布托啡诺通过Hippo/YAP信号通路影响骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨布托啡诺(BPH)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关的作用机制。方法:将MG-63细胞分为对照组、YAP抑制剂组(维替泊芬组)和BPH低、中、高浓度组,MTT法、克隆形成实验、FCM术、划痕愈合实验、Transwell实验、qPCR法、WB法和移植瘤实验分别检测处理后各组细胞的增殖活性、克隆形成数、细胞凋亡率、划痕愈合率,以及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达和YAP、TAZ蛋白的表达,同时观察BPH和维替泊芬对移植瘤生长的影响。结果:与对照组相比,维替泊芬组和BPH低、中、高浓度组细胞增殖活性、克隆数、划痕愈合率、侵袭细胞数,以及N-cadherin和vimentin m RNA水平、YAP和TAZ蛋白表达及移植瘤体积均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin mRNA水平及对移植瘤的抑瘤率均升高(均P<0.05),且BPH高浓度组与维替泊芬组之间各项指标均无明显差异(均P>0.05)。结论:BPH可能通过抑制Hippo/YAP信号通路来抑制OS细胞MG-63增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA LINC-PINT通过Hippo/YAP信号通路在缺氧诱导的头颈部鳞状细胞癌药物敏感性中的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA LINC-PINT通过Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路在缺氧诱导的头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)药物敏感性中的作用。方法 CCK-8法检测低氧环境中HNSCC细胞系(AGZY-973、HN4和HN30细胞)及正常人口腔角质形成细胞(NHOKs)增殖变化;取状态较好的HN30细胞,设置为正常组、低氧组、低氧+LINC-PINT过表达组、低氧+过表达阴性对照组。qRT-PCR检测HN30细胞中LINC-PINT表达水平;CCK-8法检测HN30细胞的药物敏感性及顺铂对HN30细胞增殖影响;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测HN30细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、p-YAP、YAP蛋白表达水平。结果 在低氧条件下,AGZY-973细胞、HN4细胞和HN30细胞增殖率较NHOKs细胞显著增加(P<0.05)。与正常组相比,低氧组HN30细胞IC50值、HIF-1α、p-YAP/YAP表达显著增加,细胞凋亡率、24 h和48 h细胞生长抑制率、LINC-PINT表达水平显著降低(P<0.05);与低氧+过表达阴性对照组相比,低氧+LINC-PINT过表达组HN30细胞IC50值、HIF-1α、p-YAP/YAP表达显著降低,细胞凋亡率、24 h和48 h细胞生长抑制率、LINC-PINT表达水平显著增加(P<0.05)。结论 过表达LINC-PINT可提高缺氧诱导的HNSCC顺铂敏感性,可能与抑制Hippo/YAP信号通路的激活有关。

circ_0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/YAP信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖迁移和侵袭

