动相;流速1.0 mL•min^-1;蒸发光散射检测器;柱温30℃。结果:黄芪甲苷质量浓度分别在1.02-10.27μg•mL^-1(r=0.999)范围内线性关系良好,方法的平均回收率(n=6)分别为96.99%(RSD=2.00%);3批益气补血片中黄芪甲苷含量为0.101 mg/片-0.157 mg/片。同时采用原标准中的薄层扫描法进行测定,两种方法结果基本一致。结论:建立的黄芪甲苷含量测定方法可用于益气补血片的质量控制。

HPLC-ELSD测定豆科植物中D-松醇的含量

[目的]比较研究豆科植物中的D-松醇含量。[方法]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定黄皮黄豆、绿皮黄豆、大豌豆、黑豆、红豆、豆角、荷兰豆、豌豆、毛豆、刀豆的D-松醇含量。[结果]D-松醇含量测定的标准曲线回归方程为:Y=1.421 1X+6.276 4,r=0.826 5,其进样质量线性范围为0.377～1.844μg。青豌豆荚的D-松醇含量为0.084%,青豌豆子实的D-松醇含量为0.339%,青荷兰豆子的D-松醇含量为0.190%,青荷兰豆子实的D-松醇含量为0.342%,青毛豆荚的D-松醇含量为0.760%,青毛豆籽实的D-松醇含量为1.135%,青长豆角的D-松醇含量为0.203%,荷兰豆的D-松醇含量为0.342%,黄皮大豆的D-松醇含量为0.198%,绿皮大豆的D-松醇含量为0.229%,黑皮大豆的D-松醇含量为0.319%,赤豆、豌豆和刀豆中未检出D-松醇。[结论]D-松醇在豆科植物中广泛存在,不同生长期其含量差别较大。

HPLC-ELSD法测定食品中异麦芽酮糖

建立了一种方便、准确、灵敏的方法以测定食品中异麦芽酮糖含量的高效液相色谱蒸发光散射检测器方法。使用Hypersil APS-2（NH2）（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱分离,柱温40℃;以乙腈：水=88：12为流动相,流速1 m L/min;ELSD为检测器,雾化器温度50℃;蒸发器80℃;载气（氮气）流速1.6 L/min。结果：检出限为30μg/m L;在80~1200μg/m L内工作曲线线性良好,相关系数r2=0.9991,回收率85.6%~98.1%,精密度2.78%~2.92%。结果表明此方法前处理简单,易于操作,检测限低,在线性范围内线性良好,相关系数高,测量结果精确度高,是检测食品中异麦芽酮糖的有效方法。

HPLC-ELSD法检测无糖型饮料中D-阿洛酮糖

建立一种用高效液相色谱-蒸发光检测法测定无糖型饮料中D-阿洛酮糖的方法.样品经20%乙腈提取后,由HLB固相萃取小柱进行净化和富集,过滤膜后上机检测.检测结果表明,以乙腈:水(30:70,体积比)作为流动相,用蒸发光检测器检测,外标法峰面积定量,D-阿洛酮糖在0.01 g/100 mL^0.80 g/100 mL浓度范围内线性良好,相关系数r2为0.9994,检出限在0.002 g/100 mL,定量限为0.006 g/100 mL,加标回收率达到91.5%~94.2%.该方法适用于无糖型饮料中D-阿洛酮糖的定量检测.

HPLC-ELSD法同时测定鲜枣果实中不同种类可溶性糖含量

采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器建立鲜枣果实中不同种类可溶性糖含量的测定方法。结果表明:适宜分离条件为Waters XBridge^(TM) Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A为0.2%三乙胺的超纯水溶液,流动相B为0.2%三乙胺-乙腈溶液,两相体积比为24∶76,柱温30℃,雾化管温度60℃,漂移管温度60℃,气流量1.6 L/min,增益值1.0。在该条件下鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖均能得到较好分离(分离度≥1.5),在0.099~1.040 ng/μL范围内呈良好线性关系,8种糖的加标回收率在93.1%~111.2%之间,相对标准偏差均小于5%;检出限(R_(SN)=3)在0.008~0.03 ng/μL之间。该方法具有操作简便、分离效果好、分离时间短等特点,可用于鲜枣果实中不同种类可溶性糖含量的测定,与传统方法相比较更加灵敏准确,有利于品质鉴定。

基于HPLC-ELSD法的银柴胡中甾醇类成分含量测定

目的建立银柴胡药材中甾醇类成分α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量测定方法。方法采用高效液相蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),SHIMADZU Shim-pack GIST C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(98∶2);流速:1 mL·min^(-1);柱温:40℃;检测器漂移管温度:70℃;喷雾器温度:30℃;载气流速:1.6 L·min^(-1);进样量:50μL。结果在该色谱条件下,α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇分离完全,质量浓度分别在10.77~43.09、8.70~81.20μg·mL-1范围内线性关系良好;α-菠甾醇的检测限、定量限分别为0.1075、0.4300μg,平均回收率(n=6)为104.04%,RSD值为2.56%;豆甾-7-烯醇的检测限、定量限分别为0.0174、0.0870μg,平均回收率(n=6)为96.50%,RSD值为2.12%;二者精密度、重复性、稳定性实验的RSD值均小于3%。结论建立的含量测定方法简便、灵敏、重复性好,能够实现对银柴胡药材中甾醇类成分的质量控制。

