环状RNA Circ HIPK3在非小细胞肺癌中的研究进展

肺癌是全世界发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一,虽然针对肺癌的靶向、免疫治疗等新兴治疗手段取得了显著进展,但如何治愈肺癌仍是一项备受瞩目的话题。其中环状RNA(circular RNA,circRNA)作为最近发现的一类具有共价闭合结构的环状RNA,具有结构稳定、序列保守及疾病特异性表达等特点。当前医学前沿揭示了circRNA的失调与多种癌症的发展过程有关。其中,研究热点之一的环状RNA HIPK3(circular RNA HIPK3,circ HIPK3)是一种致癌基因,主要起源于基因HIPK3的第二个外显子。越来越多的证据表明circ HIPK3参与了非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)等多种恶性肿瘤的发展,并且circ HIPK3的异常表达与NSCLC的疾病机制、诊断、治疗以及预后密切相关。本文旨在对circ HIPK3在NSCLC中的最新研究进展进行综述,以推动肺癌的精准诊疗。

CircRNA Hipk1调控miR-146a-5p/Notch2轴对缺血性心律失常大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨CircRNA Hipk1调控miR-146a-5p/Notch2轴对缺血性心律失常大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、CircRNA Hipk1 siRNA腺相关病毒(干扰CircRNA Hipk1)组、miR-146a-5p Antagomir(miR-146a-5p抑制剂)组、CircRNA Hipk1 siRNA腺相关病毒+miR-146a-5p Antagomir组、阴性对照(CircRNA Hipk1 siRNA腺相关病毒阴性对照+miR-146a-5p Antagomir阴性对照)组,每组12只;除假手术组外,其余各组制备缺血性心律失常模型,分组给药干预后,测定各组大鼠心律失常症状并进行评分;以2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠心肌组织病理形态;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率;试剂盒检测各组大鼠血清致炎因子白细胞介素(IL)-1β、IL-17水平;逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组大鼠心肌组织CircRNA Hipk1、miR-146a-5p及Notch2 mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织结构紊乱,细胞轮廓不清,排列紊乱,有炎性细胞浸润,呈明显损伤,心律失常评分、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清IL-1β与IL-17水平、心肌组织CircRNA Hipk1、Notch2 mRNA表达水平升高(P<0.05),miR-146a-5p表达水平降低(P<0.05)。与模型组、CircRNA Hipk1 siRNA腺相关病毒+miR-146a-5p Antagomir组比较,CircRNA Hipk1 siRNA腺相关病毒组大鼠心肌组织病理损伤减轻,心律失常评分、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清IL-1β与IL-17水平、心肌组织CircRNA Hipk1、Notch2 mRNA表达水平降低(P<0.05),miR-146a-5p表达水平升高(P<0.05);miR-146a-5p Antagomir组大鼠心肌组织病理损伤加重,心律失常评分、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清IL-1β与IL-17水平、心肌组织CircRNA Hipk1、Notch2 mRNA表达水平升高(P<0.05),miR-146a-5p表达水平降低(P<0.05)。结论:下调CircRNA Hipk1表达可促进miR-146a-5p表达,抑制Notch2表达,减轻缺血性心律失常大鼠炎症损伤,减小心肌梗死面积,降低心肌细胞凋亡率,改善大鼠心律失常症状。

hFIST/HIPK2在Fas/FasL和TNF/TNFR1介导的凋亡信号转导途径中的作用

目的 探讨hFIST/HIPK2在Fas/FasL介导的凋亡信号转导途经中的作用。方法 应用瞬时转染技术 ,将全长序列hFIST/HIPK2、Fas(CD95 /Apo 1)、TNFR1、FADD、TRADD、caspase 8cDNAs转染入 2 93T细胞中 ,应用免疫沉淀技术、WesternBlotting技术检测hFIST/HIPK2与以上凋亡相关蛋白的相互作用。结果 hFIST/HIPK2与Fas、TNFR1、FADD、caspase 8无相互作用 ,与TRADD有相互作用 ,且Fas、TNFR1竞争性抑制这种相互作用。在有FasL存在及无FasL存在时 ,Fas均可与FADD相互作用 ;Fas与TRADD有相互作用。结论 hFIST/HIPK2与TRADD有相互作用 ,Fas与TRADD有相互作用 ,hFIST/HIPK2可能间接参与了Fas/FasL。

