不同类型临床样本来源肺炎克雷伯菌耐药性和毒力分析

目的分析不同类型临床样本来源肺炎克雷伯菌(KP)的耐药性、生物膜形成能力、毒力基因和耐药基因的携带特点,及其相互间的联系,为控制医院内感染提供参考。方法收集2021年11月—2022年9月新乡市3家教学医院分离自痰液、尿液(中段尿)和血液样本的148株KP。采用全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定和药物敏感性分析,采用聚合酶链反应(PCR)检测菌株荚膜血清型、毒力基因和耐药基因,采用拉丝试验检测菌株高黏液表型,采用结晶紫染色法检测菌株生物膜的形成情况。结果148株KP中,有55株(37.2%)分离自痰液样本,40株(27.0%)分离自血液样本,53株(35.8%)分离自尿液样本。尿液样本的强生物膜形成菌株分离率(54.3%)高于痰液样本(27.5%)和血液样本(29.7%),差异有统计学意义(P=0.023);耐药率(69.8%)高于分离自痰液样本的菌株(49.1%)(P=0.028)。携带率(85.8%)最高的耐药基因是blaSHV-1。分离自痰液样本的KP毒力基因iroN、rmpA检出率高于尿液样本(P=0.004)和血液样本(P=0.012);wabG、fimH和mrkD基因携带率均>93.2%。携带iroN、iucA、rmpA基因和K1、K2血清型的KP对抗菌药物较敏感,且易检出高黏液表型(P<0.05)。高黏液表型KP菌株同时携带4种及以上毒力基因的构成比高于非高黏液表型KP菌株(P<0.001),且对抗菌药物更敏感(P<0.05)。74.5%的痰液样本来源KP同时携带4种及以上毒力基因,高于血液样本来源(52.5%)和尿液样本来源(49.1%)的KP(P=0.016);形成生物膜的KP菌株wabG、mrkD、uge和fimH基因携带率更高(P<0.05)。结论尿液样本来源的KP耐药率较高,且易形成强生物膜。某些特定毒力基因普遍存在于KP临床分离株中。痰液样本来源的KP毒力基因构成复杂,iroN、rmpA基因与呼吸系统KP感染有一定关系。iroN、iucA、rmpA基因和K1、K2血清型与KP高黏液表型有关,且携带此类基因和血清型的KP菌株对抗菌药物更敏感。

侵袭性高黏液型肺炎克雷伯菌感染的临床和分子特征研究

目的分析引起侵袭性高黏液型肺炎克雷伯菌(HMVKP)感染患者的临床和分子特征,为侵袭性高黏液型肺炎克雷伯菌感染的精准诊断和临床抗感染治疗提供依据。方法分析临床分离的侵袭性高黏液型肺炎克雷伯菌感染患者临床资料,利用PCR方法对菌株荚膜血清型、毒力基因及耐药基因检测进行分子特征研究。结果96株侵袭性肺炎克雷伯菌感染的菌株中64株为HMVKP,脓液标本在HMVKP组标本中的占比(32.8%)最大;在HMVKP组中共检出4例产ESBL菌株及2株耐碳青霉烯类药物菌株;HMVKP菌株的荚膜血清型以K1(40.6%)和K2(29.7%)为主,毒力基因以peg344、iucA和iroB携带率最高。HMVKP与N-HMVKP菌株的7个毒力基因(peg344、rmpA、rmpA2、magA、iucA、iroB与kfu)差异均有统计学意义(P<0.05)。结论K1和K2是本地区侵袭性感染HMVKP最常见的荚膜血清型,peg344、iucA、iroB、rmpA是HMVKP主要的毒力基因,现在已出现合并多重耐药尤其是耐碳青霉烯类抗生素的HMVKP菌株,应重视。

