低氧运动预适应激活自噬调控Hippo/YAP/TAZ信号通路减轻急性低氧力竭运动大鼠骨骼肌损伤

目的:探讨低氧运动预适应激活自噬调控Hippo/YAP/TAZ信号通路对急性低氧力竭运动大鼠骨骼肌保护的机制。方法:50只6周龄SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白对照组(Con组,n=10)、单纯急性低氧力竭运动组(HE组,n=10)、低氧预适应+急性低氧力竭运动组(HP+HE组,n=10)、运动预适应+急性低氧力竭运动组(EP+HE组,n=10)、低氧预适应+运动预适应+急性低氧力竭运动组(EP/HP+HE组,n=10)。预适应周期2 w, EP+HE组及EP/HP+HE组进行2次/d常压常氧跑台训练;HP+HE组及EP/HP+HE组进行10 h/d间歇性低氧暴露(FiO213.5%)。预适应后HE组、HP+HE组、EP+HE组及EP/HP+HE组大鼠进行低氧环境跑台力竭训练(FiO211.9%~12.0%)。低氧力竭运动后2 h,尾静脉取血检测血清骨骼肌损伤、炎症反应和氧化应激指标,苏木精-伊红染色观察腓肠肌病理特征,并检测腓肠肌自噬相关蛋白、Hippo/YAP/TAZ信号通路蛋白及mRNA。结果:(1)与HE组比较,预适应组大鼠低氧力竭运动后的腓肠肌结构损伤、炎症反应和氧化应激明显减轻。(2)HE组Atg5、Beclin1蛋白表达显著低于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP/HP+HE组Atg5、Beclin1蛋白表达显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组LC3-Ⅱ蛋白表达显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP+HE组及EP/HP+HE组显著高于HP+HE组(P<0.05)。(3)HE组MST1 mRNA显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP+HE组及EP/HP+HE组显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组LATS1 mRNA显著低于预适应组(P<0.05);HE组YAP mRNA显著高于预适应组(P<0.05),EP/HP+HE组显著低于HP+HE组(P<0.05);HE组及HP+HE TAZ mRNA显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组均显著降低(P<0.05)。(4)HE组MST1、LATS1及其磷酸化水平显著低于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP/HP+HE组MST1显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组YAP蛋白显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05);HE组TAZ蛋白显著高于预适应组均显著降低(P<0.05),EP/HP+HE组均显著低于HP+HE组(P<0.05)。结论:低氧运动预适应可能通过激活骨骼肌自噬抑制Hippo/YAP/TAZ信号通路减轻急性低氧力竭运动大鼠的骨骼肌损伤、炎症反应和氧化应激反应。

芒柄花素调节Hippo/YAP信号通路对炎症性肠病大鼠肠上皮细胞凋亡的影响

目的 探究芒柄花素(FMN)对炎症性肠病(IBD)大鼠肠上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法 采用三硝基苯磺酸诱导的方法构建大鼠IBD模型。将造模成功的48只大鼠按照随机数字表法分为模型组(生理盐水),低、高剂量FMN组(20、40 mg/kg FMN)和高剂量FMN+YAP抑制剂Verteporfin(VTPF)组(40 mg/kg FMN+10 mg/kg VTPF),每组12只;另取12只大鼠设为正常组(生理盐水);每天给药/生理盐水1次,连续7 d。末次给药后,对大鼠疾病活动指数(DAI)进行评分;测量大鼠结肠长度;观察大鼠结肠组织的病理学变化;检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10水平;检测大鼠肠上皮细胞的凋亡情况;检测大鼠结肠组织中Yes相关蛋白(YAP)、切割型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠DAI评分,TNF-α、IL-6水平,肠上皮细胞凋亡率,cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);结肠长度显著变短(P<0.05);IL-10水平和YAP、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);结肠组织出现细胞形态异常、排列紊乱,炎症细胞浸润等病理学变化。与IBD组比较,低剂量FMN组、高剂量FMN组大鼠上述指标水平均显著改善(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05);而加入VTPF后,显著逆转了FMN对IBD大鼠上述指标的改善作用(P<0.05)。结论 FMN可能是通过抑制Hippo/YAP信号通路,促进YAP的表达,进而抑制IBD大鼠肠上皮细胞凋亡。

