结核分枝杆菌转座突变库的建立及应用

为利用转座突变技术构建结核分枝杆菌H37Ra转座突变库,优化转座突变构建流程,并应用其筛选与生物被膜形成和抗胁迫有关的基因。利用耻垢分枝杆菌大量富集温敏型ΦMycoMarT7噬菌体,转导H37Ra,建立结核分枝杆菌转座突变库,突变库容量约3.58×10^(4)^(-6)CFU·mL,转导效率为7.96×10^(-6)。使用Sauton培养基对突变体进行筛选,观察突变体的生物被膜形成能力,获得8株生物被膜形成缺陷的突变株,经全基因组测序定位,其中1个突变基因为Rv3099c。构建表达该基因的重组质粒,将重组质粒导入耻垢分枝杆菌中。与导入空质粒的对照组相比,导入重组质粒的耻垢分枝杆菌生物被膜形成能力明显增强,但抗温度胁迫及SDS胁迫能力并无增强,明确Rv3099c与结核分枝杆菌生物被膜形成能力相关。