目的:探究circ-0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/Yap信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:RT-PCR检测HIOEC、Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414表达。将未转染任何质粒的SCC-9细胞设为Control组;将分别转染pcDNA-circ-0086414、pcDNA-NC、miR-155-5p inhibitor、miR-NC inhibito质粒的SCC-9细胞中,并设为pcDNA-circ-0086414组、pcDNA-NC组、miR-155-5p组、miR-NC组;将pcDNA-circ-0086414质粒转染于SCC-9细胞中,同时在培养基中加入5μmoL/L Verteporfin共同培养,设为Verteporfin组。RT-PCR检测细胞中circ-0086414、miR-155-5p表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测细胞中Lats1、p-Lats1、YAP、p-YAP蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验验证circ-0086414和miR-155-5p的靶向关系。结果:和人永生化口腔上皮细胞HIOECcirc-0086414(1.00±0.10)、miR-155-5p(1.00±0.09)相比,口腔鳞癌细胞株Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414(0.73±0.07)、(0.51±0.05)、(0.36±0.03)表达明显降低,miR-155-5p(1.36±0.11)、(1.57±0.13)、(1.89±0.15)表达明显升高(P<0.05);且SCC-9细胞中circ-0086414表达和miR-155-5p表达变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞中circ-0086414表达(1.26±0.12)明显升高,miR-155-5p组细胞中miR-155-5p表达(0.73±0.07)明显降低(P<0.001)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞增殖、侵袭(123.56±5.87)和迁移(16.90±1.62)能力均明显降低(P<0.05);和pcDNA-circ-0086414组相比,Verteporfin组细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增加(P<0.05)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞中Last1(1.12±0.10)、p-Last1(1.49±0.12)、p-YAP(1.41±0.11)蛋白表达明显增加,YAP蛋白(0.45±0.04)表达明显降低(P<0.001);和pcDNA-circ-0086414组相比,Verteporfin组细胞中Last1(0.61±0.06)、p-Last1(0.82±0.08)、p-YAP蛋白(0.58±0.05)表达明显降低,YAP蛋白(0.93±0.09)表达明显升高(P<0.001)。野生型circ-0086414(circ-0086414-WT)miR-155-5p组(0.26±0.03)荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.05)。结论:过表达circ-0086414可抑制口腔鳞癌SCC-9细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制和抑制miR-155-5p表达,激活Hippo-Yap信号通路相关。

Hippo/YAP信号通路与细胞增殖相关信号通路交叉作用的研究进展

Hippo/YAP信号通路首次被发现于果蝇中,在哺乳动物中具有高度保守的特性,可通过直接或间接地调节细胞增殖、程序性细胞死亡以起到平衡机体内环境稳态、维持器官大小的作用。YAP作为Hippo信号通路中的一个转录共激活因子,与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)、Wnt/β-联蛋白、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2等通路中相关分子相互作用,使得Hippo通路与其他增殖调控相关信号通路形成"交通",构成一个复杂的信号通路网,共同调控细胞的增殖。本文就目前对Hippo信号通路中共激活因子YAP与增殖调控信号通路间的交叉影响及其机制的研究进展作一综述。

Hippo/YAP信号通路与细胞代谢信号通路之间交叉调控的研究进展

细胞的代谢活动对细胞的生长和分化以及机体内环境的稳定具有重要意义。Hippo/yes相关蛋白(YAP)信号通路由一系列保守激酶构成,在物种进化过程中极少发生突变。Hippo/YAP信号通路可通过调控细胞内葡萄糖、氨基酸和脂肪等代谢,影响细胞增殖和凋亡,从而维持机体内环境稳态。Hippo/YAP还可以通过与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、腺苷酸活化蛋白激酶及低氧诱导因子等信号通路之间交叉作用,共同调控细胞代谢活动。本文通过总结Hippo/YAP信号通路与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、腺苷酸活化蛋白激酶及低氧诱导因子信号通路之间的交叉调控机制,以阐述Hippo/YAP信号通路对细胞代谢活动的影响。

尼可地尔对肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移能力和Hippo/YAP信号通路的影响

目的:体外评价尼可地尔对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖、迁移能力和Hippo/YAP信号通路的影响。方法:将人原代PASMCs分为正常对照组、模型组和尼可地尔低、中、高浓度组(50、100、200μmol/L),每组设3个复孔。除正常对照组外,其余各组细胞均接种在凝胶包被的培养板上,模拟肺动脉高压环境,以建立肺动脉硬化(AS)细胞模型;随后,各药物组加入相应药物,正常对照组和模型组加入同等体积生理盐水,培养48 h。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力(以光密度计),Transwell方法检测细胞迁移能力,实时定量聚合酶链式反应技术检测细胞中YAP靶基因子[结缔组织生长因子(CTGF)、双向调节蛋白(AREG)]mRNA的表达水平,Western blotting法检测细胞中CTGF、AREG蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞的光密度显著升高,每视野迁移细胞数显著增加,细胞中CTGF、AREG m RNA及蛋白的表达水平均显著增强(P<0.01)。与模型组比较,尼可地尔低、中、高浓度组细胞的光密度、每视野迁移细胞数和细胞中CTGF、AREG mRNA及蛋白的表达水平均显著降低,且成浓度依赖性(P<0.05或P<0.01)。结论:尼可地尔可抑制AS模型PASMCs的增殖和迁移,其作用机制可能与抑制Hippo/YAP信号通路有关。