水苏碱调节YAP/TAZ信号通路对膀胱癌细胞恶性生物学特征的影响

目的:探讨水苏碱(STA)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/具有PDZ结合基序的转录辅激活因子(TAZ)信号通路对膀胱癌细胞恶性生物学行为和糖酵解的影响。方法:以膀胱癌T24细胞为研究对象,将T24细胞分为对照组(不加药物处理),STA低(STA-L)、中(STA-M)、高剂量(STA-H)组,YAP/TAZ信号通路激活剂(GA-017)组和GA-017+STA-H组。CCK-8法检测细胞增殖活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验测定细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;利用试剂盒检测影响糖酵解的因子水平(ATP、乳酸生成量、葡萄糖消耗量);免疫印迹检测caspase-3、Bcl-2、MMP-9、YAP、TAZ蛋白表达。结果:与对照组比较,STA各组及GA-017+STA-H组T24细胞的增殖活性、克隆形成率、侵袭数目、MMP-9蛋白表达、Bcl-2蛋白表达、ATP水平、乳酸生成量、葡萄糖消耗量显著下降,细胞凋亡率及caspase-3表达显著上升,STA-M、STA-H组及GA-017+STA-H的YAP、TAZ蛋白表达下降,差异具有统计学意义;GA-017组上述指标与STA-H组呈现相反的变化趋势;与STA-H组比较,GA-017+STA-H组可在一定程度逆转STA对于T24细胞恶性生物学和糖酵解行为的抑制作用。结论:STA可通过抑制YAP/TAZ信号通路表达,从而抑制膀胱癌细胞T24的增殖、侵袭、糖酵解,促进T24细胞凋亡。

虎杖苷调节YAP1/TAZ信号通路对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只。缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT%)和管壁面积占总面积的百分比(WA%)。分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组。CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。与NC组相比,Hypoxia组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P<0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡。

索拉非尼基于Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬在肝细胞癌中产生耐药机制研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,它的形成是一个复杂的过程,其具体形成机制尚不明确,由于大多数HCC患者被诊断出来时已是晚期,通常已丧失良好的手术时机。而靶向药物的出现给当前HCC患者带来了新的希望,同时还可作为术后治疗措施,在HCC中发挥着巨大的作用。索拉非尼是第一个被用于治疗HCC的靶向药物,它可抑制肝肿瘤组织血管生成和细胞增殖,可诱导肝肿瘤细胞凋亡,进而提高部分肝癌患者的生存率。但据目前研究显示,有50%~60%HCC经治患者对该药物出现了敏感性下降。主要是由于索拉非尼使用后会抑制体内相关信号通路,从而致使耐药的发生,故进一步探索索拉非尼耐药机制,使其逆转索拉非尼耐药对于改善肝癌治疗的预后具有极其重要的临床价值。近些年来,许多学者致力研究索拉非尼通过Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬与耐药性的产生有着密切联系。并探讨其耐药分子机制,使该领域获得了巨大的发展。因此,本篇文章主要从Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路展开,探讨其与细胞自噬之间的关系以及介导的耐药机制,为索拉非尼治疗肝癌产生耐药性提供可靠的科学理论依据。

