基于患者源性口腔鳞状细胞癌类器官的药敏分析与初步临床应用

目的:基于所建立的患者源性口腔鳞状细胞癌类器官模型进行药物敏感性实验,对相应患者制定个性化药物治疗方案,观察其疗效与实验结果的匹配性。方法:本研究将通过活检或根治手术获得新鲜口腔鳞状细胞癌标本建立患者源性类器官模型,依托此模型对6种治疗口腔鳞状细胞癌药物(顺铂、紫杉醇、5-FU、西妥昔单抗、阿培利司、Nutlin-3)的敏感性进行测定,并对其中4例活检患者参考实验结果制定个性化用药方案,观察两个疗程后的近期治疗效果。结果:本研究成功建立了10例OSCC类器官(成功率10/12,83.3%),均可稳定传代、扩增达4代以上,且与亲本肿瘤组织表现出高度一致的组织病理学特征。口腔鳞状细胞癌类器官模型在药敏实验结果中表现出个体化差异,4例接受药物治疗的患者肿瘤控制结果均达到部分缓解标准,与实验结果一致。结论:本实验建立的患者源性口腔鳞状细胞癌类器官模型高度还原了同源亲本肿瘤的组织病理学特点,基于该模型的体外药敏实验与相应患者临床治疗反应一致,为建立个性化口腔鳞状细胞癌精准药物治疗新体系奠定基础。

体外化疗药物敏感实验对指导原发性肝癌个体化疗的临床意义

背景与目的:肝细胞癌(肝癌)化学治疗效果差。为了提高化疗效果,本研究采用体外化疗敏感实验——三磷酸腺苷肿瘤化疗药物敏感实验(adenosinetriphosphatetumorchemosensitivityassay,ATP鄄TCA)系统评估化疗药物,并利用该系统指导肝癌患者临床个体化疗。方法:获取50个原发性肝癌手术标本,采用ATP鄄TCA系统评估5鄄氟尿嘧啶(5鄄fluorouracil,5鄄FU)、丝裂霉素(mitomycin,MMC)、顺铂(cisplatin,DDP)、草酸铂(oxaliplatin,OXA)、表阿霉素(epirubicin,EPI)、健择(gemcitabine,GEM)、伊立替康(irinotecan,CPT鄄11)、足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)和泰素(paclitaxel,PTX)等化疗药物;23例肝癌患者术后接受ATP鄄TCA系统指导临床化疗,同时以20例接受手术及常规治疗的肝癌患者作为对照,观察162周临床疗效。结果:ATP鄄TCA系统结果可评估率为90.8%。肝癌细胞对各种化疗药物中鄄高度敏感率分别为:泰素46%、伊立替康44%、健择36%、丝裂霉素14%、表阿霉素12%、顺铂8%、足叶乙甙6%、草酸铂6%以及5鄄氟尿嘧啶4%;临床结果:临床研究观察终点ATP鄄TCA组与对照组比较,PR、CR、SD及观察期内患者死亡率两组之间无显著性差异;然而对照组有较高病情进展发生率(60.00%vs.13.04%,P=0.003);ATP鄄TCA组较对照组在总病情缓解率(60.86%vs.30.00%,P=0.043)、平均手术后总生存期(78.91周vs.27.21周,P=0.006)及手术后无疾病进展生存期(30.52周vs.4.78周,P=0.005)方面表现出明显优势。结论:ATP鄄TCA系统可以成功用于评估肝癌标本。泰素、伊立替康和健择有较高的体外抗肝癌活性。ATP鄄TCA系统指导肝癌个体化疗有可能提高患者无疾病进展生存期和总生存期。