肌动蛋白样6A抑制Hippo/YAP信号通路促进肺腺癌细胞对顺铂的耐受

肌动蛋白样6A(actin-like 6A,ACTL6A),又被称为BAF53A,是组成染色质重构复合体SWI/SNF亚基之一,在细胞干性维持中发挥关键作用。近期研究发现,ACTL6A在肿瘤发生发展中起重要作用,但ACTL6A在顺铂耐药中的功能尚不明确。本文探讨了ACTL6A在肺腺癌细胞干性维持及顺铂耐药中的生物学功能和分子机制。首先,通过TCGA、GEO和GEPIA数据库分析发现,ACTL6A在肺腺癌组织及顺铂耐药细胞中高表达(P<0.05),且其高表达与肺腺癌患者的不良预后正相关。细胞生物学结果显示,敲低ACTL6A表达显著增强A549细胞对顺铂的敏感性(P<0.01),降低肿瘤干细胞成球数量(P<0.01),抑制细胞迁移(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.001)。蛋白质免疫印迹结果显示,敲低ACTL6A可使上皮标志物E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达增加,间质标志物N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Twist表达水平降低,逆转细胞发生上皮间质转化。同时,敲低ACTL6A后肿瘤干细胞标志物ALDH3A1、ALDH4A1、SOX2、OCT4和Nanog表达水平降低。进一步对Hippo/YAP信号通路相关蛋白质进行分析,结果表明,敲低ACTL6A表达后,Hippo信号通路中的beta-TRCP、YAP表达降低,但YAP磷酸化(s127和s397)表达增加,导致YAP进入细胞核减少,不能诱导相关基因表达。综上所述,ACTL6A抑制Hippo信号通路激活,维持肿瘤干细胞干性,促进A549细胞发生顺铂耐药。

ALA-PDT通过HIPPO/YAP信号通路抑制人HSAS1细胞活力和细胞因子分泌

目的探讨光动力疗法(ALA-PDT)对人HSAS1成纤维细胞活力和细胞因子分泌的作用及机制。方法ALA-PDT作用HASA1细胞,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA定量试剂盒和Western blot检测TGF-β和VEGF蛋白表达水平的变化;qRT-PCR和Western blot检测YAP、TAZ和LATS1的mRNA和蛋白表达水平的改变。同时,加入YAP抑制剂HY-111249或过表达YAP,观察对ALA-PDT处理HASA1细胞的影响。结果CCK-8法活力实验、ELISA、Western blot和qRT-PCR显示,与Blank组相比,5J ALA-PDT组、10J ALA-PDT组、20J ALA-PDT组细胞活力显著降低(P<0.05),TGF-β和VEGF蛋白表达水平显著降低(P<0.05),YAP和TAZ的mRNA和蛋白表达水平显著下降,LATS1的mRNA和蛋白表达水平显著升高。YAP抑制剂HY-111249可增强ALA-PDT对HSAS1成纤维细胞活力和细胞因子分泌的抑制作用,过表达YAP逆转了ALA-PDT对HSAS1成纤维细胞的抑制作用。结论ALA-PDT可显著抑制人成纤维细胞系HASA1的活力与细胞因子分泌能力,其机制可能与调控Hippo通路关键蛋白YAP和TAZ的表达相关。该研究为ALA联合PDT治疗痤疮疗效提升和改善痤疮的预后提供了一个新的思路和实验理论依据。