汉黄芩素调节Hippo/YAP信号通路对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的:探究汉黄芩素调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化的影响。方法:采用腹腔注射阿霉素的方式构建大鼠CHF模型,成功造模36只大鼠,将其随机分为模型组、汉黄芩素组(汉黄芩素100 mg/kg)、汉黄芩素+维替泊芬组(100 mg/kg汉黄芩素+100 mg/kg维替泊芬),每组12只。剩余12只大鼠作为对照组。采用彩色多普勒超声系统检测各组大鼠心功能参数:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD);称重并计算各组大鼠心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI);酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Masson染色法检测大鼠心肌胶原容积分数(CVF)和血管周围纤维面积和血管管腔面积比值(PVCA/LA);苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理学变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠心肌组织Hippo/YAP信号通路相关蛋白、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、结缔组织生长因子(CTGF)表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠LVEF、LVFS、心肌组织SOD水平及哺乳动物ste-20样激酶(MST)1/2、大型肿瘤抑制因子(LATS)1/2磷酸化水平明显降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌组织MDA水平、CVF、PVCA/LA、心肌组织YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表达明显升高(P<0.05),心肌组织出现大量胶原纤维沉积和损伤。与模型组相比,汉黄芩素组LVEF、LVFS、心肌组织SOD水平、MST1/2、LATS1/2磷酸化水平明显升高(P<0.05),LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌组织MDA水平、CVF、PVCA/LA、心肌组织YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表达明显降低(P<0.05),心肌组织胶原纤维沉积和损伤减少。维替泊芬增强了汉黄芩素对CHF大鼠心肌纤维化的改善作用。结论:汉黄芩素可能通过激活Hippo/YAP信号通路、抑制YAP表达来减轻CHF大鼠心肌纤维化。

纳布啡调节Hippo/YAP信号通路对结肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的研究纳布啡通过调节Hippo/YAP信号通路对结肠癌(Colon cancer,CC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人结肠癌细胞HCT-116,先用CCK-8法检测纳布啡浓度对HCT-116细胞的活性影响,根据结果选出合适的纳布啡浓度。然后将HCT-116细胞分为对照组(未进行其他处理)、低浓度纳布啡组(0.10 mmol/L)、高浓度纳布啡组(0.15 mmol/L)、高浓度纳布啡(0.15 mmol/L)+XMU-MP-1组(3μmol/mL Hippo/YAP信号通路抑制剂)。然后采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blot检测各组细胞中磷酸化YAP(p-YAP)、YAP、PCNA、BAX、EMT相关蛋白E钙黏附蛋白(E-cadherin)、N钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子(Snail)的表达。结果与对照组比较,低浓度纳布啡组、高浓度纳布啡组HCT-116细胞的细胞存活率、细胞迁移数目、YAP、PCNA、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低,细胞凋亡率、p-YAP、BAX、E-cadherin含量升高(P<0.05);与高浓度纳布啡组比较,高浓度纳布啡+XMU-MP-1组HCT-116细胞存活率、细胞迁移数、YAP、PCNA、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达升高,而细胞凋亡率、p-YAP、BAX、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论纳布啡可能通过激活Hippo/YAP信号通路进而抑制CC细胞的增殖,促进细胞凋亡,影响细胞上皮间质转化。

冬凌草甲素调节Hippo/YAP信号通路对骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡的影响

目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组。干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达。结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P<0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P<0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P<0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P<0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+Verteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P<0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状。

槐耳多糖调节YAP/TAZ信号通路对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨槐耳多糖(PST)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞生物学行为的影响。方法 将OS细胞系G292细胞分为G292组(未做任何处理的G292细胞)、L-PST组(1μg/mL PST)、M-PST组(2.5μg/mL PST)、H-PST组(5μg/mL PST)、GA-017组(10μmol/L YAP/TAZ信号通路激活剂GA-017处理G292细胞)、H-PST+GA-017组(5μg/mL PST+10μmol/L GA-017)。CCK-8法检测细胞活性;流式细胞术检测G292细胞凋亡;划痕实验以及Transwell法检测G292细胞迁移和侵袭;Western blot检测YAP/TAZ通路蛋白、EMT相关蛋白、凋亡蛋白水平。结果 PST抑制OS细胞系MG63、Saos-2、U20S、G292细胞活性,且G292细胞的A_(450)最小,因此,以G292细胞为研究对象。与G292组相比,M-PST组、H-PST组G292细胞A_(450)值、迁移率、侵袭数量以及vimentin、N-cadherin、Bcl-2、p-YAP/YAP、TAZ蛋白水平均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),GA-017组呈现相反的趋势(P<0.05),而L-PST组没有显著差异(P>0.05);GA-017削弱了H-PST对G292细胞恶性行为的抑制作用。结论 PST可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来抑制OS细胞的增殖、迁移和侵袭。