高黏液型肺炎克雷伯菌毒力基因及临床特征分析

目的探讨高黏液型与非高黏肺炎克雷伯菌的毒力基因及临床特征的差异性。方法选择2018年7月至2022年5月南京鼓楼医院集团仪征医院门诊和住院患者临床分离的154株肺炎克雷伯菌为研究对象。检测154株肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物的敏感性;采用拉丝试验检测肺炎克雷伯菌的黏性,比较高黏液型和非高黏液型肺炎克雷伯菌感染者急性期白细胞计数、中性粒细胞百分比、超敏C反应蛋白、体温、感染部位和科室分布差异;用PCR检测菌株毒力基因rmpA、rmpA2、magA、aerobactin的携带情况。结果除氨苄西林及妥布霉素外,高黏液型菌株对常用抗菌药物的耐药率均明显低于非高黏液型(P<0.05);高黏液型菌株和非高黏液型菌株之间产超广谱β-内酰胺酶菌株检出率差异无统计学意义(P>0.05),高黏液型菌株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)检出率明显低于非高黏液型(P<0.05)。高黏液型菌株和非高黏液型菌株感染者性别、年龄、白细胞计数、超敏C反应蛋白和科室分布情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但高黏液型菌株感染者中体温>37.2℃和中性粒细胞百分比>70%的比例高于非高黏液型菌株(P<0.05),高黏液型菌株在呼吸道感染患者的检出构成比高于非高黏液型菌株(P<0.05),高黏液型菌株在泌尿系统感染患者的检出构成比却低于非高黏液型菌株(P<0.05)。高黏液型菌株毒力基因rmpA、rmpA2、aerobactin的携带率均明显高于非高黏液型菌株(P<0.05),而两种菌株的magA基因携带率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论高黏液型肺炎克雷伯菌的耐药率总体低于非高黏液型,但并非所有菌株均表达毒力基因且使患者具有感染指征,临床在判断肺炎克雷伯菌株毒力时应结合临床特征和毒力基因。

20株中国医学细菌保藏管理中心标准肺炎克雷伯菌分子生物学特征分析

目的对中国医学细菌保藏管理中心收集保藏的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)进行分子生物学特征分析。方法对20株保藏KP菌株采用16S rRNA扩增及测序和质谱技术进行菌种鉴定验证;拉丝试验确定黏液表型;PCR筛查6种常见高毒力荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54和K57);采用多位点序列分型(MLST)对菌株进行分子分型。结果20株菌种均扩增出预期大小的16S rRNA基因片段,与KP模式菌株参考序列的相似性均>99%;质谱技术检测均为KP,其中有4株鉴定到亚种;拉丝试验阳性率30%(6/20);共检出K2型3株(15%)、K5型4株(20%)、K54型1株(5%)、K57型4株(20%)和未分型8株;20株菌种分为10个ST型。结论该研究完善了KP菌株的分子生物学方面的质控指标。

肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床特点及感染菌的分子特征

目的研究肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床情况及微生物特点,有助于为临床快速识别,有效控制提供依据。方法收集衢州市人民医院2013年1月至2019年12月符合肝脓肿诊断,由肺炎克雷伯菌引起的完整病例,分析临床特征,微量肉汤稀释法进行药敏试验,PCR方法检测血清荚膜型和毒力基因。结果肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于男性,37.83%(14/37)患者有糖尿病史,37.83%(14/37)患者伴胆囊结石伴胆囊炎。脓肿以单发为主,单发脓肿以肝右叶为主,占74.28%(26/35)。40.54%(15/37)患者发生转移性感染,32.43%(12/37)患者发生肺部感染。实验室检查:WBC增高(13.94±6.37)×109/L,CRP显著增高(148.85±56.75)mg/L,对多种抗生素敏感。78.37%(29/37)株肺炎克雷伯菌产高黏液表型。血清荚膜型以K1、K2型为主,携带多种毒力基因,毒力基因检出情况:rmpA+为78.37%(29/37),iroN+为72.97%(27/37),kfu+为64.86%(24/37)。结论肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于有肝胆疾病或糖尿病的患者,以单发脓肿为主,多数患者可以发生转移,严重者甚至引起失明、中枢神经系统感染,多以携带多种毒力基因、高黏液表型、血清荚膜型以K1、K2型为主的肺炎克雷伯菌引起。及时了解本地区的菌株分子特点有助于临床医生早期诊断和治疗。