环状RNA HIPK3在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与临床病理和预后的关系探究

目的探究上皮性卵巢癌(EOC)组织中环状RNA(circRNA)HIPK3表达与临床病理及预后的关系。方法回顾性分析2011年5月至2014年12月于我院接受手术治疗的80例EOC患者的临床资料。收集所有EOC患者癌组织及对应癌旁正常组织(距癌灶边缘大于5 cm)标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EOC癌组织及癌旁正常组织中circRNA HIPK3的表达情况;根据癌组织中circRNA HIPK3表达水平的平均数分为高表达组(n=31)和低表达组(n=49),分析circRNA HIPK3表达与EOC的相关性;K-M生存曲线及Cox回归模型分析circRNA HIPK3与预后的关系。结果与癌旁正常组织相比,EOC癌组织中circRNA HIPK3表达显著降低(P<0.05);circRNA HIPK3表达量与肿瘤直径、分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05);circRNA HIPK3高表达组术后5年累积总生存率显著高于低表达组(74.2%vs.38.8%,P=0.001);EOC分化程度(G3)[HR=1.48,95%CI(1.45,3.21)]、FIGO分期(Ⅲ~Ⅳ期)[HR=1.59,95%CI(1.53,3.47)]、淋巴结转移[HR=1.31,95%CI(1.28,2.46)]、术后未辅助化疗[HR=0.57,95%CI(0.45,0.97)]及circRNA HIPK3低表达[HR=0.24,95%CI(0.15,0.98)]是EOC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论circRNA HIPK3低表达是EOC患者不良预后的独立危险因素之一,可作为新的临床肿瘤标志物及治疗靶点应用于临床。

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶hFIST/HIPK2的表达纯化磷酸化

目的 观察一个新近克隆的丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶hFIST HIPK2 (HumanFasinteractingsignaltransducer homeo domaininteractingproteinkinase)的表达、纯化、磷酸化。方法 用瞬时转染技术、Westernblotting检测hFIST HIPK2野生型及其变异型蛋白 (点突变型hFIST HIPK2K2 2 1A ,C 端缺失型hFIST HIPK2△C、N 端缺失型hFIST HIPK2△N)在 2 93T细胞中的表达、磷酸化 ,及从E coli中纯化GST hFIST HIPK2△C融合蛋白。结果 hFIST HIPK2全长序列cDNA长 4kb ,编码分子质量为 13 0× 10 3的hFIST HIPK2蛋白 ;hFIST HIPK2K2 2 1A的分子质量略小于hFIST HIPK2野生型 ,hFIST HIPK2△C、hFIST HIPK2△N的分子质量分别为 5 9× 10 3、69× 10 3。hFIST HIPK2野生型及其变异型蛋白的丝氨酸残基可自我磷酸化 ,其苏氨酸、酪氨酸残基不被磷酸化 ;hFIST HIPK2蛋白可自我降解 ,尤以hFIST HIPK2K2 2 1A蛋白最为明显 ;从E coli中纯化了一个分子质量为 84× 10 3的GST hFIST HIPK2△C融合蛋白。hFIST HIPK2与小鼠HIPK2、仓鼠PKM具有高度的同源性 ,分别为 96 1%、96 5 %。结论 hFIST HIPK2为一新的丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶 ,是DYRK激酶分支家族中的一员 ,也是新近发现的核蛋白激酶HIPKs