靶向Hippo信号通路治疗原发性肝癌的研究进展

原发性肝癌(肝癌)是临床常见恶性肿瘤,包括肝细胞癌(HCC)和肝内胆管细胞癌(ICC)。近年来,肝癌发病率呈不断上升趋势,2020年全球原发性肝癌发病率为4.7%,死亡率为8.3%,位居全球常见恶性肿瘤第5位和肿瘤致死病因第3位^([1])。因早期诊断难,且具有高转移、高复发等特点,大多数患者确诊时已处于中晚期,导致肝癌预后差,5年生存率低于15%^([2])。

布托啡诺通过Hippo/YAP信号通路影响骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨布托啡诺(BPH)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关的作用机制。方法:将MG-63细胞分为对照组、YAP抑制剂组(维替泊芬组)和BPH低、中、高浓度组,MTT法、克隆形成实验、FCM术、划痕愈合实验、Transwell实验、qPCR法、WB法和移植瘤实验分别检测处理后各组细胞的增殖活性、克隆形成数、细胞凋亡率、划痕愈合率,以及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达和YAP、TAZ蛋白的表达,同时观察BPH和维替泊芬对移植瘤生长的影响。结果:与对照组相比,维替泊芬组和BPH低、中、高浓度组细胞增殖活性、克隆数、划痕愈合率、侵袭细胞数,以及N-cadherin和vimentin m RNA水平、YAP和TAZ蛋白表达及移植瘤体积均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin mRNA水平及对移植瘤的抑瘤率均升高(均P<0.05),且BPH高浓度组与维替泊芬组之间各项指标均无明显差异(均P>0.05)。结论:BPH可能通过抑制Hippo/YAP信号通路来抑制OS细胞MG-63增殖、迁移和侵袭。

Hippo及Notch信号通路在眼睑基底细胞癌中的研究进展

眼睑基底细胞癌(BCC)是眼睑恶性肿瘤中最常见的类型。手术切除是治疗眼睑BCC的公认金标准,但对于局部晚期或转移性BCC,较大的手术风险和不良预后是困扰医患的最大问题,因此有必要探索新治疗方案。目前靶向治疗具有良好前景,但现有的靶向药物(Hedgehog信号通路抑制剂)面临难以完全清除肿瘤、毒性作用严重以及耐药的发生问题。鉴于以上情况,开发新的靶向药物对治疗该病具有重要意义。Hippo信号通路和Notch信号通路在眼睑BCC的发生和发展中起着重要作用,可能成为治疗的新靶点。因此,本文综述了Hippo信号通路和Notch信号通路在眼睑BCC中的研究进展,旨在为眼睑BCC的靶向治疗提供新的思路。