40种中药提取物对6种临床常见感染菌株的体外抑菌活性观察

目的观察苏木、地榆、淫羊藿、黄连、白芍等40种贵州省常见中药对6种临床常见感染菌株的体外抑菌活性。方法取40种中药(厚朴、陈皮、益母草、连翘、三七、虎杖、百部、菌陈、拳参、半夏、龙胆草、玄参、黄精、苦瓜、天冬、瓜蒌、淫羊藿、木蝴蝶、木香、姜黄、杜仲、白芨、木瓜、白头翁、地榆、苏木、白芍、紫草、山豆根、钩藤、黄药子、猪牙皂、黄柏、女贞子、山慈菇、黄连、石斛、栀子、枳壳、金钱草)制备水提取液或乙醇提取液。采用纸片琼脂扩散法(K-B法)测算40种中药提取物对6种标准菌株(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、肺炎链球菌)的抑菌圈直径。筛选出对标准菌株有抑菌作用(抑菌圈直径范围10~21 mm)的中药提取物,采用微量肉汤稀释法测定中药提取物对6种标准菌株及其临床分离耐药菌株的最小抑菌浓度(MIC)值。结果K-B法显示15种中药提取物(三七、虎杖、半夏、龙胆草、玄参、黄精、瓜蒌、淫羊藿、木香、地榆、苏木、白芍、紫草、猪牙皂、黄连)对至少1种标准菌株有抑菌作用,抑菌圈直径为10~21 mm;黄连对肺炎链球菌、苏木对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好,抑菌圈直径分别为21、20 mm。15种中药MIC在15.63~1 000 mg/m L,其中黄连对肺炎链球菌、苏木对金黄色葡萄球菌的MIC值均为15.63 mg/m L,淫羊藿对肺炎链球菌、地榆对肺炎链球菌的MIC值均为31.25 mg/m L。筛选出5种抑菌活性较强的中药为苏木、地榆、淫羊藿、黄连、白芍,对6种临床分离的耐药菌株有不同程度的抑菌效果,其中苏木对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、黄连对产超广谱-β内酰胺酶肺炎链球菌的MIC_(50)均为15.63 mg/m L。结论 40种中药中苏木、地榆、淫羊藿、黄连、白芍对临床常见感染菌株的抑菌活性较好,黄连对肺炎链球菌及苏木对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,苏木对铜绿假单胞菌和白芍、地榆对鲍曼不动杆菌也有一定抑菌效果。

猪附红细胞体培养方法及药敏试验研究

为实现抗猪附红细胞体药物的高通量筛选,拟建立稳定可靠的体外培养方法,并应用其进行药敏试验。采用单因素试验法,分别对培养基种类、胎牛血清添加比例、动物红细胞泥种类、换液和传代间隔时间进行考察。应用建立的方法对猪附红细胞体进行体外培养,并以贝尼尔、青蒿素作为阳性对照药物,对咪唑苯脲、四环素、强力霉素等8种药物进行药敏试验。结果显示,RPMI-1640基础培养液与胎牛血清按6∶4比例混合,同时添加2 g/L比例的肌苷,并用HEPES和NaHCO3调节pH至7.2~7.4,猪附红细胞体体外生长状况良好。以正常兔红细胞泥为体外培养载体,每24 h更换1次培养液,每32 h传代1次,可连续稳定传代42次,红细胞最高感染率达93.6%。测得咪唑苯脲的IC50最小,为14.55μg/mL,表明在8种药物中,其抗猪附红细胞体活性最强。

乌骨鸡肠乳杆菌的分离鉴定及体外抑菌试验

【目的】寻找能在禽类生产实践中替代抗生素的益生菌,以提高乌骨鸡生产性能,减少抗生素的使用,对乌骨鸡肠道黏膜进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。【方法】利用常规理化法做生理生化试验;PCR扩增测序法进行分子生物学鉴定;牛津杯琼脂扩散法做体外抑菌试验;灌喂乳酸菌法做动物安全性试验。【结果】分离菌株生长迅速、产酸强,有明显透明溶钙圈,为革兰氏阳性短杆菌;能发酵乳糖、七叶苷等,不分解木糖、阿拉伯糖;甲基红(M-R)试验结果为阳性,H2S、氧化酶、乙酰甲基甲醇(V-P)等均为阴性,生理生化特性与乳酸杆菌基本一致;PCR扩增在约1500 bp处出现目的条带,16S rDNA基因测序显示分离菌与唾液乳酸杆菌的同源性最高;分离菌对新生霉素高度敏感,对诺氟沙星耐药;对大肠杆菌、链球菌等病原菌均表现明显的抑菌作用;分离菌发酵液呈酸性时才具有抑菌活性,蛋白酶、高温对分离菌发酵液抑菌活性影响不大;动物试验中小鼠均生长良好,无一死亡。【结论】分离菌均为唾液乳杆菌,具备成为益生菌的优势;分离菌对多种病原菌具有抑制作用,与诺氟沙星等配合使用,可防治由大肠杆菌、链球菌等多种病原指示菌引起的疾病。