161例肺炎克雷伯菌肝脓肿的回顾性研究

目的探讨肺炎克雷伯菌肝脓肿的人口学和临床特征。方法回顾性研究泉州市第一医院2015年1月—2019年12月收治的383例细菌性肝脓肿的医学资料。依据细菌学结果展开临床分组,分别为肺炎克雷伯菌组(KP,n=161)和非肺炎克雷伯菌组(nKP,n=222)。对人口学和临床特征、实验室化验、影像学检查进行评估。结果161例肺炎克雷伯菌肝脓肿患者中以男性为主,平均年龄(57.43±14.20)岁,中老年人多见;常见基础疾病为糖尿病97例,脂肪肝54例;与nKP组相比,糖尿病发生率高,差异有统计学意义(χ^(2)=37.809,P<0.001)。KP组并发72例肺炎,51例胸腔积液,9例胆道感染,2例尿路感染,11例休克,8例多脏器损伤;与nKP组相比,胆道感染发生率低,差异有统计学意义(χ^(2)=7.602,P=0.006)。KP组并发9例肝外迁移感染,与nKP组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎克雷伯菌是细菌性肝脓肿主要的致病菌,常见于糖尿病患者,感染性迁徙发生率高,预后较好。

血流感染肺炎克雷伯菌毒力基因分布及与CRISPR-CAS系统相关性研究

目的分析该院血流感染阳性肺炎克雷伯菌的常见荚膜血清型和毒力基因分布特征,探讨毒力基因与成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关序列(CRISPR-CAS)系统的相关性。方法收集Bac T/ALERT 3D全自动培养仪报告阳性的血培养瓶并经鉴定为肺炎克雷伯菌61株,运用纸片扩散法和Vitek-compact2仪器法检测菌株对临床常用抗生素的敏感性,用拉丝实验筛选高黏液型肺炎克雷伯菌,聚合酶链式反应(PCR)检测6种常见荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)、7种毒力相关基因(rmpA、aerobactin、alls、Kfu、wcaG、magA、fimH)及3种CRISPR-CAS系统基因(CRISPR-1、CRISPR-2、CAS1)。结果荚膜血清型以K1、K2型为主,检出率分别是19.7%、13.1%。K5、K20、K57各检出1例,未检出K54型。毒力基因rmpA、aerobactin、alls、Kfu、wcaG、magA、fimH检出率分别是32.8%、23.0%、9.8%、31.1%、19.7%、19.7%、98.4%。高黏液表型筛选出14株。CRISPR-CAS系统阳性检出11株,检出率为18%,与CRISPR-CAS系统阴性菌株相比,其毒力基因携带率高,经χ~2检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血流感染肺炎克雷伯菌荚膜血清型以K1、K2为主,毒力基因主要存在于表型为高黏液型的菌株,CRISPR-CAS系统阳性菌株毒力基因携带率高。

2017-2019年我院高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因的分子流行特征

目的:探讨广州暨南大学附属第一医院2017至2019年高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因的分子流行特征,为高毒力肺炎克雷伯菌所致临床感染的防治提供实验室依据.方法:通过拉丝试验初步筛选出高粘液肺炎克雷伯菌(hmKP),利用PCR技术对所有hmKP进行黏液表型调节基因A(RmpA)和气杆菌素(aerobactin)基因扩增,两毒力基因均表达则即判定该菌株为高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),再采用PCR技术对hvKP中常见的血清荚膜型K和多个毒力基因进行特异性扩增.结果:2017年9月至2019年9月间我院通过拉丝试验初筛出hmKP共51株,同时扩增出两毒力基因(RmpA,aerobactin)即判定为hvKP者有43株,其中25株分离自侵袭性肺炎克雷伯菌感染,18株分离自非侵袭性肺炎克雷伯菌感染.K1、K2型为其主要的血清荚膜分型,分别占41.86%(18/43)、23.26%(10/43);毒力基因检出率排名前4的分别是:ycfM 100.00%(43/43),entB 100.00%(43/43),ureA 93.02%(40/43),wabG 93.02%(40/43).结论:2017至2019年我院分离的高毒力肺炎克雷伯菌血清荚膜型以K1、K2为主,毒力基因检出率较高的是ycfM、entB、ureA和wabG毒力基因.

