von Hippel-Lindau抑癌基因在散发性肾透明细胞癌中的突变及其意义

背景与目的：von Hippel-Lindau（VHL）基因是一种抑癌基因,其突变在肾透明细胞癌的发生发展中发挥重要的作用.本研究旨在了解VHL抑癌基因在中国人散发性.肾透明细胞癌中的突变特点,并探讨基因突变与肿瘤分期、病理分级等临床病理特征的关系.方法：应用聚合酶链反应（PCR）、双向测序方法检测72例散发性肾透明细胞癌患者肾癌组织及正常肾组织中VHL抑癌基因的突变情况.结果：72例肿瘤组织中检测出VHL抑癌基因突变25例,突变率为35%.其中移码突变13例,错义突变8例,无义突变3例,同义突变l例.第1外显子6例,第2外显子5例,第3外显子12例,内含子区2例.25例突变中,6例突变位于密码子157～166区域.VHL抑癌基因突变与肿瘤分期、分级等临床病理指标无关（P＞0.05）.结论：中国人散发性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因突变率较低,突变主要位于第3外显子,该外显子区可能存在一个突变热点区域.VHL抑癌基因突变与肿瘤分期、分级等临床病理指标无关,是肾透明细胞癌发生发展的早期遗传事件.

宫颈癌组织中癌基因c-myc与抑癌基因p16的对比分析

背景与目的:原癌基因的激活和抑癌基因的失活是许多肿瘤发生的机制;c-myc与p16的异常表达是否共同参与宫颈癌的发生、发展,以及两种基因的表达与宫颈癌细胞对化疗药物反应的相关性均未明确。本研究旨在探讨c-myc与p16在宫颈癌发生、发展中的作用及其与化疗的关系。方法:采用原位分子杂交技术,用地高辛标记探针检测37例宫颈鳞癌组织(其中11例为化疗后组织)、21例癌前病变组织及5例正常宫颈组织中c-mycmRNA与p16mRNA的表达情况,并用图像分析仪对阳性信号的灰度值作定量分析。结果:正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervicalintraepithelialneoplasia,CIN)组织、宫颈鳞癌组织中p16的表达率分别为100.0%、71.4%及21.6%(P=0.0001),c-myc的表达率分别为0%、42.9%、75.7%(P=0.0011),p16及c-myc的表达在三组间差异均有统计学意义,c-myc表达强度随恶性程度的增高而增强,且CINⅢ级比CINⅡ级和CINⅠ级表达强,化疗前c-myc表达率比化疗后高,c-myc与p16的表达呈负相关(rs=-0.907)。对化疗敏感者与不敏感者的c-myc和p16表达均无显著性差异。结论:癌基因c-myc的过表达与抑癌基因p16的失表达在宫颈癌的发生、发展过程中可能起着重要的作用;c-myc在不同级别CIN增生细胞中的表达变化趋势提示细胞癌变是一个渐进的过程。

抑癌基因PTEN与肿瘤血管生成研究进展

PTEN是具有磷酸脂酶活性的抑癌基因,是双特异蛋白磷酸酶家族(DSPs)的成员,同时具有脂质磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶活性。而在肿瘤增殖,侵袭,迁移的过程中,肿瘤血管生成作为肿瘤发生发展中一个关键因素已越来越受到人们的关注。抑癌基因PTEN可以参与PI3K/Akt信号通路,调控缺氧诱导因子1,基质金属蛋白酶,血管内皮生长因子,钠氢交换调控因子1等血管生成相关信号以及一些机体氧化产物来影响肿瘤血管生成。根据近年来PTEN基因与肿瘤血管生成关系最新研究信息,该文综述了其目前的研究现状。