布氏锥虫伊氏亚种体外药敏试验

应用布氏锥虫伊氏亚种(Trypanosoma brucei evansi,T.b.e)体外药敏试验系统检查了国内6个T.b.e虫株和国外布氏锥虫指名亚种(T.b.b)对苏拉灭(Suramin)、贝尼尔(Berenil)、安锥赛(Antrycide)、咪唑苯脲(Imidocard)和硫胂聚氰胺(Cymelarsan)等5种抗锥虫药的敏感性。结果表明,该系统能准确测定不同虫株对各种药物的敏感性,与小鼠治疗试验结果基本相符,发现了国内抗贝尼尔和苏拉灭的T.b.e虫株。

土槿皮等5种中药及其不同组合抗糠秕马拉色菌的体外药敏试验研究

目的测定土槿皮、侧柏叶、苦参、丁香、肉桂及其不同组合对糠秕马拉色菌的最小抑菌浓度,观察其体外抑菌效果。方法参照美国国家临床实验室标准化委员会制订的M27-A方案中酵母菌微量稀释法,在此基础上进行改良,采用含油的培养基作为药敏试验的液基,制备微量药敏板,对糠秕马拉色菌进行体外药敏试验。结果最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)依次为:5种中药混合液(槿柏洗剂):5.5 mg/m L,土槿皮+侧柏叶+苦参+丁香:16 mg/m L,土槿皮+侧柏叶+苦参:8.5 mg/m L,丁香+肉桂:9 mg/m L,土槿皮:10 mg/m L。结论相比于各单味药及不同组合,槿柏洗剂全方MIC为最小,5种中药及其不同组合混合液均有抑制糠秕马拉色菌生长的作用。

胃癌中胸苷酸合成酶与培美曲塞/雷替曲塞敏感性的初步研究

目的探讨胃癌组织中胸苷酸合成酶(TS)mRNA表达与培美曲塞或雷替曲塞药物敏感性之间的关系。方法收集50例经病理确诊的新鲜人胃癌标本,采用三维微组织块培养法(HDRA)进行两种药物的体外敏感试验;实时荧光定量PCR检测对应胃癌石蜡组织中TS mRNA水平。结果新鲜胃癌组织对培美曲塞或雷替曲塞的敏感性以及胃癌石蜡组织中TS mRNA水平均与临床病理特征无明显相关性。培美曲塞敏感组与耐药组的TS mRNA相对表达量分别为6.72±1.34和15.39±2.43(P=0.002);雷替曲塞敏感组与耐药组的TS mRNA相对表达量分别为7.96±1.70和14.14±2.37(P=0.028)。结论胃癌石蜡组织TS mRNA水平与新鲜胃癌组织对培美曲塞或雷替曲塞的敏感性呈负相关,TS在胃癌应用新型抗叶酸代谢类药物个体化治疗中具有潜在的指导价值。

人体肝癌细胞周期FCM测定与化疗药物敏感性关系的研究

应用细胞周期流式细胞仪(FCM)分析与~3H—TdR掺入法药敏测定技术,对8种化疗药物(MMC,MTX,5—Fu,ADM,CDDP,VP_(16),VCR,DTIC)在29例肝癌体外培养细胞的抑制作用与细胞周期比例的关系进行了对比研究。结果显示,化疗药物抑制率与细胞周期比例有关。以抑制率>60％作为有效标准,则对8种化疗药物有效的22例肝癌(75.9％)的细胞周期比例明显不同于抑制率<60％的肝癌。我们认为,FCM细胞周期测定具有简便、快速、客观、准确的特点,在临床个体化疗上具有实际应用价值。