HIPK3在膀胱癌细胞中的表达及其意义

目的:探讨HIPK3在膀胱癌发生、发展中的作用及其意义。方法:培养膀胱癌细胞系EJ,以丝裂霉素诱导细胞凋亡,利用细胞爬片免疫组化的方法测定HIPK3在被诱导凋亡的EJ细胞中的表达情况,并进一步经由流式细胞仪研究HIPK3抗体对细胞凋亡的影响。结果:被诱导凋亡的EJ细胞中,HIPK3表达呈阳性,其阳性率随着诱导凋亡的时间增加,但不同剂量的丝裂霉素作用,其表达没有统计学意义;HIPK3抗体可对抗丝裂霉素诱导的细胞凋亡作用,减少凋亡的EJ细胞。结论:HIPK3在被诱导凋亡的膀胱癌细胞系EJ中表达增加,揭示膀胱癌细胞凋亡过程同HIPK3有密切关系。

136例OSCC队列中肿瘤细胞的HIPK2表达情况及临床病理观察

目的:确定同源结构域相互作用蛋白激酶-2(HIPK2)表达与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的临床病理参数和预后的关系。方法:136例OSCC患者的石蜡包埋组织样品通过免疫组织化学方法检查HIPK2表达情况。评估HIPK2表达与OSCC临床病理特征和预后因素之间的关系。结果:OSCC中HIPK2的表达水平与淋巴结转移显著相关(P <0. 001)。HIPK2高水平表达的患者中位总生存时间(14,2~56个月)明显低于HIPK2低水平表达患者(43,4~93个月)(P <0. 001)和HIPK2中水平表达患者(38,2~81个月)(P <0. 001)。此外,HIPK2低表达组(39,2~93个月)(P <0. 001)和HIPK2中表达组(36,2~59个月)(P <0. 001)的中位无进展生存时间均比HIPK2高表达组(11,1~54个月)显著升高。以高HIPK2表达组为参考,低、中HIPK2表达组5年总生存期(OS)的相对危险度分别为0. 197(P <0. 001)和0. 271(P <0. 001),而低、中表达组的5年无复发生存期(RFS)的相对危险度分别为0. 371(P=0. 003)和0. 451(P=0. 014)。结论:HIPK2蛋白表达水平升高是OSCC结局的预测因素,并可能成为其潜在的治疗靶点。

CircHIPK3在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征之间的关系

研究环状RNA HIPK3(CircHIPK3)在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征之间的关系。方法 纳入2020年12月至2022年10月蚌埠医学院第一附属医院收治的88例乳腺癌患者为研究对象,纳入乳腺癌组,并选取同期于我院治疗40例经确诊为乳腺良性肿瘤的患者(乳腺纤维瘤患者)为对照组。分别采用实时荧光定量RT-PCR法和免疫组化法检测CircHIPK3在乳腺癌和乳腺纤维瘤组织中的表达情况。并收集乳腺癌组患者一般资料,包括肿瘤分化程度、TNM分期、病理学类型、是否淋巴结转移及月经状态等信息。分析乳腺癌患者乳腺癌组织中CircHIPK3的表达与临床病理特征之间的关系。结果 乳腺癌组织CircHIPK3阳性检出率显著高于乳腺纤维瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05),且乳腺癌组CircHIPK3表达水平显著高于对照组(P<0.05)。不同年龄、身体质量指数、肿瘤大小、病理学类型、淋巴结转移及月经状态的乳腺癌患者CircHIPK3阳性检出率对比差异无统计学意义(P>0.05);不同肿瘤分化程度、TNM分期患者CircHIPK3阳性检出率存在显著差异(P<0.05)。结论 circHIPK3在乳腺癌组织中呈现高表达,且circHIPK3表达与乳腺癌肿瘤分化程度及TNM分期相关,circRNA有望作为乳腺癌治疗的新靶点。

HIPK2基因对缺氧复氧诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞活力和凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)对缺氧复氧(H/R)诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞活力和凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:通过Lipofectamine^(TM)2000将靶向HIPK2基因的小干扰RNA(siRNA)转染NRK-52E细胞,并设置正常对照组(control组)和阴性对照组(HIPK2-NC组),Western blot法检测转染48 h的效率;细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和Ca^(2+)荧光强度;Western blot法检测Ki67、cleaved caspase-3、caspase-12、Bcl-2、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:靶向HIPK2的siRNA转染NRK-52E细胞后,HIPK2的蛋白表达显著低于control组(P<0.05)。与control组比较,H/R组的细胞活力及Ki67和Bcl-2的蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、Ca^(2+)荧光强度值及cleaved caspase-3、caspase-12、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平均显著升高(P<0.05);与H/R组比较,HIPK2-siRNA+H/R组的细胞活力及Ki67和Bcl-2的蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率、Ca^(2+)荧光强度值及cleaved caspase-3、caspase-12、Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论:抑制HIPK2基因表达可促进H/R诱导的NRK-52E肾小管上皮细胞生长,降低凋亡率,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路相关蛋白水平有关。