抑癌基因PTEN和FHIT在口腔鳞癌中的表达及其与cyclin D1的相关性

目的检测抑癌基因PTEN、FHIT在正常口腔粘膜上皮和口腔鳞癌(OSCC)中的表达情况,并探讨其与cyclinD1的关系。方法采用免疫组化SP法检测62例OSCC中FHIT、PTEN、cyclinD1蛋白表达的情况,以12例正常口腔粘膜作对照。结果在正常口腔粘膜中PTEN均为强阳性表达(12/12),在OSCC中24.2%(15/62)表现为PTEN蛋白表达的缺乏或减少;而FHIT在正常口腔粘膜中也均为强阳性表达(12/12),在OSCC中17.7%(11/62)表现为FHIT蛋白表达缺乏或减少;cyclinD1在正常口腔粘膜中91.7%(11/12)表现为阴性或弱阳性表达,在OSCC中53.2%(33/62)表现为阳性或强阳性表达;PTEN与FHIT均为阳性或强阳性表达时,37.8%(28/74)cyclinD1表现为阴性或弱阳性,其中11例为正常口腔粘膜(占正常组的91.7%)。结论PTEN、FHIT在OSCC的发生过程中起着一定的作用;PTEN/FHIT的表达与cyclinD1有关,提示PTEN、FHIT能够下调cyclinD1的表达。

基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因

背景与目的:脑胶质瘤是神经系统常见肿瘤,其发病机制尚不清楚。本研究运用基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌候选基因,并探讨胶质瘤的分子生物学发病机制。方法:从人脑胶质瘤组织标本中提取mRNA,反转录成cDNA,然后采用基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因。结果:在肿瘤相关候选基因组克隆到人星形细胞内富含的磷酸蛋白PEA15(phosphoproteinenrichedinastrocytesof15)和酸性纤维蛋白生长因子(acidfibroblastgrowthfactor,aFGF)同源物等基因,在抑癌候选基因组克隆到干扰素诱导蛋白17和ndr2等。ndr2在正常脑组织中广泛表达,在胶质瘤组织内无表达。结论:ndr2基因是抑癌候选基因,可能在胶质瘤的发生中起一定作用。

抑癌基因APC启动子甲基化检测及其在肺癌诊断中的应用

目的 建立抑癌基因APC启动子部位甲基化的检测方法 ,并对肺癌临床样品进行初步检测研究。方法 :对肺癌组织提取的DNA及转甲基后的脐带血DNA进行化学修饰 ,以甲基化特异性引物进行基因扩增 (methylationspecificPCR ,MSP)和甲基化序列分析 (methylationsequencing ,MS)。结果 :经转甲基的人脐带血DNA样品MSP检测为阳性 ,其序列与预期相符 ,未经转甲基样品为阴性。 17例肺癌患者的肿瘤及其正常肺组织APC甲基化检测阳性率分别为 4 7% (8/ 17)和 18% (3/ 17) ,1例肺部良性肿瘤及其正常肺组织的检测结果均为阴性 ;对MSP检测为阴性的 9例肺癌患者肿瘤及其正常肺组织进行MS检测分析 ,有 4例APC启动子部位存在CpG甲基化。结论 :利用MSP和MS两种甲基化检测分析手段 ,对 17例临床确诊肺癌组织的检测总阳性率可达 71% (12 / 17)。MSP操作简便 ,价格低廉 ,可适合于大规模肿瘤患者样本的筛查 ;而对于MSP检测为阴性的临床样品 ,可以利用MS进行进一步的确认 ,为临床肺癌诊断提供更准确的信息。

一种新的抑癌候选基因——NDR2在人类正常组织及相应肿瘤中的表达

为观察NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布特点 ,收集人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织标本 ,分别进行组织石蜡切片和总RNA提取 ,应用免疫组化方法和RT PCR技术检测NDR2蛋白质及mRNA表达水平 ,并通过DNA测序验证PCR产物的正确性 .免疫组化结果表明 ,在上述各组织均有NDR2蛋白不同程度的表达 .RT PCR结果显示 ,在人脑和胶质瘤组织、肺与肺癌组织、胃与胃癌组织、结肠与结肠癌组织中均有NDR2mRNA表达 ,其表达水平以脑组织为最高 .NDR2mRNA在正常脑和肺组织的表达水平分别显著高于胶质瘤与肺癌组织 ,而结肠与结肠癌组织 ,胃与胃癌组织NDR2mRNA表达水平则无显著差别 .以上结果表明 ,NDR2基因可能广泛表达于人体正常组织内 ,而在胶质瘤与肺癌中的表达较相应正常组织减低 ,提示该基因可能与神经系统及呼吸系统肿瘤的发生发展有关 ,为进一步探讨该基因功能提供了线索 .