Hippo/YAP信号通路在神经系统中的作用及机制研究进展

Hippo信号通路高度保守,由一系列激酶级联反应构成,主要通过下游效应分子YAP(Yes-associated protein)/TAZ(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)转录辅激活因子调控细胞增殖、凋亡和分化等活动,从而控制器官大小和组织发育稳态。在正常发育情况下,神经细胞数目、空间分布的精准调控对于大脑发育至关重要。近年来研究发现,Hippo/YAP信号通路在神经干细胞增殖分化、神经元前体细胞增殖、胶质细胞分化和激活、髓鞘化发育以及神经系统疾病的发生发展等方面发挥重要作用。因此,有必要对该信号通路在神经系统中的作用和机制进行深入系统地研究。本文对Hippo/YAP信号通路在神经系统中的最新研究进展进行了综述,以期为神经系统发育和神经损伤疾病的治疗提供理论基础。

Hippo/YAP信号通路调控蛋白ACAN作为新型肝细胞肝癌血清肿瘤标志物的研究

目的探讨Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路调控蛋白——聚蛋白聚糖(ACAN)诊断肝细胞肝癌(HCC)的价值。方法检测156例HCC患者、33例乙型肝炎患者、31例丙型肝炎患者、30例肝硬化患者、26例结肠癌患者、19例肺癌患者、22例胃癌患者、20例乳腺癌患者及100名体检健康者(正常对照组)的ACAN水平。将过表达YAP载体、YAP-shRNA慢病毒质粒转染肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721。将过表达环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、TEA域家族成员(TEAD)、α珠蛋白转录因子CP2(TFCP2)、Runt相关转录因子2(RUNX2)载体分别单独转染及与YAP共转染Bel-7402和SMMC-7721细胞,检测ACANmRNA的表达,评价不同载体对ACAN野生型及突变型启动子的影响。同时评价ACAN和甲胎蛋白(AFP)对肝癌的诊断效能。结果 HCC组ACAN水平明显高于胃癌组、结肠癌组、乳腺癌组、肺癌组、乙型肝炎组、丙型肝炎组及正常对照组(P=0.000),而其他各组之间ACAN水平差异均无统计学意义(P>0.05)。过表达YAP后ACANmRNA表达量明显升高(P<0.01),而YAP敲除后ACANmRNA表达量明显降低(P<0.01)。与其他转录因子(TEAD、TFCP2及RUNX2)比较,过表达CREB及共转染CREB和YAP可促进ACAN mRNA表达(P<0.01)。野生型ACAN启动子受CREB、YAP影响,而突变型ACAN启动子则不受影响。ACAN与AFP、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)呈明显正相关(r值分别为0.722、0.517、0.443,P=0.000)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,ACAN和AFP诊断HCC的曲线下面积(AUC)分别为0.978、0.661;ACAN诊断Ⅰ～Ⅱ期HCC、Ⅲ期HCC的AUC分别为0.903和0.993。结论 ACAN对HCC的诊断效能略优于AFP,且对晚期HCC的诊断效能优于早期HCC。ACAN通过Hippo/YAP信号通路发挥重要作用,或可作为一种新的HCC血清肿瘤标志物。

Hippo/YAP信号通路在眼部作用的研究进展

Hippo-YAP通路在机体发育和疾病发生中均具有重要作用。Hippo-YAP通路的调节紊乱可能导致病理组织过度生长和肿瘤的进展;近年来研究发现,Hippo-YAP信号通路的异常调节可能与眼部疾病相关,如圆锥角膜、Sveinsson脉络膜视网膜萎缩和视网膜变性等,本文就Hippo/YAP在眼部作用的研究进展进行系统综述,为眼部疾病的治疗提供理论基础。