miR-455-3p靶向HIPK2调控高糖环境下成骨细胞的增殖和凋亡

背景:以往研究表明多种miRNA在骨形成中发挥作用,miR-335-5p可保护成骨细胞免受氧化应激,对枸橼酸铁铵诱导的成骨细胞具有保护作用,但miR-335-5p对高糖环境下成骨细胞增殖和凋亡的影响尚未可知。目的:探讨miR-455-3p靶向HIPK2对高糖环境下成骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:双荧光素酶报告基因分析法验证miR-455-3p对HIPK2的靶向作用。体外用高糖诱导MC3T3-E1细胞,分为空白组、高糖组、高糖+miR-control组、高糖+miR-455-3p组、高糖+si-control组、高糖+si-HIPK2组、高糖+miR-455-3p+pcDNA组和高糖+miR-455-3p+pcDNA-HIPK2组。qRT-PCR检测miR-455-3p和HIPK2mRNA的表达,MTT法检测细胞存活率,流式细胞检测细胞凋亡,Westernblot检测HIPK2、p-STAT3和STAT3蛋白的表达。结果与结论:①HIPK2是miR-455-3p的靶基因,miR-455-3p可负性调控HIPK2的表达;②高糖处理可抑制miR-455-3p的表达,促进HIPK2的表达;③过表达miR-455-3p或抑制HIPK2表达均可促进高糖条件下MC3T3-E1细胞的存活和抑制凋亡;④过表达HIPK2可部分逆转miR-455-3p对高糖条件下成骨细胞的存活促进和凋亡抑制作用;⑤miR-455-3p通过调控HIPK2抑制成骨细胞中p-STAT3的表达;⑥结果表明,miR-455-3p通过靶向下调HIPK2抑制高糖诱导的成骨细胞凋亡,促进成骨细胞增殖,这可能与抑制STAT3信号通路有关。

下调HIPK2基因表达促进顺铂诱导的肾小管上皮细胞HKC凋亡

目的探讨HIPK2对顺铂诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法构建顺铂诱导的HKC细胞凋亡模型,实时荧光定量PCR和Western blot检测HIPK2的表达;设计合成2条HIPK2 siRNA干扰片段,通过脂质体转染HKC细胞,建立HIPK2干扰的细胞株;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HIPK2 mRNA和蛋白的表达;再用顺铂处理细胞,Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot检测Bax表达的影响。结果顺铂呈剂量依赖性诱导的HKC细胞凋亡过程中,HIPK2 mRNA和蛋白表达水平均明显下调(P<0.05);转染siRNA后可显著降低HIPK2在HKC细胞内mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且HIPK2表达降低后会促进顺铂诱导的HKC细胞凋亡。结论HIPK2可抑制顺铂诱导的HKC细胞凋亡。