抑癌基因TCF21对肺癌细胞A549增殖、凋亡和迁移的影响

背景与目的转录因子21(transcription factor 21,TCF21)是新近发现的抑癌基因,其在多种肿瘤中具有抑癌功能,本研究旨在探讨TCF21基因对人肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法利用慢病毒转染技术在肺癌A549细胞中高表达TCF21基因,以荧光定量PCR、Western blot分析目的基因的表达,并采用Transwell、MTT法、流式细胞术检测TCF21高表达对A549迁移、增殖、凋亡的影响。结果成功在肺癌细胞株A549中高表达TCF21,且高表达TCF21后A549的细胞生长和迁移能力受抑制、凋亡率增高。结论抑癌基因TCF21可抑制A549细胞的增殖和迁移、诱导凋亡。

衰老过程中原癌基因及抑癌基因的表达谱

细胞衰老时增殖能力逐渐减退 ,实质细胞不断减少 ,是脏器功能衰退的原因之一。原癌基因及抑癌基因与细胞增殖调控密切相关 ,因而它们与细胞衰老的关系早已引起人们的关注。本文就此进行了概括介绍。总的看来 ,衰老时多数原癌基因表达降低 ,抑癌基因表达增强 。

牡蛎低分子活性肽BPO-L对人肺腺癌A549细胞周期和相关癌基因、抑癌基因表达的调控作用

采用酸抽提、凝胶柱层析等方法,从僧帽牡蛎体内分离提取到牡蛎低分子活性多肽组分BPO-L,以HMBA处理组为平行对照,流式细胞仪检测细胞周期变化及以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化.研究BPO-L对人肺腺癌A549细胞分化的生物学效应,探索其对肺癌细胞的作用机理.实验结果显示,BPO-L能有效抑制A549细胞增殖活动,促使细胞阻滞于G0/G1期.在此过程中,A549细胞c-myc,MTp53等癌基因蛋白表达减弱,p21WAF1/CIP1和Rb等抑癌基因蛋白表达活性的增强.本研究证实BPO-L对肺癌细胞具有显著的诱导分化作用.其诱导癌细胞分化机理与其调节和干预c-myc、MTp53等癌基因与p21WAF1/CIP1和Rb等抑癌基因的表达有关.

一种新的抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达及生物学意义(英文)

背景与目的:PTEN基因是新发现的一种抑癌基因,定位于人染色体10q23。它的缺失和突变可能构成一个新的信号转导途径,与人类恶性肿瘤的发生普遍相关。资料报道,肾细胞癌有抑癌基因PTEN的缺失和突变。但目前尚未见到关于抑癌基因PTEN在肾细胞癌中表达的研究,本实验研究抑癌基因PTEN在肾细胞癌的表达和生物学意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测5例正常肾组织、18例癌旁肾组织和40例肾细胞癌组织中抑癌基因PTEN的表达;分析抑癌基因PTEN的表达与肾细胞癌病理类型、淋巴结转移之间的关系。结果:5例正常肾组织和18例癌旁肾组织均有较强的PTEN蛋白的表达,正常肾组织和癌旁肾组织PTEN蛋白的表达强度、阳性细胞的分布形式无明显差异。肾小管上皮细胞的胞质呈PTEN蛋白阳性,免疫组化染色程度较强,肾小球无PTEN蛋白的表达。抑癌基因PTEN在肾细胞癌中的表达不同于正常肾组织和癌旁肾组织,12.5%呈PTEN蛋白阴性,17.5%呈弱阳性,70%呈阳性或强阳性。PTEN蛋白阴性、弱阳性和阳性的肾细胞癌,肾门淋巴结转移率分别为80%,51.74%,10.71%。PTEN蛋白阴性和弱阳性肾细胞癌的肾门淋巴结转移率与PTEN阳性者比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:本实验提示肾细胞癌中存在着抑癌基因PTEN的表达缺失和异常,可能与肾细胞癌的发生。

