西格列汀调节Hippo/Yes相关蛋白信号通路对非小细胞肺癌A549/CDDP细胞增殖、迁移、凋亡与化疗敏感性的影响实验研究

目的:探究西格列汀(SIT)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)A549/CDDP细胞增殖、迁移、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:常规培养顺铂耐药的NSCLC细胞株A549/CDDP,随机分为对照(Control)组(常规培养)、CDDP组(给予10μmol/L CDDP)、SIT组(给予10μmol/L SIT)、CDDP+SIT组(给予10μmol/L CDDP+10μmol/L SIT)和CDDP+SIT+YAP激活剂Jasplakinolide(CDDP+SIT+JASP)组(给予10μmol/L CDDP+10μmol/L SIT+50 nmol/L JASP)。CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞YAP mRNA表达水平,Western blot检测Hippo/YAP信号通路相关蛋白与B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与Control组比较,CDDP组和SIT组OD_(450)值(48、72 h)、细胞侵袭数目、细胞迁移率、YAP mRNA水平及YAP、Bcl-2蛋白表达下降,细胞凋亡率、磷酸化YAP(p-YAP)和Bax蛋白表达及哺乳动物STE20样激酶1/2(MST1/2)、大肿瘤抑制激酶1/2(LATS1/2)的磷酸化水平增高(均P<0.05)。与CDDP组比较,CDDP+SIT组上述指标趋势增强(均P<0.05)。与CDDP+SIT组比较,CDDP+SIT+JASP组减弱了SIT对A549/CDDP细胞化疗敏感性的提高。结论:SIT能够促进A549/CDDP细胞凋亡,抑制细胞迁移、侵袭和增殖,提高A549/CDDP细胞化疗敏感性,其机制可能与激活Hippo/YAP信号通路有关。

Yes相关蛋白(YAP)通过激活PI3K/AKT通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中表达及与cSCC侵袭和迁移中的作用。方法通过免疫组织化学染色法检测cSCC、鲍温病(BD)、癌旁正常皮肤组织中YAP的表达水平,并分析与临床病理参数之间的关系;利用慢病毒转染构建YAP基因敲低的A431稳定细胞株,利用四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽检测A431细胞微丝分布和数量,Transwell TM实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测A431细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色法观察敲低YAP后上皮间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、锌指转录因子Snail的表达;Western blot法检测E-cadherin、Snail、β-catenin、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、核糖体蛋白S6(S6)、磷酸化S6(p-S6)、4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)的表达。结果YAP在cSCC和BD中表达显著高于癌旁正常皮肤组织;cSCC中YAP高表达与肿瘤大小、分化程度、侵袭程度密切相关,与患者的性别、年龄、发病部位、形态类型、是否神经脉管侵犯不相关;敲低A431细胞中YAP后,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力降低,细胞微丝变细、伪足变少;E-cadherin表达增加,Snail和β-catenin蛋白表达降低,p-AKT、p-S6及p-4EBP1蛋白表达降低。结论YAP在cSCC中高表达,YAP激活PI3K/AKT信号通路促进cSCC的侵袭、迁移及EMT过程。

益肾化湿颗粒对糖尿病肾病小鼠中Yes相关蛋白的调控作用

目的探讨益肾化湿颗粒(Yishen Huashi Granule,YSHS)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)小鼠的保护作用及可能的相关机制。方法建立STZ诱导DN小鼠模型,随机分为模型组、YSHS组及YAP抑制剂维替泊芬组,同时设立对照组。造模成功后8周开始干预,疗程4周。分别检测各组干预前后尿蛋白及干预后血肌酐、尿素氮水平。疗程结束后处死小鼠,行光镜HE染色观察肾小球病理变化,Western blot检测YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达,RT-PCR检测YAP、CTGF及足细胞蛋白nephrin、podocalyxin、WT1的mRNA表达。结果YSHS组在生化指标上较模型组均有好转,HE染色显示肾小球病理损伤有所改善。模型组YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达增多,YAP和CTGF的mRNA表达亦增多,而3种足细胞蛋白的mRNA表达减少。经YSHS治疗后,YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达与YAP、CTGF的mRNA表达量均有所下降,而nephrin、podocalyxin、WT1的mRNA表达量升高。结论YSHS可降低DN小鼠尿蛋白、保护肾功能并减轻肾小球病理损伤,其机制可能与下调肾组织中YAP,减少CTGF表达水平并上调足细胞蛋白的mRNA表达有关。