善宁对大肠癌细胞体外抑制作用探讨

目的探讨生长抑素(善宁)对体外培养的大肠癌细胞的抑制作用,为大肠癌的内分泌治疗提供实验依据。方法采用MTT法体外检测善宁对54例大肠癌细胞的抑制率。依其性别、年龄、部位、Dukes分期及p53的表达将其分组,统计分析各组病例的敏感药物的差异。结果54例大肠癌病人中有16例对善宁敏感,敏感率为29.6%。善宁敏感性与性别、部位、Dukes分期及p53蛋白的表达无关,但与年龄有关,60岁以下组(敏感率50%)较60岁以上组(敏感率13.3%)敏感,P<0.01。结论善宁在体外对部分大肠癌患者癌细胞有抑制作用,对年轻患者大肠癌细胞抑制作用大于60岁以上患者。

溶菌酶对奶牛子宫内膜炎主要病原的体外药敏试验

选取从患有子宫内膜炎奶牛的子宫黏液中分离出的主要病原菌金黄色葡萄球菌37株、链球菌30株、大肠埃希氏菌12株和化脓棒状杆菌22株,在体外用溶菌酶、庆大霉素、氨苄西林和头孢唑啉按照微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果表明,溶菌酶对奶牛子宫内膜炎分离的金黄色葡萄球菌和链球菌具有良好的抗菌活性,对化脓棒状杆菌具有一定的抑杀作用,对大肠埃希氏菌作用较弱;氨苄西林则均产生了大量的耐药菌株,而溶菌酶对庆大霉素、氨苄西林和头孢唑啉耐药菌株同样具有较好的抑杀效果。

原发性肝癌体外化学药物敏感性试验及结果分析

目的测定肝细胞性肝癌组织对常用化疗药的敏感性,探讨肝癌组织多药耐药患者的临床病理特征。方法对2010年3月至2011年3月间在中山大学肿瘤防治中心肝胆科行肝癌切除术的100例患者标本进行体外药物敏感性实验,测定目前常用8种化疗药的抑瘤率,包括紫杉醇、开普拓、卡铂、丝裂霉素C、氟脲苷、亚砷酸、表阿霉素和吉西他滨;将患者分为2组:多药耐药组(敏感药物<4种)与非多药耐药组(敏感药物≥4种),分析患者的临床病理特征;分析肝内多病灶数与癌组织耐药数的相关性。结果化疗药物对肝癌组织的抑瘤率从高到低为紫杉醇、开普拓、卡铂、丝裂霉素C、氟脲苷、亚砷酸、表阿霉素和吉西他滨,分别为60%,44%,41%,39%,37%,29%,24%及13%,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者的肝内多病灶情况存在显著差异;肝内多病灶数与癌组织耐药数正相关。结论常用化疗药物对肝细胞性肝癌组织的敏感度最高为紫杉醇。肝内多病灶的患者更易发生耐药,而且病灶数目越多耐药数目就越多。

环孢素A治疗再生障碍性贫血体外药敏试验的初步研究

目的 :为预测环孢素A(CSA)治疗再生障碍性贫血 (AA)疗效而建立体外药敏试验。方法 :采用微量甲基纤维素半固体培养粒—单核细胞集落 (GM CFU) ,并用CSA干预。结果 :体外 /体内 (S :敏感 ,R :耐药 ) :S/S11例 ,R/R10例 ,R/S :2 0例 ,与临床总符合率 5 1.2 % ,阳性符合率 10 0 % ,阴性符合率 3 3 .3 % ,试验敏感性 3 5 .3 5 % ,特异性10 0 %。结论 :CSA体外敏感试验与临床疗效有一定相关性 ,如体外敏感 ,则体内 10 0 %敏感 ,但存在一定假阴性。

子宫内膜腺癌细胞JEC—9药物敏感性研究

用单层细胞培养、细胞生长抑制和集落形成试验三种方法,观察子宫内膜腺癌细胞JEC—9对九种常用抗癌药物和三种中药合剂的敏感性。结果表明,表阿霉素、顺铂和丝裂霉素对该癌细胞有高度敏感性,其中表阿霉素在1.2×10^(-6)mg/ml浓度下仍有明显的细胞毒效应。结合临床给瘤源患者用药,取得良好的治疗效果。