抑癌基因PTEN在胃癌及癌前病变中的缺失和突变

目的:探讨胃癌及癌前病变中抑癌基因PTEN的缺失和突变。方法:收集中国医科大学2001～2002年胃镜中心活检标本,萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生及对应的正常胃粘膜各30例,收集同期肿瘤外科术后大体标本,早期胃癌及进展期胃癌各30例,饱和氯化钠法提取组织DNA,PCR-SSCP变性聚丙烯酰氨凝胶电泳银染法检测PTEN杂合性缺失(LOH),PCR-SSCP测序法检测PTEN基因突变。结果:在胃癌癌前期病变萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生中,PTEN的杂合性缺失率分别为10%、10%、13.3%,在早期胃癌中,PTEN的杂合性缺失率为20%,进展期胃癌中PTEN的杂合性缺失率为33.3%,而PTEN基因突变在癌前期病变及早期胃癌中无1例出现,在进展期胃癌中出现比率为10%,而且所有发生PTEN基因突变的病例均为LOH阳性病例。结论:PTEN基因缺失或失活与胃癌的浸润和转移的关系更密切。

PTEN基因转染对粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2增殖的抑制作用

目的 :观察外源磷酸酶和张力蛋白同源物 (PTEN)抑癌基因对高转移性粘液表皮样癌细胞系M3 SP2 体外生长的影响。方法 :应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入M3 SP2 细胞 ,通过活细胞观察、细胞生长曲线、分裂指数和克隆形成率了解细胞生长状态。结果 :与亲本细胞比较 ,PTEN基因转染细胞数量减少、排列松散 ,部分细胞发生变性或崩解 ;细胞生长缓慢 ,分裂指数显著减至 16 2‰ (P <0 0 1) ,细胞群体倍增时间明显延长 (31 74h) ,细胞生长抑制率达 5 7 0 5 %～ 71 46 % (P <0 0 0 1) ;细胞克隆形成率为 10 40 %～ 14 93% ,克隆形成抑制率高达 6 5 %～ 72 %(P <0 0 1)。结论 :外源野生型PTEN抑癌基因能显著抑制高转移性粘液表皮样癌细胞系M3 SP2

PTEN抑癌基因转染粘液表皮样癌细胞系M_3SP_2的建立和鉴定

目的 :为了研究外源性基因PTEN对粘液表皮样癌细胞生物学行为的影响 ,建立稳定表达PTEN的粘液表皮样癌细胞系。方法 :应用脂质体介导方法将野生型PTEN基因导入高转移性粘液表皮样癌细胞系M3 SP2 ,嘌呤霉素筛选阳性克隆 ,用免疫印迹法和ABC免疫酶染色法检测转染细胞中PTEN蛋白的表达。结果 :野生型PTEN基因成功地导入细胞M3 SP2 ,转染细胞稳定表达PTEN蛋白 ,PTEN蛋白分布于细胞质。结论 :M3 SP2 细胞能稳定表达外源性基因PTEN。