Hippo通路中Yes相关蛋白在胰腺癌中的表达及意义

目的:检测Hippo-YAP信号通路中主要效应蛋白Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达,探讨其表达强度与临床病理因素之间的关系及意义.方法:应用免疫组织化学EnVision法测定Hippo信号通路中YAP蛋白在45例胰腺癌及15例正常胰腺组织中的表达,应用RT-PCR方法检测YAP mRNA在45例胰腺癌及15例正常胰腺组织中的表达.结果:胰腺癌组织中YAP蛋白主要表达于胰腺导管上皮细胞,45例胰腺癌组织中YAP的阳性表达率为93.33%(42/45),15例正常胰腺组织中YAP阳性表达率为26.67%(4/15),两组间的表达差异具有统计学意义(2=27.95,P<0.01).在胰腺癌组织中YAP的表达与肿瘤分化程度密切相关(P=0.048),与年龄、性别、吸烟、饮酒、肥胖、糖耐量异常、糖尿病、慢性胰腺炎及临床分期等无关(P值分别是0.577、0.565、0.541、0.224、1.000、0.542、0.555、0.571、0.926).胰腺癌患者血清CA19-9水平与胰腺癌组织中YAP阳性程度呈正相关.YAP m R N A在胰腺癌组织中的表达较正常胰腺组织明显升高(0.3682±0.0783 vs 0.0394±0.0091,P<0.01).结论:Hippo-YAP通路可能在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用.并有可能成为胰腺癌治疗中新的靶点.

Hippo通路、Yes相关蛋白及其与肿瘤关系的研究进展

Hippo通路是近年来新发现的一条细胞信号传导通路，可通过调节细胞增殖和凋亡平衡调控器官体积、调节细胞间的接触性抑制［1］，该通路调控异常可导致人体多种疾病的发生。 Yes 相关蛋白（YAP）由Sudol等［2］于1994年首先报道，其因相对分子质量约65 kDa 又被称为YAP65。研究证实， YAP是Hippo通路的核心效应因子，是一种多功能的细胞内连接蛋白和转录共激活因子，在正常机体细胞内发挥信号转导和基因转录调节的作用。现将Hippo 通路、YAP及与肿瘤关系的研究进展综述如下。

Hippo信号通路及其相关miRNA在阿尔茨海默病与帕金森病中的潜在作用机制

以阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)和帕金森病(Parkinson’s disease,PD)为代表的神经退行性疾病主要特征是神经元进行性的不可逆丢失,导致不同程度的病理变化和认知功能的丧失,目前仍无有效的治疗方法。随着全球老龄化问题的加重,神经退行性疾病的患病人数正在快速上升,已发展成为严重的全球公共卫生事件,迫切需要开发有效的治疗手段。Hippo信号通路是一种高度进化保守的途径,在细胞增殖、分化、发育以及凋亡等生物过程中发挥重要作用,并与miRNA互相作用产生广泛的生物效应,在多种疾病的发生中发挥作用。但在神经退行性疾病中对Hippo信号通路与miRNA的探讨相对缺乏。本文通过梳理Hippo信号通路以及相关miRNA在AD与PD中的作用机制,探讨其内在联系,以期拓展神经退行性疾病的治疗视野,为神经退行性疾病的防治提供新的思路和视角。

Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表达。结果 YAP及CyclinD1在鼻咽癌组织中的表达均高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05),MST1在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05)。YAP、CyclinD1与病理分型相关(P <0.05),而MST1与病理分型无相关性(P>0.05);三者与患者的性别、年龄、生存时间、淋巴结转移、临床分期、远处转移、复发及生存状态无相关性(P>0.05)。在鼻咽癌组织内,YAP与CyclinD1、MST1与CyclinD1呈正相关(P <0.05),YAP与MST1无相关性(P>0.05)。结论 YAP和CyclinD1蛋白的高表达、MST1蛋白的低表达可能与鼻咽癌的发生、发展有关,三者有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。

蛋白激酶Cι/Yes相关蛋白1与人乳头瘤病毒在肿瘤微环境中的作用研究进展

宫颈癌是女性最常见恶性肿瘤之一,有研究已证实人乳头瘤病毒(HPV)感染特别是高危型HPV,是引起宫颈癌的主要原因,但仅1%HPV感染者转变为宫颈癌,研究认为免疫抑制是其协同因子之一。蛋白激酶Cι(PKCι)是一种非经典型蛋白激酶C,PKCι通过下游效应因子Yes相关蛋白1(YAP1)促进免疫抑制,而YAP1则通过募集骨髓来源的抑制性细胞和CD8^+T细胞来促进肿瘤的免疫抑制;调节PKCι/YAP1为宫颈癌免疫治疗提供可能的靶点。本文对PKCι/YAP1与HPV在肿瘤微环境中的作用研究进展进行综述。