高毒力肺炎克雷伯菌耐药机制研究进展

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)是院内感染的常见革兰阴性致病菌;20世纪80年代以来,KP的一种新型变异株-高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)不断产生和蔓延,常感染健康宿主并引起严重的侵袭性感染;早期研究认为高毒力与耐药性不会在同一KP出现,但近期已有hv KP相关菌株耐药甚至多药耐药的报道,耐药性和高毒力的结合可能会成为下一个临床即将面临的重要挑战。现就hvKP耐药报道及相关机制研究进行综述和讨论,希望能为预防和控制耐药hvKP在我国的流行和发展以及为进一步对耐药机制进行深入研究提供参考。

高毒力肺炎克雷伯菌的毒力机制研究进展

肺炎克雷伯菌是一种常见的革兰阴性杆菌,是第二大容易引起院内感染的细菌。高毒力肺炎克雷伯菌(HvKP)又称高黏性肺炎克雷伯,是从传统肺炎克雷伯菌中分离出来的具有高毒力、高黏性的侵袭性细菌,其表现出的高毒力会引起健康人发生侵袭性感染,严重者会危及生命。目前,临床实验室主要通过拉丝实验与传统的肺炎克雷伯菌相鉴别。研究发现,Hv KP的高黏性与其K1、K2、K57等血清型,编码荚膜相关基因及铁载体相关。对HvKP的毒力增强因素以及该菌引起的肝脓肿做简要综述。

湖北省肺炎克雷伯菌耐药性及高毒力荚膜血清分型研究

目的 探讨湖北省肺炎克雷伯菌(KP)高毒力荚膜血清分型及碳青霉烯酶耐药基因携带情况。方法 收集湖北省2019-2020年58家医院临床分离的疑似KP菌株,以基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪初筛,全自动生化鉴定仪复核鉴定。采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,多重PCR进行高毒力荚膜血清分型,PCR扩增法检测碳青霉烯酶耐药基因。结果 收集的326株疑似菌株均为KP,标本来源于体液(血液、胸腔积液、脑脊液、腹水)及其他部位的KP对三代头孢菌素、碳青霉烯类抗菌药物的药敏试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。对碳青霉烯类抗菌药物耐药的KP检出率高达19.02%(62/326)。碳青霉烯酶耐药基因KPC检出率为10.74%(35/326),NDM为1.23%(4/326),其中2株同时携带KPC和NDM基因。高毒力荚膜血清分型以K2型为主,检出率为11.04%(36/326),其他检出率依次为K57型的5.21%(17/326)、K54型的1.84%(6/326),未检出K1型。有7株高毒力荚膜型KP同时携带KPC耐药基因。结论 湖北省KP对多种抗菌药物耐药且耐药率呈上升趋势,并出现了携带KPC耐药基因的高毒力KP,在临床诊疗中必须加强对耐碳青霉烯类KP的监测,结合细菌耐药性合理选择抗菌药物。

高黏液型肺炎克雷伯菌药敏分析和荚膜血清分型

目的探讨高黏液型肺炎克雷伯菌的药物敏感性及其荚膜血清分型和临床特征,为医院制订感染控制措施提供依据。方法对该院2018年1-6月送检的细菌培养阳性标本进行鉴定和药敏试验,收集检出的肺炎克雷伯菌,拉丝试验筛选出有黏液丝形成,并且长度大于5 mm的菌株为高黏液型,分析高黏液型和非黏液型肺炎克雷伯菌的药敏结果差异。通过PCR方法,分析高黏液型肺炎克雷伯菌的高毒力荚膜血清分型,同时查阅相应患者的病历信息,对患者的临床特征进行分析。结果 170株肺炎克雷伯菌中,拉丝试验阳性菌占36.5%。高黏液型肺炎克雷伯菌药物敏感率高于非黏液型肺炎克雷伯菌(P<0.05);非黏液型肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶的阳性率(38.9%)高于高黏液型肺炎克雷伯菌(11.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。高黏液型高毒力荚膜血清型菌株阳性率为58.1%,其中K1、K2、K5、K20、K54、K57型分别占 19.4 %、 22.2 %、 8.3 %、13.9%、8.3%、27.8%。痰液标本分离阳性率为69.4%,伤口分泌物为11.1%,腹水为 8.3 %,全血标本为2.8%,尿液为8.3%。痰液标本所分离的阳性菌株中,K57型所占比例最高,腹水标本和全血标本均为K1型所占比例最高,尿液标本为K5型所占比例最高。高黏液型肺炎克雷伯菌主要分布在重症监护病房(38.9 %),基础疾病以肺部疾病为主,占69.4%。结论高黏液型肺炎克雷伯菌存在于多种临床标本中,K1、K2、K57血清型检出率较高,应该加强监控,制订更严格的感染控制措施才能避免耐药性毒力菌株的出现和播散。

