VHL基因与Von Hippel-Lindau病研究进展

VonHippel—Lindau（VHL）病是一种罕见疾病，发生率为1／36000，好发于多个器官，主要表现有视网膜和中枢神经系统的血管母细胞瘤、透明细胞型肾细胞癌、嗜铬细胞瘤（肾上腺肿瘤）、肾囊肿、胰腺肿瘤（浆液性囊腺瘤、胰腺神经内分泌肿瘤）、胰腺囊肿及内耳内淋巴囊性肿瘤和附睾囊腺瘤等。有VHL病特征性临床表现的患者中发现VHL基因胚系突变者超过95％，导致蛋白质截短的微插人或微缺失。随着VHL基因研究的深入，人们对VHL病有了更深入的认识。

3个VHL综合征家族的基因检测及临床调查

目的明确von Hippel-Lindau综合征(VHL综合征)家族基因突变及临床表现特点,筛查出家族内基因突变携带者行临床筛查,综合家族发病特点行家族健康指导。方法通过流行病学调查,共3例先证者临床诊断VHL综合征。抽取先证者及家族自愿者外周血,应用聚合酶链反应(PCR)体外扩增得到vhl基因片段,通过测序得到基因信息;再对家族内具有vhl基因突变的携带者进行头颅MRI、腹部B超等对全身多系统行临床筛查;综合家族发病特点给出家族健康指导。结果 3例先证者均发现vhl基因发生突变,家族1中5例成员基因阳性,突变方式为外显子1 c.330C>A;家族2先证者外显子3488del C;家族3发现7例基因阳性者,突变方式为外显子1 c.233G>A。其中,家族成员1III3、3III1、3III4、3IV3确定为基因突变携带者,临床检查显示其中3例成员已发病,1III3表现为双肾多发囊肿,胰腺多发囊肿;3III1表现为胰腺多发囊肿;3III4表现为视网膜血管母细胞瘤、胰腺多发囊肿,视网膜血管母细胞瘤接受激光治疗。3IV3由于年龄较小,临床检查未见明显异常。所有基因携带者接受规范化随访。结论基因检测可早期确诊VHL综合征,临床上对vhl基因突变患者需进行严密随访,从而提高患者治疗效果、延长生存期或改善生活质量。

肾透明细胞癌VHL基因突变与CyclinD1过度表达的相关性

背景与目的:VHL基因突变与肾透明细胞癌发生关系密切,而CyclinD1基因通过促进细胞过度增殖,对肾透明细胞癌发生和发展起重要作用。本研究拟初步探讨肾透明细胞癌中VHL基因突变的状况及其与CyclinD1表达上升的相关性。方法:取50例肾透明细胞癌手术标本,抽提病变组织和癌周正常组织中的基因组DNA和总RNA。通过PCR扩增VHL基因各外显子序列并测序以及内切酶鉴定的方法,确定肿瘤组织中VHL基因突变的比率和具体位点。通过RT-PCR和Westernblot方法,检测相应肿瘤组织中CyclinD1的表达水平是否发生改变。结果:VHL基因序列检测结果表明,有42例(84.0%)肾透明细胞癌标本的VHL基因发生各种形式的突变,有12(24.0%)例甚至发生2种以上的基因突变。在57例VHL基因外显子突变中,1号外显子突变有17例(29.8%);2号外显子突变有26例(45.6%);3号外显子突变有14例(24.6%)。CyclinD1的表达水平在42例VHL基因发生突变的组织中均有不同程度的上升,达到正常对照组的2～10倍(3.91±1.54倍)(P<0.01),另8例表现为正常。结论:在肾透明细胞癌中存在各种VHL基因突变,导致CyclinD1过度表达。

血细胞VHL基因拷贝数变化与高原红细胞增多症易感相关性研究

目的探讨血细胞的VHL(Von Hippel-Lindau)基因拷贝数变化与高原红细胞增多症的易感性关系。方法分别取年龄、职业等相匹配的高原红细胞增多症患者(n=20)、健康对照组(n=20)的静脉血2 ml/人,提取DNA,通过定量PCR方法(染料法)检测血细胞的VHL基因的相对拷贝数。结果高原红细胞增多症病例组的VHL基因拷贝数显著低于对照组(P<0.05)。结论高原红细胞增多症患者的VHL基因的拷贝数较低,与高原红细胞增多症的发病相关。