蛋白激酶B-Yes相关蛋白信号通路在谷氨酰胺饥饿诱导Hela细胞凋亡过程中的作用

目的观察谷氨酰胺(Gln)对Hela细胞凋亡的影响,探讨该作用与蛋白激酶B(Akt)-Yes相关蛋白(YAP)信号转导通路的关系。方法用含不同浓度Gln(4、2、1、0.5、0.1、0mmol/L)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM培养基)分别培养Hela细胞24h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性。用含Gln4或0mmol/L或Gln 4mmol/L+Akt抑制剂LY294002 40μmol/L的DMEM培养基分别培养Hela细胞24h,采用Western印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化YAP(pYAP)蛋白的表达。利用小干扰RNA(siRNA)抑制Hela细胞YAP的表达,用含Gln 4或0mmol/L的DMEM培养基分别培养正常细胞或YAP siRNA转染后的细胞24h,采用Western印迹法检测Bax蛋白的表达。结果以含4、2、1、0.5、0.1、0mmol/L Gln的DMEM培养基分别孵育Hela细胞24h后,Gln 1、0.5、0.1、0mmol/L组的细胞活性均显著低于Gln 4mmol/L组(P值分别<0.05、0.01)。以含Gln 4或0mmol/L的DMEM培养基孵育Hela细胞24h后,Gln 0mmol/L组的pAkt和pYAP水平较Gln 4mmol/L组显著降低(P值均<0.01),Bax蛋白表达显著增加(P<0.01)。当Akt抑制剂LY294002 40μmol/L与Gln 4mmol/L共同孵育细胞24h后,与Gln 4mmol/L组相比,pAkt和pYAP水平显著降低(P值均<0.01),而Bax蛋白表达显著增加(P<0.01)。正常或YAP siRNA转染的Hela细胞分别在含Gln 4或0mmol/L的DMEM培养基中培养24h后,与正常细胞Gln 4mmol/L组比较,正常细胞Gln 0mmol/L组Bax蛋白表达显著增加(P<0.01),而YAP siRNA转染后细胞Gln 0mmol/L组Bax蛋白表达则显著降低(P<0.05)。结论 Gln饥饿可诱导Hela细胞凋亡,其作用机制与Akt活性降低,进而导致YAP去磷酸化后入核诱导Bax表达增加有关。

木犀草素对博来霉素诱导的肺上皮细胞增殖、凋亡及Hippo/Yes相关蛋白通路的影响

目的探究木犀草素(Lut)对博来霉素(BLM)诱导的人肺正常上皮细胞(BEAS-2B细胞)增殖、凋亡及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)通路的影响。方法体外培养BEAS-2B细胞,使用4、8、12、24μg/mL BLM诱导12、24、48 h,筛选BLM诱导浓度和时间。将BEAS-2B细胞分为对照组、BLM组以及Lut低、中、高浓度组。各组细胞培养24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Hippo/YAP通路相关蛋白-哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、大肿瘤抑制因子1(LAST1)和YAP磷酸化水平。结果BLM诱导24 h后BEAS-2B细胞的半数抑制浓度(IC50)约为8μg/mL,所以本研究选取8μg/mL BLM诱导细胞24 h。与对照组相比,BLM组细胞较小,边缘不规则,细胞间隙增加,细胞增殖能力、MST1、LAST1和YAP蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05);与BLM组相比,Lut低、中、高浓度组细胞形态趋于正常,细胞增殖能力、MST1、LAST1和YAP磷酸化水平依次升高(P<0.05),凋亡率依次降低(P<0.05)。结论Lut可能通过激活BEAS-2B细胞中Hippo/YAP信号通路,提高BLM诱导后细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡。