Hippo-YAP信号通路在运动性心肌肥大中的调控作用

背景:Hippo-YAP信号通路是一种在不同物种间高度保守的信号级联,在影响生理性心肌肥大的研究中引发广泛关注。研究发现,众多途径如机械力、自噬、能量代谢参与调控运动性心肌肥大,这些途径可能在运动后与Hippo-YAP信号通路发生相互作用,从而影响运动性心肌肥大的形成和发展。目的:总结运动对Hippo-YAP信号通路的影响,阐述Hippo-YAP信号通路在调控运动性心肌肥大中的潜在机制。方法:以“Hippo-YAP信号通路、YAP/TAZ、运动性心肌肥大、心脏、运动”为中文检索词,以“Hippo-YAP signaling pathway,YAP/TAZ,exercise-induced cardiac hypertrophy,physiological hypertrophy,heart,exercise”为英文检索词,检索1983-2022年分别收录在中国知网、PubMed和Web of Science数据库的相关文献,对符合筛选标准的70篇文献进行综述。结果与结论:Hippo-YAP信号通路受到运动的影响,并且在运动诱导的生理性心肌肥大中具有一定的调控作用。①Hippo-YAP信号通路感应运动触发的机械力刺激,导致YAP/TAZ活性和表达发生改变,介导心肌细胞对机械信号的应答。②Hippo-YAP信号通路调节心肌细胞自噬,维护运动中心肌细胞内环境稳态和正常的结构及生理功能。③Hippo-YAP信号通路可能参与运动性心肌肥大发生过程中能量物质的氧化和糖酵解反应,也可能受到运动期间能量变化的影响。④Hippo-YAP信号通路可能在运动的作用下加强与某些生理性心肌肥大相关ncRNA的联系,多种ncRNA可能共同调节Hippo-YAP信号传导。⑤Hippo-YAP信号通路与胰岛素生长因子1/胰岛素生长因子受体等运动性心肌肥大经典途径发生相互作用,运动促进它们之间的信号传导交互,参与调控运动性心肌肥大。⑥深入研究Hippo-YAP信号通路在运动性心肌肥大中的调控作用,有助于深化对运动促进心脏健康的理解,为临床防治心脏疾病和心肌组织构建提供新的思路和策略。

长链非编码RNA LINC-PINT通过Hippo/YAP信号通路在缺氧诱导的头颈部鳞状细胞癌药物敏感性中的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA LINC-PINT通过Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路在缺氧诱导的头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)药物敏感性中的作用。方法 CCK-8法检测低氧环境中HNSCC细胞系(AGZY-973、HN4和HN30细胞)及正常人口腔角质形成细胞(NHOKs)增殖变化;取状态较好的HN30细胞,设置为正常组、低氧组、低氧+LINC-PINT过表达组、低氧+过表达阴性对照组。qRT-PCR检测HN30细胞中LINC-PINT表达水平;CCK-8法检测HN30细胞的药物敏感性及顺铂对HN30细胞增殖影响;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测HN30细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、p-YAP、YAP蛋白表达水平。结果 在低氧条件下,AGZY-973细胞、HN4细胞和HN30细胞增殖率较NHOKs细胞显著增加(P<0.05)。与正常组相比,低氧组HN30细胞IC50值、HIF-1α、p-YAP/YAP表达显著增加,细胞凋亡率、24 h和48 h细胞生长抑制率、LINC-PINT表达水平显著降低(P<0.05);与低氧+过表达阴性对照组相比,低氧+LINC-PINT过表达组HN30细胞IC50值、HIF-1α、p-YAP/YAP表达显著降低,细胞凋亡率、24 h和48 h细胞生长抑制率、LINC-PINT表达水平显著增加(P<0.05)。结论 过表达LINC-PINT可提高缺氧诱导的HNSCC顺铂敏感性,可能与抑制Hippo/YAP信号通路的激活有关。

他克莫司调节YAP/TAZ信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨他克莫司(FK506)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将对数生长期SKOV3细胞分为对照组、阴性对照(si-NC)组(转染si-NC质粒)、沉默YAP载体(si-YAP)组(转染si-YAP)、过表达质粒阴性对照(pcDNA-NC)组(转染pcDNA-NC)、过表达YAP质粒(pcDNA-YAP)组(转染pcDNA-YAP)、FK506组(500μg/L)、FK506+si-NC组(500μg/L FK506+转染si-NC质粒)、FK506+si-YAP组(500μg/L FK506+转染si-YAP)、FK506+pcDNA-NC组(500μg/L FK506+转染pcDNA-NC)、FK506+pcDNA-YAP组(500μg/L FK506+转染pcDNA-YAP)。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测YAP、TAZ mRNA表达,Western blot检测YAP、TAZ、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Bcl2-相关X蛋白(Bax)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平。结果:与IOSE80相比,SKOV3、OVCAR3、UWB1.289细胞中YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与pcDNA-NC组相比,pcDNA-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与对照组相比,FK506组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、AZ、CyclinD1、MMP-2蛋白表达均显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P<0.05);与FK506+si-NC组相比,FK506+si-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2表达显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P<0.05);与FK506+pcDNA-NC组相比,FK506+pcDNA-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2表达显著增加,凋亡率及Bax表达显著降低(P<0.05)。结论:FK506通过抑制YAP/TAZ信号通路阻止SKOV3细胞增殖、侵袭,诱导其凋亡。