内淋巴囊瘤的临床和VHL基因突变分析研究

目的观察内淋巴囊瘤的临床特点、影像学和听力学特征,探讨内淋巴囊瘤的VHL基因突变情况。方法经术后病理确诊、经过我院手术治疗的内淋巴囊瘤病人共4例(2男2女),中位年龄为40.5岁(15～62岁),整理该病例系列临床基本资料,以及影像学和听力学检查结果,进行VHL基因突变检测,术后随访6～35个月。结果三例患者中首发症状1例为患侧面瘫,3例为患侧单侧耳鸣,听力测试提示感音神经性听力下降。颞骨CT表现为内淋巴囊区类圆形膨胀性骨质破坏,局部呈虫蚀样。内耳MR表现为内淋巴囊区混杂T1长T2信号影,边缘呈分叶状,部分其内见液-液平面,病灶不均匀明显强化。病例3还发现肾脏下极占位(病理:肾透明细胞癌),结合内淋巴囊瘤,以及发现VHL第3外显子发生杂合缺失c.620_633del,导致p.Ala207GlyfsX44,最终确诊为von Hipple-Lindau(VHL)病,并给予遗传咨询。结论对临床上单侧耳鸣、听力下降的患者需考虑到内淋巴囊瘤的可能,它独立发生,或合并其他中枢神经系统或内脏病变,是VHL病的一个表现,需要进一步进行VHL基因突变检测和遗传咨询。

von Hippel-Lindau抑癌基因在散发性肾透明细胞癌中的突变及其意义

背景与目的：von Hippel-Lindau（VHL）基因是一种抑癌基因,其突变在肾透明细胞癌的发生发展中发挥重要的作用.本研究旨在了解VHL抑癌基因在中国人散发性.肾透明细胞癌中的突变特点,并探讨基因突变与肿瘤分期、病理分级等临床病理特征的关系.方法：应用聚合酶链反应（PCR）、双向测序方法检测72例散发性肾透明细胞癌患者肾癌组织及正常肾组织中VHL抑癌基因的突变情况.结果：72例肿瘤组织中检测出VHL抑癌基因突变25例,突变率为35%.其中移码突变13例,错义突变8例,无义突变3例,同义突变l例.第1外显子6例,第2外显子5例,第3外显子12例,内含子区2例.25例突变中,6例突变位于密码子157～166区域.VHL抑癌基因突变与肿瘤分期、分级等临床病理指标无关（P＞0.05）.结论：中国人散发性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因突变率较低,突变主要位于第3外显子,该外显子区可能存在一个突变热点区域.VHL抑癌基因突变与肿瘤分期、分级等临床病理指标无关,是肾透明细胞癌发生发展的早期遗传事件.

非遗传性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因的突变及其意义

目的 :探讨国人非遗传性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因的突变及其意义。分析希佩尔林道 (vonHippel Lindau ,VHL)抑癌基因突变与肾癌分期分级的关系。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)、变性高效液相色谱 (DHPLC)以及DHPLC阳性者进行直接测序的方法 ,分析了 5 7例非遗传性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因突变的情况。结果 :发现 30例VHL基因突变 ,突变率为 5 3%。这些突变主要发生在第 1 ,2 ,3号外显子的后 1 / 3区 ,其中 1 3例缺失 ,2例插入 ,1 5例误义突变。结论 :国人非遗传性肾透明细胞癌中存在VHL基因的突变 ,且与患者年龄 ,肿瘤分期。

肾细胞癌与VHL基因突变的研究进展

泌尿外科医师面临的重要肿瘤之一是肾细胞癌(RCC)。VHL基因是一个典型的抑癌基因,它在RCC中的突变引起了人们的关注。RCC中普遍存在着VHL基因突变、杂合性缺失(LOH)及甲基化。p VHL是VHL的基因产物。泛素连接酶的组成成分之一就是p VHL,它在细胞的增殖、凋亡和癌细胞的浸润、转移中起到了巨大的作用。作者就RCC中VHL基因的突变及其分子机制,以及VHL靶向治疗在临床中的应用作一综述。

肾透明细胞癌中VHL基因改变和趋化因子受体CXCR4的表达及相关性

目的研究肾透明细胞癌(CCRCC)组织中Von Hippel-Lindau(VHL)基因改变和趋化因子受体CXCR4的表达及其相关性,探讨VHL基因在CCRCC中的作用。方法分别采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析、微卫星法、DNA甲基化特异性PCR和半定量逆转录PCR检测35例CCRCC和20例正常肾组织中VHL基因突变、杂合性缺失(LOH)、异常甲基化及CXCR4 mRNA的表达。结果VHL基因在CCRCC和正常肾组织中的改变率分别为74.29%、5.0%,二者的差异有统计学意义(χ2=24.45,P<0.01);VHL基因改变与CCRCC的临床分期、淋巴转移等密切相关(χ2=4.05、5.18,P均<0.05),而与患者性别、年龄、病理分级、肿瘤大小等均无相关性(P>0.05)。CXCR4 mRNA在CCRCC中的表达率为77.14%,显著高于正常肾组织的5.0%;CXCR4的表达与CCRCC的病理分级、淋巴转移密切相关(χ2=7.35、4.24,P均<0.05),而与其他临床病理特征等均无相关性。相关性检验表明CCRCC中VHL基因改变与CXCR4的表达密切相关(χ2=3.89,P<0.05)。结论VHL基因突变和LOH导致其失活是CCRCC发生的重要分子机制,VHL基因和CXCR4可作为判断CCRCC预后的重要参考指标,并可负向调节CXCR4的表达。