Hippo信号通路效应因子Yes相关蛋白与具有PDZ结合基序的转录共激活因子对肾脏疾病的影响

Hippo信号通路是一条主要生理功能为控制细胞存活、增殖、凋亡、迁移,同时调节器官生长、组织修复、诱导癌症发展、进化上高度保守的信号级联传导反应。在哺乳动物生理需要或组织轻度受损情况下,Hippo通路维持肾脏组织正常发育、修复受损组织以保持器官内环境稳态;当受外界因素持续刺激该通路则通过介导肾脏组织过度损伤修复、肾脏细胞增殖凋亡等多种环节介导肾脏疾病的发展。本文在已有的科研成果的基础上,就该通路在急性肾损伤、慢性肾脏病、多囊肾病、糖尿病肾病、肾细胞癌等疾病中发挥的作用及其有关抑制剂的应用进行综述,有助于我们在治疗肾脏相关疾病发现新治疗策略。

Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白(YAP)在乳腺癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法检测97例乳腺癌组织、32例癌旁正常乳腺组织中YAP的表达情况,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果YAP在正常乳腺组织中的表达率明显高于乳腺癌组织,两者差异有显著性(χ2=17.603,P=0.000)。乳腺癌组织中YAP的阳性表达与组织学分级、肿瘤大小和有无淋巴结转移之间无明显相关性(P>0.05)。结论 Hippo/YAP信号转导通路在乳腺癌的发生、发展中发挥着重要作用,可能为乳腺癌的早期发现与诊疗开辟新的途径。

Yes相关蛋白、p63和Bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及意义

目的探讨Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中表达的意义及相互关系。方法应用免疫组化GTVision二步法检测45例DLBCL和25例反应性淋巴组织增生(RHL)中Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白的表达。结果 Yes相关蛋白在DLBCL中的表达阳性率为60.0%,在RHL中的表达阳性率为100%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在DLBCL中,p63、Bcl-2蛋白的表达阳性率分别为44.4%和82.2%;在RHL中,p63的表达阳性率为0,而Bcl-2蛋白阳性细胞主要分布于套区和副皮质区,滤泡生发中心为阴性,均为正常表达模式,未见异常表达,p63、Bcl-2蛋白在DLBCL和RHL两组间表达差异具有统计学意义(P<0.05)。在DLBCL中,Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白表达之间两两比较均无相关性(P>0.05),且与年龄、性别、发病部位和免疫分型等临床病理特征无关(P>0.05)。结论 Yes相关蛋白、p63和Bcl-2蛋白与DLBCL的发生发展有关,其中Yes相关蛋白可能扮演抑癌基因的角色。

甘草素调节Hippo/YAP/TAZ信号通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响

目的探讨甘草素(LQ)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)/含有PDZ结合位点转录共激活因子(TAZ)通路对高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(Ct组)、高糖组(HG组)、低剂量LQ组(LQ-L组,20μmmol/L)、高剂量LQ组(LQ-H组,40μmmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、LQ-H+pcDNA3.1组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1)、LQ-H+pcDNA3.1-YAP/TAZ组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)。qRT-PCR、Western blot检测转染效果。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA检测细胞上清中TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-1β水平;免疫荧光检测IV型胶原纤维(Collagen IV)、纤连蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达。结果HBZY-1细胞成功高表达YAP1/TAZ;与Ct组比较,HG组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);与HG组比较,LQ-L组、LQ-H组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达降低(P<0.05);与HG组、pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-YAP/TAZ组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);pcDNA3.1-YAP/TAZ减弱了高剂量LQ对HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化的抑制作用。结论LQ可能通过抑制Hippo/YAP/TAZ通路抑制HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化。

丙泊酚通过下调Yes相关蛋白的表达抑制卵巢癌SKOV3细胞体外的增殖、迁移及侵袭

目的探讨丙泊酚对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法将SKOV3细胞分为空白对照组、溶剂对照组、25μmol/L丙泊酚组、50μmol/L丙泊酚组、100μmol/L丙泊酚组,细胞功能学实验检测丙泊酚对SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。免疫荧光实验和Western blot实验检测丙泊酚对SKOV3细胞中Yes相关蛋白(yes associated protein,YAP)表达量的影响。建立YAP过表达SKOV3细胞系,观察YAP过表达是否干预丙泊酚对SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。结果丙泊酚抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力;丙泊酚下调SKOV3细胞核内YAP蛋白表达;YAP过表达干预了丙泊酚对SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。结论在体外,丙泊酚可能通过下调YAP蛋白的表达,抑制SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

Yes相关蛋白1与肿瘤相关性的研究进展

转录辅激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)作为Hippo信号通路下游的主要效应因子,在调控器官大小、促进组织再生和维持干细胞自我更新等方面发挥着重要作用。随着对YAP1研究的深入,发现YAP1在多种肿瘤组织中呈高表达状态,并可促进肿瘤的增殖、侵袭和转移。因此,YAP1有望成为肿瘤早期诊断的分子标志物及肿瘤治疗的潜在靶点。本文就YAP1的结构、生物学功能及其与肿瘤的相关性予以综述。