HPLC-ELSD法测定长白山笃斯越桔果实中可溶性糖含量

目的:为了更好的分析长白山笃斯越桔的食用价值,为生产加工及种质资源保存利用提供理论依据。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(High performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)对2个不同居群共40份长白山笃斯越桔果实中可溶性糖含量进行测定比较。高效液相色谱条件为CAPCELL PAK NH2 UG80 S5(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-水(75∶25,v∶v);流速1.0 mL·min^-1;柱温35℃;蒸发光散射检测器,漂移管温度80℃;载体为高纯N2,N2流速为1.0 L·min^-1,增益值为1;进样量5μL。结果:在选定的色谱条件下,可溶性糖分离度良好。标准曲线相关系数均在0.9994以上,回收率在102.83%~106.29%之间。长白山笃斯越桔果实主要的糖分是果糖和葡萄糖,其中果糖含量最高,海拔高的东方红林场总糖及甜度值显著(P<0.05)高于海拔低的兰家林场,DFH-11是总糖和甜度值最高的样本。结论:该方法具有操作快速、重复性好等特点,可以准确测定笃斯越桔果实中糖分类型及含量;可对笃斯越桔果实加工利用,并作为育种工作首选材料。

HPLC-ELSD法测定苍耳子及其制剂中羧基苍术苷和苍术苷含量

目的：建立苍耳子及其制剂（辛芩片和辛芩颗粒）中毒性成分羧基苍术苷和苍术苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）定量测定方法。方法：采用Kromasil 100-5C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈（A）-10 mmol/L乙酸铵溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0-30 min,12%A→20%A;30-31 min,20%A→12%A;31-35 min,12%A）,柱温35℃,体积流量1.0 m L/min,蒸发光散射检测器检测（漂移管温度95℃,N2载气流速1.6 L/min）。结果：羧基苍术苷在0.681-4.086μg线性关系良好,线性回归方程为Y=1.4973X＋3.9461（r=0.9996）,平均回收率96.4%（n=6,RSD=1.2%）;苍术苷在0.731-4.383μg线性关系良好,线性回归方程为Y=1.4619X＋4.0630（r=0.9991）,平均回收率97.7%（n=6,RSD=0.9%）。结论：HPLC-ELSD法定量测定羧基苍术苷和苍术苷方法简便,重复性良好,可用于苍耳子及其制剂的质量控制。

HPLC-ELSD检测灵芝多糖肽的方法

目的建立高效液相色谱—蒸发光检测器(HPLC-ELSD)检测灵芝多糖肽方法。方法采用色谱柱TSK G4000PW柱(300mm×7.5mm,17μm),流动相为甲醇:水(20∶80),流速为1mL·min^(-1);柱温35℃;蒸发光散射检测器条件:漂移管温度为55℃;气体压力为45psi。结果灵芝多糖肽在100~500μg·mL^(-1)范围内,以GL-PPS对照品浓度的对数(X)为横坐标,峰面积对数(Y)为纵坐标绘制标准曲线,得Log-Log线性回归方程:Y=1.77X+1.99,R=0.9966,检出限为0.886μg,平均回收率为97.38%,RSD为1.65%(n=6)。结论经方法学考察结果,该方法简便、快速,能排除淀粉、糊精等辅料的干扰,为灵芝提取物及其产品中多糖肽质量控制提供了科学依据。

HPLC-ELSD法测定L-抗坏血酸棕榈酸酯

建立高效液相色谱—蒸发光散射检测法检测L-抗坏血酸棕榈酸酯的方法。L-抗坏血酸棕榈酸酯样品用甲醇溶解,0.22μm微滤膜过滤,仪器条件:用C_(18)反相色谱柱进行分离,流动相:甲醇和水(含0.01%甲酸),流速:0.8mL/min,漂移管温度60℃,氮气压力:25psi,梯度洗脱。实验结果表明L-抗坏血酸棕榈酸酯峰面积的常用对数与其进样浓度的常用对数呈现良好线性关系(R^2=0.9972),加标回收率在97.23%~102.05%范围内,RSD<5%。该方法不需对样品进行衍生化处理,能准确、快速定量L-抗坏血酸棕榈酸酯含量。

HPLC-ELSD测定酚醛酰胺固化剂中致敏物残留

该文建立一种简单、有效测定酚醛酰胺固化剂中残留的两种致敏物间苯二甲胺(MXDA)和三乙烯四胺(TETA)的分析方法。该方法采用Primesep 200色谱柱(150 mm×4.6 mm×5μm),用配有低温型蒸发光散射检测器(ELSD)的高效液相色谱测定样品;流动相采用梯度洗脱,流动相A为乙腈,流动相B为纯水溶液,流动相C为0.5%(质量分数)的三氟乙酸(TFA)水溶液。最优的梯度洗脱条件:0~10min,A∶B∶C(体积分数,下同)=20∶48∶32~20∶24∶56;10~12min,A∶B∶C=20∶24∶56~100∶0∶0;12~25 min,保持在A∶B∶C=100∶0∶0。在上述洗脱条件下,酸的浓度不断变化,MXDA和TETA得到了很好地分离,线性相关性良好,相对标准偏差为0.55%~2.65%,回收率为98.3%~101.7%,结果较为理想。实际样品检测证明所建立的方法在产品的分析检测中有良好的应用性。