人VHL基因真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的抑制

目的:构建人抑癌基因VHL的真核表达载体,并验证其对肿瘤细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人VHL基因,将其克隆到p XJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染人胚肾293T细胞,通过蛋白免疫印迹鉴定其表达;转染人乳腺癌ZR75-1细胞和肝癌Hep G2细胞,通过CCK8法测定细胞生长曲线。结果:从人乳腺文库中扩增得到约650 bp的DNA片段,并克隆至p XJ-40-myc载体上,且测序与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,蛋白免疫印迹检测到相对分子质量为26×103的目的基因表达产物;细胞生长曲线显示,转染myc-VHL的乳腺癌、肝癌细胞较空载体细胞生长慢。结论:构建了myc-VHL真核表达载体,myc-VHL抑制癌细胞生长,为进一步研究VHL在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。

肾透明细胞癌VHL基因和CD44v6表达及预后价值

目的 探讨vonHippel Lindau(VHL)基因和CD4 4v6与肾透明细胞癌 (CCRCC)分级、分期和预后及两者关系。 方法 采用免疫组化EnVision法检测 5 8例CCRCC标本中VHL基因和CD4 4v6的表达 ,比较两者同Fuhrman分级、病理分期和预后的关系及两者之间的关系。结果 VHL基因表达阳性率为 5 6 9% (33/5 8) ,为胞质染色 ;CD4 4v6表达阳性率为 4 4 8%(2 6 /5 8) ,为细胞膜染色。两者表达与病理核分级 (P <0 0 0 1)和患者生存率 (P <0 0 0 1和P <0 0 1)均相关。与病理分期无关 (P >0 0 5 )。两者相互之间也相关 (P <0 0 0 1)。结论 VHL基因和CD4 4v6表达可能在CCRCC进展中发挥作用 ,并为判断预后提供了有用的信息。

VHL基因研究与中枢神经系统血管网状细胞瘤

希佩尔-林道病(Von Hippel-Lindau,VHL)是一种常染色体显性遗传病,以发生中枢神经系统和其他内脏器官多系统肿瘤为特征。VHL基因是重要的肿瘤抑制基因,VHL基因突变导致VHL蛋白及pVHL-ElonginC-Elongin B-Cul2复合物形成障碍,引起形成富血管肿瘤重要步骤的缺氧诱导因子功能障碍,导致肿瘤发生。发生中枢神经系统血管网状细胞瘤是VHL病中的常见事件。

家族性中枢神经系统血管母细胞瘤VHL基因突变与临床预后分析

目的探讨汉族人家族性中枢神经系统血管母细胞瘤(HB)的临床特点及家系表现和VHL基因突变的关系。方法回顾性分析9个家族15例经手术和病理证实的HB患者进行临床分析。对长期随访的7个家族中的12例患者和15例相关家族成员抽取外周血进行VHL基因测序。对于测序阴性的患者,对其DNA进行三个外显子实时定量PCR测定。结果本组15例HBs中,多发性肿瘤10例,共34个肿瘤。进行开颅和脊髓手术17次,共切除HB22个。基因测序发现在4种点突变。通过实时定量PCR发现2个家族外显子1大片段缺失。在未发病家族成员中检出携带者3例。随访期间发现2例复发和3例新生的HB,主要集中在移码突变和拼接错误的家族中。通过再次手术和对脑干HB进行γ刀治疗,效果较好。结论 VHL相关的HB易复发,并不断有新生HB出现。基因测序和实时定量PCR联合应用可以提高VHL基因突变的检出率。基因突变分析可有助于未发病基因突变携带者确诊,基因突变的分型有助于对患者的预后进行判断。

散发性肾透明细胞癌VHL基因突变的研究

目的了解散发性肾透明细胞癌组织中VHL(VonHippel-Lindau)基因突变率及其临床意义。材料与方法提取28例1998年4月~2000年1月间手术并获得病理诊断的散发性肾透明细胞癌及远离肿瘤的正常肾组织基因组DNA,采用单链构象多态性(SSCP)分析明确是否存在VHL基因有突变,分析VHL基因突变与肿瘤体积、分期、分级以及患者生存率等的关系。结果远离肿瘤的正常肾组织中未检测到VHL基因的突变,10例(35·7%)癌组织标本中存在VHL基因的突变。VHL基因的突变率在T1a与T1b^T3间存在显著差异(P=0·035),肿瘤最大径4cm及以下者VHL基因突变率显著高于4cm以上者(P=0·011)。伴随VHL基因突变的患者5年生存率为100%,不伴随VHL基因突变者5年生存率为83%。结论散发性肾透明细胞癌肿瘤组织中存在VHL基因突变,VHL基因突变较多发生于肿瘤的早期,VHL基因突变可能是肾透明细胞癌的有利预后因素。