某院ST11型耐碳青霉烯酶高毒力肺炎克雷伯菌分子流行病学研究

目的对连云港市某院ST11型耐碳青霉烯酶高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行分子流行病学调查。方法收集连云港市中医院2017年1月至2019年6月临床分离的26株耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP),采用改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)、EDTA-改良碳青霉烯酶灭活试验(eCIM)及PCR法分别检测菌株碳青霉烯酶耐药表型和碳青霉烯酶耐药基因。采用拉丝实验检测实验菌株的黏液表型。采用3种多重PCR进行检测,第1体系对实验菌株进行ST分型,第2体系检测最强毒力的荚膜血清型wzyK1、wzyK2,以及K位点wzyKL47、wzyKL64,第3体系检测rmpA、rmpA2、iroN、intA毒力相关基因,并采用大蜡螟感染模型检测毒力表型,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析。结果26株CRKP菌株,携带以肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)为主的耐药基因菌株有22株,结果与相对应的22株菌株的mCIM结果一致。ST分型以ST11型为主,占73.1%(19/26),wzyKL47、wzyKL64阳性率分别为15.8%(3/19)、84.2%(16/19)。检出8株携带毒力相关基因且具有毒力表型的ST11型CR-HVKP以KL64为主,康复科检出率最高。采用PFGE可分为3群,带型相似度高于85%的有2株。结论连云港市中医院检出ST11型CR-HVKP 8株,可能存在克隆株的散在传播,需加强对康复科院内感染的防控。

高黏液性肺炎克雷伯菌的临床特征及分子分型

目的 分析高黏液性肺炎克雷伯菌(hvKP)的临床特征及毒力基因携带情况,方法 对临床分离的肺炎克雷伯菌(KP),通过黏液拉丝试验筛选出hvKP,采用PCR方法检测hvKP的毒力基因和荚膜血清型,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对hvKP进行分子分型。结果 在631株KP中,共分离hvKP 56株,分离率为8.9%,主要来自于急诊病房、肝胆外科病房;穿刺液、血液和脓液为hvKP的主要标本来源;hvKP的荚膜血清型以K1和K2为主,二者占60.7%,主要携带aerobactin和rmpA型毒力基因;MLST分型以ST23和ST86为主;hvKP对临床常用抗菌药物具有较高的敏感性,其耐药率明显低于cKP。结论 hvKP的耐药率低于cKP,其荚膜血清型以K1、K2型为主,并携带多种毒力基因,值得关注。

高毒力肺炎克雷伯杆菌相关研究及相关肝脓肿治疗策略

高毒力肺炎克雷伯杆菌致肝脓肿的案例越来越常见。高毒力肺炎克雷伯杆菌基于其高毒力性和易发转移性感染的特征,使临床上在应对这种病菌时尤为棘手。本文旨在高毒力肺炎克雷伯杆菌的相关研究和治疗策略加以综述,为临床应对此类感染提供一定启示。

广东地区高毒力肺炎克雷伯菌的微生物学特征

目的:比较分析广东地区高毒力肺炎克雷伯菌(hvkp)和典型肺炎克雷伯菌(ckp)的微生物学特征。方法:2016年11月到2018年4月收集广东地区的肺炎克雷伯菌。进行拉丝试验、肉汤稀释法及血清型、毒力基因等的检测,进一步做蜡螟实验。分析肺炎克雷伯菌微生物学特征。结果:hvkp的阳性率为33.0%(64/194),hvkp对抗菌药物的耐药率低于ckp(P<0.05)。hvkp的ST型以ST23和ST65为主,ckp的ST型较多样。血清型K2中kpn基因的阳性率高于K1(P<0.05)。kpn阳性的菌株中hvkp的LD50小于ckp(5.3±0.7(log10cfu/ml)vs 5.7±0.7(log10cfu/ml),P=0.016)。结论:hvkp和ckp的MLST分型分布呈现不同的特点,且需进一步关注毒力基因kpn。