Hippo/YAP途径在肿瘤细胞信号通路交互调控中的作用

Hippo/YAP信号通路在维持组织动态平衡和器官再生中发挥重要作用。近几年,越来越多研究表明Hippo/YAP途径与其他肿瘤相关细胞信号通路交互调控,从而影响多种肿瘤的发生和发展过程。本文主要综述了Hippo/YAP信号通路的组成、调控机制,以及Hippo通路关键因子YAP在与其他肿瘤相关细胞信号通路交互调控中的功能及其分子机制。本文将为深入挖掘并揭示Hippo/YAP通路在肿瘤发生中的作用,并以此为开发靶向药物提供思路。

circ_0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/YAP信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖迁移和侵袭

目的:探究circ-0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/Yap信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:RT-PCR检测HIOEC、Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414表达。将未转染任何质粒的SCC-9细胞设为Control组;将分别转染pcDNA-circ-0086414、pcDNA-NC、miR-155-5p inhibitor、miR-NC inhibito质粒的SCC-9细胞中,并设为pcDNA-circ-0086414组、pcDNA-NC组、miR-155-5p组、miR-NC组;将pcDNA-circ-0086414质粒转染于SCC-9细胞中,同时在培养基中加入5μmoL/L Verteporfin共同培养,设为Verteporfin组。RT-PCR检测细胞中circ-0086414、miR-155-5p表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测细胞中Lats1、p-Lats1、YAP、p-YAP蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验验证circ-0086414和miR-155-5p的靶向关系。结果:和人永生化口腔上皮细胞HIOECcirc-0086414(1.00±0.10)、miR-155-5p(1.00±0.09)相比,口腔鳞癌细胞株Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414(0.73±0.07)、(0.51±0.05)、(0.36±0.03)表达明显降低,miR-155-5p(1.36±0.11)、(1.57±0.13)、(1.89±0.15)表达明显升高(P<0.05);且SCC-9细胞中circ-0086414表达和miR-155-5p表达变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞中circ-0086414表达(1.26±0.12)明显升高,miR-155-5p组细胞中miR-155-5p表达(0.73±0.07)明显降低(P<0.001)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞增殖、侵袭(123.56±5.87)和迁移(16.90±1.62)能力均明显降低(P<0.05);和pcDNA-circ-0086414组相比,Verteporfin组细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增加(P<0.05)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞中Last1(1.12±0.10)、p-Last1(1.49±0.12)、p-YAP(1.41±0.11)蛋白表达明显增加,YAP蛋白(0.45±0.04)表达明显降低(P<0.001);和pcDNA-circ-0086414组相比,Verteporfin组细胞中Last1(0.61±0.06)、p-Last1(0.82±0.08)、p-YAP蛋白(0.58±0.05)表达明显降低,YAP蛋白(0.93±0.09)表达明显升高(P<0.001)。野生型circ-0086414(circ-0086414-WT)miR-155-5p组(0.26±0.03)荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.05)。结论:过表达circ-0086414可抑制口腔鳞癌SCC-9细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制和抑制miR-155-5p表达,激活Hippo-Yap信号通路相关。