胃癌及其有关病变的幽门螺杆菌感染与抑癌基因表达的相关性研究

背景与目的:幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)是确定的胃癌致癌因子,但其致癌的确切机制仍不清楚。p53、p21WAF1、p16为主要的细胞周期负调控基因。本研究旨在探讨胃癌及其有关病变中,上述3种抑癌基因的作用及其与幽门螺杆菌感染的关系。方法:应用HID-AB(pH2.5)-PAS、SP免疫组化染色及Warthin-Starry染色,对65例慢性萎缩性胃炎(chronicatrophicgastritis,CAG),93例肠上皮化生(intestinalmetaplasia,IM),94例胃上皮不典型增生(gastricepithelialdysplasia,GED)及60例胃癌(gastriccarcinoma,GC)中3种抑癌基因表达和幽门螺杆菌感染情况进行检测。结果:在胃癌发生的不同阶段,p53阳性表达率随病变发展而升高,在CAG、IMⅠ～Ⅱ、IMⅢ、GEDⅠ级、GEDⅡ～Ⅲ级及GC中分别为0、1.64%、6.25%、5.45%、23.08%、70.00%。p21WAF1和p16阳性表达率随病变发展而降低,p21WAF1阳性表达率分别为100%、95.08%、100%、100%、71.79%、45.00%,p16阳性表达率分别为83.08%、81.97%、78.13%、89.09%、69.23%、40.00%。三者表达在GEDⅡ～Ⅲ与GEDⅠ组间、GC与GEDⅡ～Ⅲ组间的差异均具有显著性(P<0.05)。同一病变中,Hp感染阳性组p53、p21WAF1及p16阳性表达率虽然高于Hp阴性组,但差异无显著性(P>0.05)。结论:p53突变及p21WAF1。

中药白龙片与HMBA对人胃癌不同周期细胞癌基因与抑癌基因表达调控的共性研究

目的 :探讨复方中药白龙片与环六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)对人胃癌 (MGC80 3)细胞不同周期时相细胞癌基因c H ras、c myc ,抑癌基因Rb、p53和 p2 1以及PKC α基因表达的影响。 方法 :采用Northern印迹法检测基因表达情况。结果 :MGC80 3细胞不同周期时相用中药白龙片或HMBA处理 ,癌基因c H ras和c myc的表达下降 ,多数周期的抑制率达 50 0 %以上 ;促增殖的信使激酶亚类PKC α基因的表达基本与癌基因表达抑制相似。两类药物对抑癌基因的影响则有显著差异。HMBA处理细胞后 ,Rb与 p2 1在G1期的表达不是增加而是下降 ,抑制率分别为 39 5%和 33 3% ,Rb在S期也抑制 3 0 %。而中药白龙片对Rb与 p2 1作用在各个周期内均是促进表达的作用 ,有的周期升高 1～ 2倍以上。但是中药白龙片对抑癌基因 p53的表达作用和HMBA都很近似 ,各个周期都有显著增加 ,多数时相达 12 5 0 %～ 2 33 4 %。 结论 :( 1)中药白龙片对癌基因和抑癌基因的调节作用基本与诱导分化剂HMBA相似 ,但中药白龙片的作用优于HMBA。 ( 2 )中药白龙片或HMBA对MGC80 3细胞增殖抑制和促分化作用的分子机理和两类药物对细胞周期内癌基因与抑癌基因调节相关。

8一甲氧基补骨脂素对MEC-1细胞癌基因/抑癌基因表达的影响

目的：研究8-甲氧基补骨脂素（8－MOP）对MEC－1细胞部分基因表达的影响。方法：细胞贴壁后用30％细胞生长抑制浓度的药物处理120h，常规制备标本，ABC法免疫组织化学杂色。结果：药物处理后细胞P16和nm23－H1蛋白表达强度增强，而CDK4和H－ras蛋白表达强度减弱。结论：8－MOP可以调节MEC－1细胞部分基因的表达，从而可能影响细胞相关的生物学特性。