低氧环境下听力损伤Hippo/YAP信号通路的调控研究

目的:探索Hippo信号通路是否参与大鼠在低氧环境下发生的听力损伤过程。方法:选取8周龄的Wistar大鼠,大鼠移居高原第30天和平原组在相应时间点取出大鼠耳蜗组织,提取RNA,行高通量RNA-Seq全转录组测序技术。对Hippo信号通路中差异表达基因进行GO, KEGG富集分析。结果:高原组第30天与平原组差异表达基因比较发现,Hippo信号通路中上调基因有6个,下调基因有7个。分析上调的差异表达基因GO发现,生物过程富集显著的为:肌肉收缩,心肌收缩和骨骼肌收缩;细胞组分富集显著的为:肌原纤维,Z膜和蛋白质细胞外基质;分子功能富集显著的为:弹性蛋白结合,钙离子结合和肌动蛋白丝结合。分析下调的差异表达基因GO发现,生物过程富集显著的为:化学突触传递,突触后膜的调节和膜电位的调节;细胞组分富集显著的为:质膜的组成部分,突触后膜和神经元投射;分子功能富集显著的为:递质门离子通道活性参与突触后膜电位的调节,抑制性细胞外配体门控离子通道活性和GABA-门控氯离子通道活性。将差异表达基因进行KEGG分析发现,Hippo信号通路富集到听力损伤过程中。结论:Hippo信号通路参与调控低氧环境下听力损伤过程。

索拉非尼基于Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬在肝细胞癌中产生耐药机制研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,它的形成是一个复杂的过程,其具体形成机制尚不明确,由于大多数HCC患者被诊断出来时已是晚期,通常已丧失良好的手术时机。而靶向药物的出现给当前HCC患者带来了新的希望,同时还可作为术后治疗措施,在HCC中发挥着巨大的作用。索拉非尼是第一个被用于治疗HCC的靶向药物,它可抑制肝肿瘤组织血管生成和细胞增殖,可诱导肝肿瘤细胞凋亡,进而提高部分肝癌患者的生存率。但据目前研究显示,有50%~60%HCC经治患者对该药物出现了敏感性下降。主要是由于索拉非尼使用后会抑制体内相关信号通路,从而致使耐药的发生,故进一步探索索拉非尼耐药机制,使其逆转索拉非尼耐药对于改善肝癌治疗的预后具有极其重要的临床价值。近些年来,许多学者致力研究索拉非尼通过Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬与耐药性的产生有着密切联系。并探讨其耐药分子机制,使该领域获得了巨大的发展。因此,本篇文章主要从Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路展开,探讨其与细胞自噬之间的关系以及介导的耐药机制,为索拉非尼治疗肝癌产生耐药性提供可靠的科学理论依据。

基于Hippo-YAP信号通路探讨黄芩苷干预膝骨关节炎大鼠的疗效和作用机制

目的:探讨黄芩苷干预膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效和作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组,每组10只。将假手术组以外的大鼠采用切断前交叉韧带和切除内侧半月板的方法建立右膝关节KOA模型,假手术组大鼠于右膝关节内侧做一切口后缝合。造模成功后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组大鼠分别按照50 mg·kg^(-1)、100 mg·kg^(-1)的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃;高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠按照100 mg·kg^(-1)的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃,并按照1 mg·kg^(-1)的剂量给予XMU-MP-1溶液腹腔注射;假手术组和模型组大鼠均给予等量生理盐水灌胃。每天给药1次,连续给药30 d。分别于给药前、给药15 d时、给药30 d时测量大鼠双侧膝关节肿胀程度。给药结束后处死大鼠,取大鼠右侧膝关节软骨组织,采用苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色观察膝关节软骨组织病理变化,采用Mankin评分标准评价软骨退变情况,采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13表达水平,采用Western blotting检测滑膜组织中切割活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-cysteine aspartic acid specific protease,Cleaved-Caspase)-3、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、Tafazzin(TAZ)蛋白的表达水平。结果:①大鼠右膝关节肿胀程度。给药15 d时和给药30 d时,高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节肿胀程度均低于模型组、低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节肿胀程度两两比较,差异均无统计学意义(P=0.063,P=0.215,P=0.399;P=0.052,P=0.261,P=0.240)。②大鼠右膝关节软骨组织病理变化。干预结束后,模型组大鼠右膝关节软骨萎缩、排列混乱;低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨萎缩、细胞排序情况均较模型组改善,且高剂量黄芩苷组大鼠的改善情况优于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组。③大鼠右膝关节软骨Mankin评分。干预结束后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨Mankin评分均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高剂量黄芩苷组右膝关节软骨Mankin评分低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000),低剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨Mankin评分低于高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000)。④大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、IL-10、MMP-13表达水平。低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13表达水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),IL-10表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13表达水平均低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),IL-10表达水平高于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000)。⑤大鼠右膝关节软骨组织细胞凋亡及Hippo-YAP信号通路相关蛋白表达水平。低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨组织中Cleaved-Caspase-3、Bax表达水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),BCL-2、YAP、TAZ表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨组织中Cleaved-Caspase-3、Bax表达水平均低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),BCL-2、YAP、TAZ表达水平均高于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000)。结论:黄芩苷干预KOA大鼠,能够缓解膝关节肿胀,抑制炎症反应和细胞凋亡,延缓关节软骨退变,其作用机制可能与激活Hippo-YAP信号通路有关。