转录协同激活因子Yes相关蛋白与卵巢癌发生的研究进展

转录协同激活因子Yes相关蛋白(YAP)是Hippo信号通路最主要的效应因子,位于染色体11q22扩增区上,相对分子量为65 Kda,大量研究发现,YAP在卵巢癌中高表达,且具有促进卵巢癌细胞增殖、抑制凋亡、产生耐药性、维持卵巢癌干细胞多潜能性的作用。随着对YAP研究的深入,发现多种因素共同参与调节YAP介导的卵巢癌进展,其中包括溶血磷脂酸(LPA)和表皮生长因子受体(EGFR)参与信号通路间的相互协作,以及微小RNA(miRNA)的miR-129-5p在转录水平上通过直接靶向调控YAP基因,进而影响卵巢癌的发生发展。研究显示靶向YAP有望成为卵巢癌的治疗手段,下调YAP表达或许成为治疗卵巢癌的新策略。

恶性肿瘤中Yes相关蛋白与p73作用关联的研究进展

Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)是Hippo信号通路最主要的调控因子,具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用。在人类乳腺癌、肺癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌等多种肿瘤中YAP表达明显上调。而在另一方面,当DNA损伤时,作为转录辅助激活因子的YAP增强p73相关凋亡基因的转录,具有促进凋亡作用。在细胞内环境的维持与调控过程中,YAP所发挥的作用截然不同。本文主要介绍Hippo信号通路、YAP、p73在恶性肿瘤中的作用,以及YAP与p73在肿瘤细胞中的具体调控机制和作用。

化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠Hippo信号通路相关蛋白RASSF1A、SAV1、MST2表达的影响

目的观察化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠Hippo信号通路哺乳动物不育系20样激酶2(MST2)、RAS相关区域家族亚型A(RASSF1A)、含WW结构域的人同源重组蛋白1(SAV1)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用联合造模法制备CAG大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、维酶素组和化浊解毒方高、中、低剂量组,每组10只,同时设正常组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,维酶素组给予维酶素混悬液灌胃,化浊解毒方高、中、低剂量组给予相应剂量药液灌胃,连续12周。HE染色观察大鼠胃黏膜组织病理变化,RT-qPCR和Western blot分别检测大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,化浊解毒方高、中剂量组和维酶素组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05),其中化浊解毒方高剂量组升高最明显。结论化浊解毒方具有干预CAG大鼠和延缓癌变进展的作用,其机制可能与上调模型大鼠抑癌基因RASSF1A、SAV1、MST2的表达相关。

扁蒴藤素调节 Hippo/YAP 信号通路对骨肉瘤细胞阿霉素耐药性的影响

目的探讨扁蒴藤素(PM)对骨肉瘤细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响及其作用机制。方法采用ADM浓度梯度递增长期培养法在体外建立ADM耐药细胞MG-63/ADR,CCK-8检测不同浓度ADM对骨肉瘤细胞MG-63和MG-63/ADR细胞活力的影响,验证ADM耐药性;随后将MG-63/ADR细胞随机分为MG-63/ADR组(正常培养)、PM低剂量组(加入0.5µmol/L PM)、PM中剂量组(加入1.0µmol/L PM)、PM高剂量组(加入2.0µmol/L PM),CCK-8检测不同浓度ADM处理下各组细胞活力;平板克隆形成实验检测各组细胞对ADM的敏感性;显微镜下观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测磷酸化哺乳动物STE20样蛋白激酶1(p-MST1)、MST1、磷酸化大肿瘤抑制因子1(p-LATS1)、LATS1、磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)、YAP蛋白表达。结果25、125、625、3125、15625 ng/mL ADM干预下,MG-63/ADR细胞活力较MG-63细胞显著升高(P<0.05),说明ADM耐药细胞模型建立成功。与MG-63/ADR组相比,PM低、中、高剂量组细胞数量减少且细胞逐渐皱缩、间距变大,细胞活力、细胞克隆形成率以及p-YAP/YAP水平下降(P<0.05),细胞凋亡率和p-MST1/MST1、p-LATS1/LATS1水平显著提高(P<0.05)。结论PM对骨肉瘤细胞ADM耐药性具有抑制作用,其可能与激活Hippo通路、下调YAP信号有关。