基于Hippo/TAZ信号通路探讨胃苏颗粒对幽门螺杆菌诱导的慢性萎缩性胃炎的作用

目的探讨胃苏颗粒(WSG)对幽门螺杆菌诱导的慢性萎缩性胃炎(CAG)动物模型的影响及其作用机制。方法将50只SD大鼠按随机数表法分为对照组、模型组和WSG低、中、高剂量组。除对照组外,其余组建立幽门螺杆菌感染的CAG模型。从第8周开始,WSG低、中、高剂量组每日分别灌胃8 mg/kg、16 mg/kg、32 mg/kg的WSG,连续4周。试验结束时,通过HE染色评估胃黏膜损伤的组织病理学改变。采用qPCR和Western Blot分析胃组织中LATS2、TAZ的mRNA和蛋白表达。用幽门螺杆菌感染GES-1细胞,并用WSG对其进行干预。采用CCK-8试验分析细胞活力,并分析Hippo/TAZ信号通路表达情况。结果干预4周后,WSG各剂量组胃黏膜损伤明显减轻,胃黏膜糜烂长度明显缩短,UI评分和炎症评分均呈剂量依赖性降低,组间差异有统计学意义(P<0.05)。幽门螺杆菌可显著增加TAZ的表达,并降低LATS2的表达。WSG治疗以剂量依赖的方式逆转了TAZ和LATS2表达的变化,特别是与CAG组相比,WSG中、高剂量的TAZ和LATS2蛋白和mRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05)。与幽门螺杆菌感染组相比,40μmol/L(83.44±5.46)和20μmol/L WSG组(75.47±8.31)的GES-1细胞活力显著增加,组间差异有统计学意义(P<0.05)。qPCR和免疫荧光染色的结果显示,WSG干预增加了GES-1细胞中LATS2、WWC2表达,但降低了TAZ表达。WWC2 siRNA预处理削弱了WSG诱导的LATS2活化,并促进了TAZ的表达(P<0.05)。结论幽门螺杆菌诱导CAG的形成与Hippo/TAZ信号通路有关,WSG可能通过抑制Hippo/TAZ信号传导发挥了其胃肠道的保护作用。

Hippo信号通路转录效应因子TAZ/YAP对间充质干细胞分化的调控

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种多能性细胞,可分化为软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等不同世系细胞。一些世系特异性转录因子,如Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)、过氧化物增殖子激活型受体γ(Peroxisome proliferator-activator receptor gamma,PPARγ)、肌发生分化因子1(Myogenic differentiation 1,MyoD)等在MSCs分别向成骨、脂肪和生肌细胞分化过程中具有关键的调控作用。近几年研究发现,Hippo信号通路可通过其转录效应因子TAZ(Tafazzin)/YAP(Yes-associated protein)对上述世系特异性转录因子进行调控,从而影响MSCs的分化方向。TAZ与RUNX2结合可增强骨发生程序的执行并促进MSCs向成骨分化,而与PPAR-γ结合则会抑制MSCs向脂肪细胞方向分化。在MSC样细胞中,TAZ异位表达会以一种MyoD依赖方式增加生肌基因表达并加速肌纤维生成。此外,BMP-2、TNF-α、Eph-Ephrin等信号通路,小分子药物(KR62980、TM-25659等)以及机械刺激都可通过调控Hippo信号通路转录效应因子TAZ/YAP活性影响MSCs的命运决定。文章综述了哺乳动物Hippo信号通路的转导途径,转录效应因子TAZ/YAP与间充质世系特异性转录因子的作用机理,及与其他信号通路相互作用对MSCs分化的影响。

Hippo-TAZ/YAP信号通路在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

Hippo信号通路是近年来新发现的一个高度保守的蛋白激酶级联通路。其中,TAZ/YAP是该信号通路中核心的效应分子。大量研究证实,TAZ/YAP与人类大多数恶性肿瘤的发生或生长密切相关,其异常活化可促进肿瘤细胞增殖、侵袭转移、增强化疗耐药及获得干细胞样特性。近年来研究表明,TAZ/YAP异常活化与头颈部肿瘤的发生发展密切相关,其有可能作为头颈部肿瘤治疗的潜在靶点。本文综述Hippo通路的最新研究进展,重点关注的是该通路中的TAZ/YAP在头颈部鳞状细胞癌中的调控作用,为头颈部鳞状细胞癌的研究和治疗提供新的思路和策略。