耐药MTB分离株对不同组合抗结核药品体外药物敏感性试验的结果分析

目的分析耐药MTB分离株对不同组合抗结核药品(简称“不同组合药品”)进行体外药物敏感性试验(简称“药敏试验”)的检测结果,评价不同组合药品的最低抑菌浓度(MIC)及对耐药菌株的抗结核协同作用。方法搜集同济大学附属上海市肺科医院“十二五”国家科技重大专项入组的148例首次复治肺结核患者,通过对患者痰标本进行BACTEC MGIT 960和改良罗氏法培养获取167株MTB分离株,对75例患者经上述两种方法进行药敏试验结果均为阳性的92株耐药菌株(包括36株MDR-MTB、54株XDR-MTB和2株单耐H菌株),采用MIC三维棋盘法分别以H-R、Mfx-Pa、Mfx-Pa-Rfb、Mfx-Pa-Rft等4种组合药品进行体外药敏试验,计算不同药品组合的协同率。结果药品未组合前的H、R、Rfb、Rft、Pa体外药敏试验MIC值的中位数(四分位数)[M(Q1,Q3)]分别为4(1,8)、24(2,64)、0.5(0.125,1)、4(4,4)、8(4,8)mg/L,均明显高于组合后的H[2(1,4)mg/L]、R[1(0.25,16)mg/L]、与Mfx-Pa组合后的Rfb[0.125(0.03125,0.125)mg/L]、与Mfx-Pa组合后的Rft[1(1,1)mg/L]、与Mfx/Mfx-Rfb/Mfx-Rft组合后的Pa[分别为0.0075(0.0075,0.875)、0.0075(0.0075,0.125)、0.0225(0.0075,0.5)mg/L](Z=-4.855,-6.908,-8.386,-8.632,-8.094,-8.335,-7.771,P值均<0.001);且H-R、Mfx-Pa、Mfx-Pa-Rfb、Mfx-Pa-Rft药品组合后的协同率分别为12.0%(11/92)、5.4%(5/92)、17.4%(16/92)、23.9%(22/92);其中H-R和Mfx-Pa组合分别与Mfx-Pa-Rfb和Mfx-Pa-Rft组合的协同率比较,差异均有统计学意义(χ^2=12.670,P=0.002;χ^2=19.420,P<0.001;χ^2=18.640,P<0.001;χ^2=28.500,P<0.001)。结论组合药品中H、R、Rfb、Rft、Pa的MIC值均低于未组合前该药品的MIC值,说明耐药菌株对组合后上述药品的敏感性增强。三药组合的协同率均优于两药组合,且Mfx-Pa-Rft较Mfx-Pa-Rfb组合表现出更好的协同作用。

丹参酮分别联合伊曲康唑、特比萘芬对红色毛癣菌体外抗菌活性研究

目的:探讨丹参酮分别联合伊曲康唑、特比萘芬对红色毛癣菌的体外抗菌活性。方法:选取临床分离的红色毛癣菌40株进行体外药物敏感试验,参照美国临床和实验室标准化研究所M38-A2方案测定丹参酮、伊曲康唑及特比萘芬的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),采用分级抑制浓度指数(factional inhibitory concentration index,FIC)评定联合用药效果,并观察不同浓度丹参酮对红色毛癣菌的作用。结果:丹参酮、伊曲康唑及特比萘芬对红色毛癣菌MIC的差异有统计学意义(P<0.05),其中伊曲康唑MIC较低,丹参酮MIC较高。丹参酮仅联合0.031 2、0.062 5μg/ml的伊曲康唑时,FIC<1所占比例分别为42.50%(17/40)、45.00%(18/40),以协同作用为主;而联合其他质量浓度的伊曲康唑时以拮抗作用为主,不同质量浓度组间比较的差异均有统计学意义(P<0.05)。丹参酮联合不同质量浓度的特比萘芬时均以拮抗作用为主,不同质量浓度组间比较的差异均有统计学意义(P<0.05)。丹参酮作用于红色毛癣菌可使菌丝萎缩,出现多处破损及断裂,细胞浆、细胞核破碎,形态不规则。结论:丹参酮分别联合伊曲康唑、特比萘芬对红色毛癣菌均以拮抗作用为主,故应避免联合应用。丹参酮可使红色毛癣菌超微结构发生明显改变,进而发挥有效抗真菌作用。