成纤维细胞生长因子对烫伤大鼠原癌基因和抑癌基因蛋白的影响

目的 :观察外用碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对大鼠深 度烫伤创面愈合过程中增殖细胞核抗原 (PCNA)、p5 3、原癌基因 c m yc和 caspase 3的影响 ,初步认识增殖与凋亡活动对创面愈合的作用。方法 :74只 Wistar大鼠随机分为正常对照、单纯烫伤和 b FGF治疗 3组。利用大鼠 30 %总体表面积深 度烫伤模型 ,于伤后 3、6小时及 1、3、7和 14日采取创面皮肤标本 ,采用免疫组织化学染色技术检测创伤组织真皮内成纤维细胞 PCNA、p5 3、c m yc和 caspase 3蛋白的表达变化情况。结果 :烫伤大鼠创面中成纤维细胞的增殖与凋亡活动与 p5 3、c myc蛋白表达有一定的关系 ;局部外用 b FGF对成纤维细胞的增殖等活动产生影响。结论

膀胱癌相关蛋白基因对HeLa细胞增殖的抑制作用

背景与目的:通过癌基因与抑癌基因的基因分类表达芯片筛选发现,在宫颈癌组织中,膀胱癌相关蛋白基因(bladdercancerrelatedprotein,BLCAP)表达降低最为明显。提示该基因可能与宫颈癌发生相关。本研究旨在探讨该基因对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测54例宫颈癌组织和25正常宫颈组织中BLCAP基因的表达情况。制备BLCAP全长cDNA并克隆到真核表达载体pLXSN上,稳定转染至宫颈癌细胞系HeLa中,细胞计数方法和克隆形成实验观察稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞的细胞形态、细胞增殖及集落形成能力;利用DNAladder检测BLCAP基因引起HeLa细胞凋亡情况;裸鼠体内抑瘤实验观察BLCAP基因的抑瘤作用。结果:BLCAP在宫颈癌组织中不表达或低表达,与正常宫颈组织相比明显降低;转染BLCAP基因的HeLa细胞倍增时间为69.4h,较未转染HeLa细胞(27.5h)和转染空载体的HeLa细胞(30.2h)明显延长,差异有显著性(P﹤0.05);细胞同步对比实验显示,转染BLCAP基因的HeLa细胞的克隆形成率明显低于未转染HeLa细胞(t=5.98,P<0.01)和转染空载体的HeLa细胞(t=4.69,P﹤0.01);HeLa细胞在转染BLCAP基因后出现了DNA梯形条带。将转染BLCAP基因的HeLa细胞、转染空载体的HeLa细胞和未转染的HeLa细胞分别注射入BALB/c裸鼠体内,30天后处死动物,剥离肿瘤组织并称重,各组平均瘤重分别为1.015g、1.612g和1.530g,转染BLCAP基因的细胞抑瘤能力与两对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤病理切片结果显示,稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞所成肿瘤组织,癌组织被纤维组织包裹,边缘整齐,未侵犯肌层和脂肪组织,部分癌巢边缘癌细胞可见散在类似凋亡细胞的细胞群。而未转染质粒组及转染空载体pLXSN质粒组所成肿瘤组织癌组织突破肌层呈浸润性生长,癌巢边缘癌细胞病理性核分裂像多见。结论:BLCAP基因在宫颈癌组织中表达下调,对HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用,为宫颈癌相关候选抑癌基因。

胃癌中抑癌基因GKN1和p16的表达及意义

目的观察胃动蛋白1(gastrokine-1,GKN1)和p16蛋白在胃癌和正常胃组织中的表达,探讨二者表达与胃癌临床病理特征的关系,为获取胃癌诊断和预后相关的蛋白分子提供实验依据。方法应用免疫组化EliVision Plus法检测78例胃癌和30例正常胃黏膜中GKN1和p16蛋白的阳性率。结果正常胃黏膜组织和胃癌组织中GKN1的阳性率分别为93.3%与15.4%;正常胃黏膜组织和胃癌组织中p16的阳性率分别为96.7%和32.1%,GKN1和p16在胃癌组织中表达下调;GKN1表达与胃癌临床分期、Lauren分类和HP感染有关(P<0.05),p16蛋白表达与胃癌临床分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 GKN1和p16均为抑癌基因,二者在胃癌中的表达缺失均与胃癌的发生密切相关。