虎杖苷通过Hippo/YAP通路影响甲状腺癌8505C细胞的恶性生物学行为和顺铂敏感性

目的:探究虎杖苷通过Hippo/Yes相关蛋白(YAP)通路对人甲状腺癌8505C细胞的恶性生物学行为和顺铂(DDP)敏感性的影响。方法:体外培养8505C细胞,构建其DDP耐药细胞8505C/DDP,用CCK-8法检测0、25、50、75、100 nmol/L虎杖苷处理8505C和8505C/DDP细胞的增殖能力,以筛选虎杖苷的最佳作用浓度。将8505C细胞分为对照组、虎杖苷组、空载组、虎杖苷+YAP1过表达组;将8505C/DDP细胞分为对照组、DDP组、DDP+虎杖苷组、DDP+空载组、DDP+虎杖苷+YAP1过表达组。WB法检测各组8505C细胞中Hippo/YAP通路[YAP1、转录辅激活因子(TAZ)]和EMT(E-cadherin、N-cadherin)相关蛋白,8505C/DDP细胞中YAP1、TAZ、耐药相关蛋白[P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)]、凋亡相关蛋白(C-caspase-3、BAX、Bcl-2)的表达。Transwell小室和细胞划痕实验分别检测各组8505C、8505C/DDP细胞的侵袭、迁移能力。结果:虎杖苷可显著抑制8505C细胞的增殖活性(P<0.05)明显抑制8505C细胞中YAP1、TAZ蛋白、N-cadherin的表达(均P<0.05),提升E-caderin蛋白的表达(P<0.05),显著抑制8505C细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.05),而8505C/DDP细胞对低浓度的虎杖苷具有耐药性(P<0.05);过表达YAP1则可逆转虎杖苷对8505C细胞的影响。50 nmol/L虎杖苷明显抑制DDP处理的8505C/DDP细胞中YAP1、TAZ、P-gp、MRP1、Bcl-2的蛋白的表达(均P<0.05),提升cleaved caspase-3、BAX蛋白的表达(均P<0.05)并诱导其细胞凋亡(P<0.05),过表达YAP1则可逆转虎杖苷对8505C/DDP细胞的影响。结论:虎杖苷抑制Hippo/YAP信号通路,从而抑制8505C细胞的恶性生物学行为和增强其对的DDP敏感性。