子痫前期患者血清环状RNA HIPK3水平变化及其对妊娠结局的预测效能

目的观察子痫前期(PE)患者血清环状RNA HIPK3水平变化,并分析HIPK3对PE患者妊娠结局的预测价值。方法选择PE患者95例为PE组,另选同期入院孕检的健康孕妇95例为对照组。采用qRT-PCR法检测两组血清HIPK3,比较PE组、对照组的妊娠结局;分析血清HIPK3水平与PE患者临床参数的相关性,分析PE患者妊娠结局的影响因素及血清HIPK3对PE患者妊娠结局的预测效能。结果PE组患者血清HIPK3水平及白蛋白、总蛋白水平低于对照组,24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮水平及HELLP综合征、产后出血、胎盘早剥、胎儿窘迫、早产、胎儿生长受限、胎儿死亡发生率高于对照组(P均<0.05)。PE患者血清HIPK3水平与白蛋白、总蛋白水平呈正相关(r分别为0.567、0.581,P均<0.05),与24 h尿蛋白、舒张压、收缩压、胱抑素C水平呈负相关(r分别为-0.543、-0.497、-0.595、-0.532,P均<0.05)。妊娠结局不良者的重度PE患者占比、收缩压、胱抑素C水平高于妊娠结局良好者,血清HIPK3水平低于妊娠结局良好者(P均<0.05)。重度PE、收缩压是PE患者不良妊娠结局的危险因素,HIPK3是PE患者不良妊娠结局的保护因素(P均<0.05)。血清HIPK3预测PE患者不良妊娠结局的受试者工作特征曲线下面积为0.889,截断值为0.40,灵敏度为81.6%,特异度为84.2%。结论PE患者血清HIPK3水平降低,与患者收缩压、肌酐、胱抑素C等临床指标相关;检测血清HIPK3有助于预测PE患者的妊娠结局。

circHIPK3通过调控miR-124-3p/EZH2促进食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为

目的探讨circHIPK3对食管鳞状细胞癌细胞增殖与迁移的影响及其机制。方法采用qRT-PCR法检测circHIPK3在42对食管鳞状细胞癌组织和配对癌旁组织以及食管鳞状细胞癌细胞KYSE-410和KYSE-510与人食管上皮细胞HET-1A中的表达;采用shRNA慢病毒干扰circHIPK3表达;采用CCK-8法、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖率、凋亡率、迁移和侵袭能力;采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-124-3p和EZH2的表达;荧光素酶报告基因实验检测circHIPK3与miR-124-3p的结合。结果circHIPK3在食管鳞状细胞癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.001),circHIPK3在食管鳞状细胞KYSE-410(P=0.017)和KYSE-510(P=0.008)的表达高于食管上皮细胞HET-1A;敲低circHIPK3表达后,KYSE-410和KYSE-510细胞的增殖、迁移及侵袭受到显著抑制(P均<0.05),而早期凋亡细胞比例显著上调(P=0.007、0.009);敲低circHIPK3后,KYSE-510细胞中miR-124-3p表达水平上调(P=0.016),EZH2 mRNA(P=0.004)和蛋白表达水平下调;此外,荧光素酶报告基因实验显示,circHIPK3与miR-124-3p具有直接结合作用。结论circHIPK3在食管鳞状细胞癌中高表达,敲低circHIPK3可抑制食管鳞状细胞癌细胞增殖与迁移,其机制可能与调控miR-124-3p/EZH2分子轴相关。

环状RNA PTENP1、HIPK3在甲胎蛋白阴性的肝细胞癌患者中的表达及意义

目的探讨环状RNA PTENP1、HIPK3在甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌患者中的表达及临床意义。方法选择在西安大兴医院确诊的51例AFP阴性肝细胞癌患者设为肝细胞癌组,38例肝脏良性病变患者设为良性病变组,另选择35名同期健康体检者设为对照组。采用qRT-PCR法检测各组的血清PTENP1、HIPK3表达情况。结果与对照组和良性病变组比较,肝细胞癌组的血清PTENP1表达水平明显降低,而血清HIPK3表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。二元Logistic回归分析显示,血清PTENP1低表达水平和血清HIPK3高表达水平是AFP阴性肝细胞癌患者发病的独立危险因素(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析提示,血清PTENP1、HIPK3联合检测的受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.951,大于PTENP1、HIPK3单独检测的0.756、0.855(Z=4.527、P=0.000;Z=3.561,P=0.000),且联合检测可提高灵敏度和特异度(P<0.05)。结论AFP阴性肝细胞癌患者存在血清PTENP1、HIPK3异常表达,两者联合检测具有较高的临床鉴别诊断和发病风险评估价值。

CircHIPK3低表达调控miR-124/STAT3轴抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡的机制研究