湖南省某医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌分子流行病学特征分析

分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)分子流行病学及探讨blaKPC和blaNDM水平传播机制,为预防和治疗CRKP提供参考依据。回顾性分析2022年1—12月湖南中医药大学第一附属医院临床非重复分离的CRKP,共计 49株。采用改良碳青霉烯灭活实验(mCIM)、EDTA-碳青霉烯灭活实验(eCIM)进行表型筛选;聚合酶链式反应(PCR)检测CRKP碳青霉烯耐药基因、β内酰胺酶耐药基因和毒力基因;多位点序列分析检测CRKP菌株的同源性。通过接合试验,推断blaKPC和blaNDM两种碳青霉烯耐药基因的水平传播机制。结果显示,本研究共收集到CRKP 49株,有44株携带blaKPC,8株携带blaNDM,其中同时携带blaKPC和blaNDM两种耐药基因的CRKP(blaKPC+blaNDM-CRKP)有3株。28株CRKP携带毒力基因(28/49,57.2%),1株CRKP拉丝试验阳性,且同时携带Aerobactin和rmpA两种毒力基因。共检出5种ST型,以ST11为主(41/49,83.7%)。3株blaKPC-CRKP均接合成功,3株blaNDM-CRKP仅1株接合成功,接合子菌株对亚胺培南以及头孢菌素类抗菌药物的敏感性均显著降低。综上,本研究CRKP耐药机制主要以产KPC酶为主,且同时携带多种β-内酰酶耐药基因,并有高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(high virulence carbapenem-resistantKlebsiella pneumoniae,hv-CRKP)和blaKPC+blaNDM-CRKP的局部流行。blaKPC和blaNDM可通过质粒水平传播,不同菌株的水平传播效率存在差异。

生物标志物联合大蜡螟感染模型在鉴别临床高毒力肺炎克雷伯菌中的应用

目的探讨生物标志物检测联合大蜡螟感染模型准确鉴别临床高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)的应用价值。方法非重复收集2020年1月至2021年12月徐州医科大学附属医院分离自重症监护室患者的肺炎克雷伯菌,经拉丝实验和毒力基因检测鉴定出生物标志物阳性的肺炎克雷伯菌,并进行荚膜血清分型和多位点序列分型。使用标准菌株ATCC700603、ATCC43816建立大蜡螟感染模型,将临床分离的肺炎克雷伯菌分别制作4个不同浓度的菌液进行大蜡螟感染试验,每12小时记录死亡情况,绘制生存曲线并计算72 h 50%致死量(LD_(50))。结果共收集15株hvKP,检出3种血清型,分别为K1 ST23型(13.3%,2/15)、K64 ST11型(60.0%,9/15)、K112 ST15型(26.7%,4/15)。K1和K64型的菌株均含有rmpA、rmpA2、iucA和iroN 4个毒力基因,而K112型的4株均只含有rmpA2和iucA 2个毒力基因。K64 ST11型和K112 ST15型菌株均对碳青霉烯类抗菌药物耐药。大蜡螟能够区分出高毒力和低毒力肺炎克雷伯菌,当菌液浓度分别为1×10^(5) CFU/mL、1×10^(6) CFU/mL、1×10^(7) CFU/mL、1×10^(8) CFU/mL时,ATCC700603和ATCC43816对应浓度比较,差异有统计学意义(P=0.0001、0.0023、0.0245、0.0428)。未做任何处理的空白对照和注射了磷酸盐缓冲液的大蜡螟均存活,随着菌液浓度的升高,大蜡螟的病死率也随之升高。与高毒力标准菌株ATCC43816相同,K1、K64、K112型临床菌株均表现出高致死率,当菌液浓度在1×10^(7)~1×10^(8) CFU/mL时,所有大蜡螟在48 h内死亡。1×10^(6) CFU/mL的菌液可区分出hvKP和cKP,差异均有统计学意义(P<0.05)。ATCC700603、ATCC43816、K1型、K64型、K112型和cKP在72 h的LD_(50)分别为5.2×10^(6) CFU/mL、6.8×10^(4) CFU/mL、1.0×10^(4) CFU/mL、1.0×10^(4) CFU/mL、3.1×10^(4) CFU/mL、1.6×10^(6) CFU/mL,对应的Log10LD_(50)分别为6.718、4.834、3.987、3.987、4.504、6.212,临床分离的K1型、K64型、K112型肺炎克雷伯菌均可被定为高毒力菌株。结论生物标志物联合大蜡螟感染模型,可以准确实现临床经典肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌的鉴别。