藏红花素调节Hippo信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:初步探讨藏红花素(Crocin)调节Hippo信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外分离培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF),免疫荧光鉴定成纤维细胞;MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Crocin最佳干预浓度,将HKF细胞分为control组和Crocin低、中、高剂量组(Crocin浓度分别为20、50、100μmol/L);细胞转染实验中将HKF细胞分为control组、Crocin组(100μmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1+Crocin组(转染pcDNA3.1+100μmol/L Crocin干预)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、pcDNA3.1-YAP/TAZ+Crocin组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ+100μmol/L Crocin干预)。qRT-PCR法检测YAPmRNA、TAZ mRNA表达;EdU染色、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及Hippo通路蛋白表达。结果:Crocin以浓度依赖性的方式抑制HKF细胞增殖,IC50=111.56μmol/L;与control组比较,Crocin低、中、高剂量组HKF细胞中YAP、TAZ mRNA表达水平EdU阳性细胞率、PCNA、Bcl-2、p-YAP/YAP、TAZ蛋白表达水平显著降低,凋亡率及Bax蛋白表达水平升高(P<0.05);转染YAP/TAZ后,显著减弱了藏红花素对HKF细胞增殖的抑制作用及对HKF细胞凋亡的促进作用。结论:藏红花素可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,抑制HKF细胞增殖,促进其凋亡。

基于Hippo/YAP信号通路探究粉防己碱抗乳腺癌耐药机制

目的研究粉防己碱通过调控Hippo/Yes-相关蛋白同源癌蛋白(homologous oncoproteins Yes-associated protein,YAP)信号通路抗乳腺癌多重耐药的分子机制。方法采用CCK-8法检测粉防己碱对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖的影响;采用倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞形态;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用细胞集落实验检测细胞克隆形成能力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用Western blotting检测细胞耐药外排蛋白[P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)],Hippo通路关键节点蛋白[YAP1、大肿瘤抑制激酶1(large tumor suppressor kinase 1,LATS1)、哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian Sterile 20-like kinase 1,MST1)、转录共活化因子(transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,TAZ)]和凋亡关键蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、细胞色素C(cytochrome-C,Cyt-C)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)]表达。结果粉防己碱对MCF-7/ADR细胞具有增殖抑制作用,半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为14.20μmol/L;粉防己碱能够改变细胞形态,部分细胞出现凋亡迹象;粉防己碱显著诱导MCF-7/ADR细胞发生凋亡(P<0.01),抑制细胞的增殖分化和侵袭能力,显著下调P-gp、BCRP、MRP1、YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白表达(P<0.01),显著上调MST1、LATS1、Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达(P<0.01)。结论粉防己碱能够通过下调MCF-7/ADR细胞P-gp、BCRP和MRP1蛋白表达,抑制外排蛋白活性,增加细胞内粉防己碱含量蓄积;并通过激活Hippo信号通路,上调MST1蛋白表达,激活LATS1,进而调控下游靶点YAP1和TAZ表达,进一步上调Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,启动细胞凋亡程序,发挥抗肿瘤作用。

虎杖苷调节YAP1/TAZ信号通路对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只。缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT%)和管壁面积占总面积的百分比(WA%)。分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组。CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。与NC组相比,Hypoxia组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P<0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡。

靶向Hippo信号通路治疗原发性肝癌的研究进展

原发性肝癌(肝癌)是临床常见恶性肿瘤,包括肝细胞癌(HCC)和肝内胆管细胞癌(ICC)。近年来,肝癌发病率呈不断上升趋势,2020年全球原发性肝癌发病率为4.7%,死亡率为8.3%,位居全球常见恶性肿瘤第5位和肿瘤致死病因第3位^([1])。因早期诊断难,且具有高转移、高复发等特点,大多数患者确诊时已处于中晚期,导致肝癌预后差,5年生存率低于15%^([2])。

肿瘤干细胞中的Hippo信号通路研究进展

如何抑制肿瘤细胞的增殖和干性基因的表达已经成为近年来科学家在癌症治疗领域关注的重点之一。肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)是肿瘤中一类具有自我更新能力的细胞类群,被认为是肿瘤发生过程中的驱动因素之一。Hippo信号通路在生物进化过程中高度保守,且对细胞增殖、组织发育和器官大小具有重要作用。简述了Hippo信号通路及其在肿瘤干细胞中的作用机制,并对肿瘤的治疗提出了展望,以期为肿瘤干细胞的发展和未来治疗提供参考。