BRCA1、hENT1和Topo1 mRNA水平与新鲜胃癌组织三维培养药物敏感性关系

目的:分析胃癌石蜡组织BRCA1、hENT1、Topo1 mRNA水平与新鲜胃癌组织多西紫杉醇、吉西他滨、伊立替康体外药物敏感性的关系。方法:收集36例经病理确诊的新鲜胃癌标本,采用三维微组织块培养法(HDRA)行三种药物的体外药物敏感试验。实时荧光定量PCR检测对应胃癌石蜡组织中BRCA1、hENT1、To-po1 mRNA水平。结果:新鲜胃癌组织对三种药物的敏感性均与临床特征无明显相关性。对应胃癌石蜡组织中BRCA1、hENT1、Topo1 mRNA水平与临床特征无明显相关性。在胃癌组织中,hENT1 mRNA水平最高,BRCA1 mRNA水平最低。胃癌石蜡组织BRCA1 mRNA水平与新鲜胃癌组织的多西紫杉醇敏感性正相关(7.927 vs 3.464,P=0.001);hENT1 mRNA水平在吉西他滨敏感组高于耐药组(15.710 vs 10.145,P=0.243),Topo1 mRNA水平在伊立替康敏感组高于耐药组(10.024 vs 6.038,P=0.124),但均未达统计学差异。结论:胃癌石蜡组织BRCA1mRNA水平与新鲜胃癌组织对多西紫杉醇的敏感性呈正相关。

痤疮丙酸杆菌对米诺环素的敏感性研究

目的:明确痤疮丙酸杆菌对米诺环素的敏感性。方法:收集236例寻常性痤疮患者并给予米诺环素口服。治疗前采用需氧培养和厌氧培养的方法,对患者皮损进行病原菌分离。治疗前后利用抗菌药敏纸片对痤疮丙酸杆菌进行药物(米诺环素、四环素、罗红霉素和替硝唑)耐药性检测。肉汤稀释法测定米诺环素的最低抑菌浓度。结果:病原菌分离结果示:前3位病原菌分别为痤疮丙酸杆菌(32.45%)、金黄色葡萄球菌(19.95%)和表皮葡萄球菌(13.83%);治疗前痤疮丙酸杆菌对米诺环素、四环素、罗红霉素和替硝唑的耐药率分别为0、20.93%、83.72%和98.8%,治疗后为0、47.22%、86.11%和100%。米诺环素对痤疮丙酸杆菌的MIC_(50)和MIC_(90)分别为0.125μg/mL和0.25μg/mL。结论:痤疮丙酸杆菌对米诺环素仍然敏感。

体外药物敏感性实验在肺癌治疗中的研究现状

肺癌是威胁人类健康的一大“杀手”,目前现有的治疗手段难以满足临床需求。化疗是肺癌非手术治疗中最常用的手段,然而由于肿瘤异质性的普遍存在,肿瘤多药耐药和治疗失败的案例比比皆是。为了避免化疗的盲目性,并提高化疗的有效率,基于体外药敏实验的肿瘤个体化治疗方法应运而生。国内外已广泛开展了一系列临床实验,证实体外药敏实验对于肿瘤个体化治疗具有重要的指导意义。本文重新梳理了当下最为热门及传统常用的几种肿瘤药敏实验方法,并着重介绍了基于类器官、患者来源的肿瘤细胞群、微流控芯片、高通量药敏检测技术及类器官芯片等的新兴体外药物敏感性检测方法,以期更全面、更深入地了解体外药敏实验在肺癌治疗中的最新研究进展。

骨髓L-CFU培养法体外药物敏感试验在急非淋白血病治疗中的意义

应用骨髓L-CFU(Legkemia-Colony Forming Unit)培养法测定31例急非淋白血病(ANLL)患者体外药物敏感性,同时观察同种抗癌药物诱导化疗后的临床疗效。以≥40%细胞杀伤率为阈值,体内外药物敏感符合率83.33%,耐药符合率92.31%。此方法有助于预测ANLL患者对化疗药物的体内反应,具有一定的临床应用价值。