四川省中江县肺炎克雷伯菌毒力相关特征及耐药性分析

目的探讨中江县肺炎克雷伯菌毒力相关表型/基因、荚膜血清型、耐药表型、序列分型(ST)的分布特征,提高临床认识,为细菌耐药防控和临床合理用药提供依据。方法回顾分析中江县人民医院2019年7-12月分离的肺炎克雷伯菌135株的资料。采用WalkAway-40Plus全自动分析系统进行菌种鉴定及药敏检测;采用拉丝实验鉴定菌株高黏液表型;采用聚合酶链式反应筛查高毒力荚膜血清型和毒力基因;采用多位点序列分析(MLST)鉴定菌株ST。结果135株菌中高黏液型菌株所占比例为50.4%。毒力基因iucA、iroN、rmpA阳性率分别为54.1%、54.8%、54.1%。荚膜血清K1、K2型菌株所占比例分别为11.9%、15.6%。共鉴定出65种ST型别,以ST23和ST37型最为常见,占比分别为11.1%和6.7%。菌株对16种抗菌药物的耐药率为0.0%~25.2%,对碳青霉烯类抗菌药物、阿米卡星、替加环素的耐药率均不足1%。高黏液型菌株的毒力基因阳性率显著高于非高黏液型菌株(P<0.001),其对头孢菌素类药物的耐药率显著低于非高黏液型菌株(P<0.001)。结论中江县肺炎克雷伯菌呈现“高毒力、低耐药”特征,应持续监测该地区肺炎克雷伯菌毒力及耐药性的变化,警惕高毒力菌株快速传播。

K1血清型肺炎克雷伯菌临床感染分子流行病学研究

目的了解K1血清型肺炎克雷伯菌(K1-Kpn)的临床特点和分子流行病学特征。方法收集医院2015年1-12月各类标本中分离的所有非重复肺炎克雷伯菌331株,使用Vitek-2Compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药物敏感性分析;"拉丝"试验检测菌株的高黏液表型;PCR方法检测6种高毒力荚膜血清型、7种常见毒力基因和17种常见耐药基因;多位点序列分型(MLST)分析K1-Kpn的分子流行病学特征。分析感染K1-Kpn患者的平均年龄、平均急性生理与慢性健康(APACHE)Ⅱ评分、平均住院时间及ICU入住率等临床特征,并与40例同期感染非K1-Kpn的患者进行比较。结果检出37株K1-Kpn,HM试验阳性率为72.97%,7种常见毒力基因的携带率在91.89%~100.00%;感染K1-Kpn和非K1-Kpn患者的平均年龄为(55.43±16.1)和(43.43±14.2)岁,差异有统计学意义(Z=-5.412,P=0),APACHEⅡ评分为(27.72±8.53)和(18.63±7.29)分,差异有统计学意义(Z=-14.388,P=0),平均住院时间为(53.7±27.4)和(10.2±8.4)d,差异有统计学意义(Z=-4.311,P=0)及ICU分离率为45.95%(17/37)和20.00%(8/40),差异有统计学意义(χ~2=5.9,P<0.05);对常用抗菌药物仍保持较高的敏感性,PCR结果显示产SHV型β-内酰胺酶4株(占10.81%)、TEM型4株(占10.81%)和CTX-M型14株(占37.84%),另有13株(占35.14%)携带PMQR基因,仅1株携带16SrRNA甲基化酶基因,未检出碳青霉烯酶基因,MLST分型显示:ST23为最主要序列型。结论 K1-Kpn携带多种毒力基因,耐药机制与β-内酰胺基因密切相关,ST23为其主要的临床流行株;对中老年、心脑血管疾病合并肺部感染患者,应积极地预防控制K1型菌株感染,控制其传播。