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circ HIPK3)低表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡的影响。方法采用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证微小RNA-124(mi R-124)与HIPK3、信号转导和转录激活因子3(STAT3)的靶向关系;将体外培养的原代海马神经元分为对照组(正常培养)、Aβ组(给予Aβ刺激)、Aβ+si STAT3-NC组(转染si STAT3-NC后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3组(转染si HIPK3后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3+antimi R-NC组(共转染si HIPK3和inhibitor-NC后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3+antimi R-124组(共转染si HIPK3和mi R-124 inhibitor后给予Aβ刺激)、Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3-NC组(共转染si HIPK3、mi R-124 inhibitor和si STAT3-NC后给予Aβ刺激)和Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3组(共转染si HIPK3、mi R-124 inhibitor和si STAT3后给予Aβ刺激)。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测HIPK3和mi R-124表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别检测海马神经元存活率和凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验证实HIPK3可与mi R-124靶向结合;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot实验证实,mi R-124可靶向调控STAT3蛋白表达。与对照组比较,Aβ组海马神经元中HIPK3表达水平、STAT3蛋白表达水平、凋亡率和Caspase-3活性明显升高,而海马神经元存活率和mi R-124表达水平明显降低(P<0.05);与Aβ+si HIPK3-NC组比较,Aβ+si HIPK3组中上述各指标明显逆转(P<0.05);与Aβ+si HIPK3+antimi R-NC组比较,Aβ+si HIPK3+antimi R-124组中各指标呈明显变化(P<0.05),且趋势与Aβ+si HIPK3组相反;与Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3-NC组比较,Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3组中各指标呈明显变化(P<0.05),且趋势与Aβ+si HIPK3+antimi R-124组相反;而Aβ组与Aβ+si HIPK3-NC组之间、Aβ+si HIPK3组与Aβ+si HIPK3+antimi R-NC组之间以及Aβ+si HIPK3+antimi R-124组与Aβ+si HIPK3+antimi R-124+si STAT3-NC组之间各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论Circ HIPK3低表达可抑制Aβ诱导的海马神经元凋亡,其作用机制与调控mi R-124/STAT3轴有关。

短发夹RNA沉默HIPK2对口腔鳞癌SCC-25细胞株增殖、自噬和裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探究HIPK2短发夹RNA对口腔鳞癌SCC-25细胞株增殖、自噬和裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将SCC-25分为未转染的Control组、转染shRNA-NC阴性对照载体的shRNA-NC组,转染HIPK2-shRNA1慢病毒载体的HIPK2-shRNA1组,转染HIPK2-shRNA2慢病毒载体的HIPK2-shRNA2组。RT-qPCR检测HIPK2 mRNA水平;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡;western blotting检测HIPK2、c-Myc、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Bcelin1、ATG7、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白表达水平。将转染HIPK2-shRNA2的SCC-25细胞皮下注射裸鼠建立裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为2组,Control组和HIPK2-shRNA2组,检测裸鼠肿瘤重量,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化染色检测肿瘤Caspase-3阳性细胞数,western blotting检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果:体外实验中,与Control组比较,HIPK2-shRNA1组、HIPK2-shRNA2组HIPK2mRNA水平和蛋白表达水平降低,克隆形成率降低,细胞凋亡率升高,c-Myc蛋白表达水平降低,cleaved Caspase-3/Caspase-3、Bax/Bcl-2比值升高,Bcelin1、ATG7蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(均P<0.05)。体内实验中,与Control组比较,HIPK2-shRNA2组裸鼠肿瘤重量降低,Caspase-3阳性细胞数升高,肿瘤细胞凋亡率升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(均P<0.05)。结论:HIPK2短发夹RNA抑制SCC-25细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,并抑制裸鼠移植瘤的生长。