2个Von Hippel-Lindau病家系调查及基因突变检测

目的:探讨汉族人Von Hippel-Lindau(VHL)病临床特征及VHL基因变异情况。方法:调查2个VHL病家系临床资料,分别绘制树状图;抽取2个家族共30位成员外周血,提取基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增VHL基因片段并测序。将所得突变类型与人类基因突变数据库核对。结果:2个家系均以中枢神经系统血管网状细胞瘤为主要表现(13/15),部分患者呈现多脏器损害。2个家系发病年龄16～47岁,外显率为30.6%(15/49),男性发病较女性多见(13:2),术后平均6.7年复发(2～17年)。家系1共29人,4位患者及3位家族成员VHL基因第716位核苷酸G突变为C,导致第168位编码氨基酸由丝氨酸变为苏氨酸;家系2共20人,1位患者及2位家族成员VHL基因第559位核苷酸C突变为G,导致第116位编码氨基酸由亮氨酸变为缬氨酸。结论:VHL病是一种常染色体显性遗传疾病,VHL基因检测在早期发现无症状患者和致病基因携带者及对该病家族成员进行筛查方面起着重要作用。

肝癌VHL基因突变的研究

目的:研究肝癌VHL基因突变以及其与血管内皮生长因子、微血管密度等临床病理特征之间的关系。方法:取30例肝癌标本;设计一对引物覆盖VHL第二外显子,RT-PCR加DNA序列测定分析其中10例VHL基因,分析HCC与VHL突变的关系,比较有无VHL基因突变的HCC其VEGF、MVD及临床病理特征的差异。结果:10例HCC标本,3例发生VHL基因突变(30%);与未发生VHL基因突变7例HCC相比,VHL突变肝癌VEGF、MVD均增高(P<0.05);临床病理分析显示VHL基因突变HCC病理分级较高(P<0.05)。结论:肝癌VHL突变率约30%;其突变与其临床病理特点有关,VHL突变肝癌有较高的恶性和侵袭性。

散发内淋巴囊瘤VHL基因位点微卫星标志杂合性丢失的研究

目的 探讨散发内淋巴囊瘤发病与VHL基因异常之间的关系。方法 采用组织微切割技术和多聚酶链式反应等方法对3例散发内淋巴囊瘤肿瘤细胞VHL基因位点染色体微卫星标志的杂合性丢失进行分析。结果 3例散发内淋巴囊瘤中有2例发生VHL基因位点微卫星标志的杂合性丢失,进一步的研究证实,该两例肿瘤细胞中分别存在着VHL基因第二外显子的异常。结论 VHL基因的异常导致其功能改变不但是VHL的致病原因,而且是散发性内淋巴囊瘤发病的重要的基因遗传学基础。

VHL肿瘤抑制基因及其突变的检测

目的：研究ｖｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ Ｌｉｎｄａｕ（ Ｖ Ｈ Ｌ）肿瘤抑制基因的突变。方法：提取外周血白细胞核酸，应用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ）方法和自动化测序仪检测 Ｄ Ｎ Ａ 序列，判别 Ｖ Ｈ Ｌ基因外显子的突变。结果：对１３ 例 Ｖ Ｈ Ｌ患者或有家族史者检测，发现４ 例有突变，突变类型有碱基插入、置换和无意义变异。结论：本组受测者的基因突变主要是碱基简单变异。

希佩尔-林道抑癌基因(VHL)在胚胎和胎盘发育中的作用

希佩尔-林道抑癌基因(VHL)得名于Von Hippel-Lindau病,由VHL突变引起的一种常染色体显性遗传的家族性肿瘤综合征,VHL编码蛋白pVHL,其生理功能与多个生殖事件有关。pVHL调控胎盘的血管生成,缺乏VHL表达的小鼠妊娠早期胚胎死亡。本文综述了VHL在胚胎和胎盘发育中的作用。

血管网织细胞瘤中VHL基因突变与异常甲基化检测

目的 :了解血管网织细胞瘤中VHL基因的突变与异常甲基化。方法 :采用PCR SSCP法检测血管网织细胞瘤中VHL基因的突变率及甲基化 ,敏感限制性内切酶消化法检测血管网织细胞瘤中VHL基因的异常甲基化率。结果 :34例血管网织细胞瘤标本中 ,VHL基因突变率为 6 4 7% ,VHL基因异常甲基化率为 2 3.5 % ,2例同时存在突变与异常甲基化。结论 :VHL基因突变及异常甲基化导致其失活是血管网织细胞瘤发生中的一个经常性事件。