右美托咪定通过HIPK2/AKT/mTOR信号通路改善七氟醚麻醉诱导的发育海马神经毒性

目的 探讨右美托咪定(DEX)对七氟醚诱导的学习和认知障碍的保护作用,并探讨其潜在机制。方法Sprague-Dawley大鼠幼鼠暴露于0.85%七氟醚6h,并注射不同剂量的DEX。采用Morris水迷宫实验评价大鼠的学习记忆功能。采用蛋白质免疫印迹法检测HIPK2/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的蛋白质水平。TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡。结果 水迷宫结果表明,七氟醚治疗增加了大鼠的逃避潜伏期,但减少了在原始象限的时间。DEX治疗以剂量方式逆转了七氟醚对原象限逃避潜伏期和时间的影响。DEX给药减轻了七氟醚引起的神经损伤和神经元毒性。此外,七氟醚诱导HIPK2、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平显著增加,而DEX给药降低了这些蛋白的表达水平。HIPK2抑制剂A64给药减轻了七氟醚引起的神经损伤和神经元毒性。结论 DEX可能通过调节HIPK2/AKT/mTOR信号通路来保护发育中的大鼠大脑免受七氟醚诱导的神经功能障碍。

同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)研究进展

同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)是一种定位于细胞核内的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。HIPK2可以诱导和抑制转录,亦能调节细胞分化、增殖及凋亡。HIPK2经过泛素化、小泛素样修饰物(SUMO)化、乙酰化、磷酸化等翻译后修饰来发挥其生物功能。研究表明,HIPK2磷酸化p53、甲基化CpG结合蛋白2(methyl CpG binding protein 2,MeCP2)及早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein,PML)促进细胞凋亡。本文较为详细的阐述了有关HIPK2的研究进展,特别是近5年的研究成果。

HIPK2对肝癌细胞HepG2生物学表型的调控机制研究

目的:研究外源同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)基因表达对人肝癌细胞系HepG2裸鼠成瘤性的影响及机制。方法:将人HIPK2基因的全长cDNA序列克隆至腺病毒载体(pAdeno-HIPK2),制备Adeno-HIPK2重组腺病毒。以50 pfu/细胞的Adeno-HIPK2感染HepG2细胞作为实验组,Adeno-lacZ感染作为阴性对照,未感染细胞作为空白对照,观察各组细胞的裸鼠成瘤性和细胞凋亡情况,并绘制细胞生长曲线。第6周取材,检测各组样品中HIPK2、JNK1、JNK2、P53、mdm2的水平和JNK激酶活性。结果:实验组细胞的裸鼠成瘤性明显降低,细胞凋亡率有所上升。实验组的P53和mdm2的蛋白表达分别是对照组的3倍和15%,JNK1和JNK2基本不变,但JNK激酶活性则升至对照组的5倍。结论:HIPK2高表达可以激活JNK激酶途径,并有效提高细胞内P53水平,使HepG2细胞的裸鼠成瘤性下降,是肝癌生物治疗中重要目的基因。

HIPK2在口腔鳞状细胞癌中的胞质再定位表达及其与预后的关系

目的：探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其与预后的关系。方法：采用组织微阵及免疫组化染色方法检测99例OSCC组织中HIPK2的表达,利用real-time PCR及细胞免疫荧光实验检测OSCC细胞系中HIPK2基因和蛋白表达水平。结果：HIPK2在99例OSCC组织的肿瘤中心、肿瘤前沿及淋巴结转移灶中表达显著高于癌旁正常上皮（P〈0.05）;肿瘤中心伴淋巴结转移比不伴淋巴结转移的表达低（P〈0.000 1）。HIPK2具有胞核阳性、胞核及胞质均阳性及仅胞质阳性3种表达模式,癌旁正常上皮主要表现为胞核阳性;肿瘤主要表现为胞核及胞质均阳性或仅胞质阳性。HIPK2的表达模式与患者临床分期及病理分级显著相关（P〈0.01）,而与性别及年龄无显著相关性（P〉0.05）。OSCC的总体生存率与HIPK2的表达模式有关,胞核及胞质均阳性、仅胞质阳性相对较强、仅胞质阳性相对较弱者的总体生存率依次降低（P=0.000 6）。HIPK2在OSCC细胞系中mRNA及蛋白的表达显著高于正常上皮细胞系（HIOEC）（P〈0.01）。结论：HIPK2在OSCC中表达升高,且以仅胞质阳性表达为主。HIPK2的表达及胞质再定位与OSCC的预后密切相关。