HPV16E6对Hippo途径的效应分子YAP的影响

目的研究HPV16E6和Hippo途径的效应分子YAP的相关性。方法用Western Blot、Real-Time qRTPCR和激光扫描共聚焦显微镜观察Caski细胞HPV16E6过表达或被敲减后YAP的表达和定位及其直接作用的下游基因结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果 Caski细胞HPV16E6被敲减或过表达时,YAP相应地表达减少或增加,磷酸化YAP增加或减少,YAP下游分子CTGF的mRNA表达相对应减少或升高。YAP主要定位于胞浆或胞核胞浆中,磷酸化YAP主要定位于胞浆,非磷酸化YAP主要定位于胞核。结论 HPV16E6诱导Hippo途径失常,胞核YAP表达升高,CTGF表达相应增多,提升HPV16E6的致癌性。Hippo途径可能是治疗高危性HPV16感染相关疾病的候选药物作用途径之一。

Hippo途径在铁死亡中的作用

Hippo途径主要由丝/苏氨酸激酶MST1/2、LATS1/2以及转录共激活因子YAP组成,与细胞生长、存活、增殖、迁移,组织器官大小控制以及肿瘤的发生发展密切相关。铁死亡是一种以铁依赖的活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累以及质膜多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)耗竭为特征的可调控的细胞死亡形式,由体内氧化–抗氧化体系失衡引起。该文以铁死亡为切入点,阐述了Hippo途径在不同细胞死亡类型中所起到的作用,为细胞命运的调控以及肿瘤的治疗提供思路。

HPV16 E6对Hippo途径效应分子YAP表达和定位的影响

[目的]研究HPV16 E6和Hippo途径效应分子YAP的相关性。[方法]用Western Blot、RT-PCR和激光共聚焦显微镜观察HPV16 E6过表达或敲减后YAP的表达和定位,以及其直接作用的下游基因结缔组织生长因子(CTGF)的表达。[结果]HPV16 E6敲减或过表达时YAP相应地表达减少或增加,磷酸化的YAP增加或减少,YAP主要定位于胞浆或胞浆和胞核中,YAP下游CTGF的表达相对应减少或增加。[结论]HPV16 E6诱导Hippo途径失常,YAP的表达升高,可能提升HPV16 E6的致癌性,Hippo途径可能是治疗高危性HPV感染相关疾病的候选药物作用靶标。

阿司匹林通过调节Hippo途径抑制大鼠颅内动脉瘤的形成和机制

目的:探讨阿司匹林通过调节Hippo途径抑制大鼠颅内动脉瘤形成的机制。方法:选择40只健康SD大鼠分为对照组(不做任何处理)、假手术组(暴露双侧肾动脉后支和左颈总动脉,但不结扎)、动脉瘤组(结扎双侧肾动脉后支和左颈总动脉后生理盐水灌胃)和阿司匹林组(动脉结扎后阿司匹林灌胃),各10只。灌胃12周后检测血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10]、血管内皮损伤标志物[一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)]。处死大鼠后,检测动脉瘤大小、壁厚比、内腔面积和中膜变薄长度,检测动脉瘤血管组织中Yes相关蛋白(YAP)表达情况。结果:(1)动脉瘤组和阿司匹林组大鼠Willis环上有明显凸起,且阿司匹林组大鼠凸起明显小于动脉瘤组。阿司匹林组大鼠动脉瘤大小、内腔面积和中膜变薄长度均显著小于动脉瘤组,壁厚比显著大于动脉瘤组(P<0.05)。(2)动脉瘤组和阿司匹林组大鼠血清TNF-α、MCP-1、IL-6水平显著高于对照组和假手术组,IL-10水平显著低于对照组和假手术组(P<0.05);阿司匹林组大鼠血清TNF-α、MCP-1、IL-6水平显著低于动脉瘤组,IL-10水平显著高于动脉瘤组(P<0.05)。(3)动脉瘤组和阿司匹林组大鼠血清NO水平显著低于对照组和假手术组,ET-1和VEGF水平显著高于对照组和假手术组(P<0.05);阿司匹林组大鼠血清NO水平显著高于动脉瘤组,ET-1和VEGF水平显著低于动脉瘤组(P<0.05)。(4)动脉瘤组和阿司匹林组大鼠YAP蛋白表达相对吸光值显著高于对照组和假手术组(P<0.05);阿司匹林组大鼠YAP蛋白表达相对吸光值显著低于动脉瘤组(P<0.05)。结论:阿司匹林能够显著减轻颅内动脉瘤大鼠炎性反应,改善血管内皮功能,抑制颅内动脉瘤形成,这可能与阿司匹林调控Hippo信号通路有关。

LATS2介导Hippo信号途径调控间充质干细胞生物学行为的实验研究

目的探讨通过大肿瘤抑制因子2(LATS2)介导Hippo信号途径对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学行为的调控效应。方法体外培养C57BL/6小鼠BMSCs,传至第6~7代用于实验。采用慢病毒载体转染分别构建高表达或低表达LATS2的BMSCs模型;根据不同转染试剂设置空白对照组(MSC组)、空载体对照组(MSC-eGFP组)、高表达LATS2组(MSC-LATS2组)、空干扰病毒转染组(MSC-shcontrol组)和干扰LATS2病毒转染组(MSC-shLATS2组)。采用流式细胞仪检测慢病毒转染效率;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测LATS2及其下游共转录因子磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)、14-3-3的mRNA与蛋白表达;采用茜素红、油红O染色观察BMSCs成骨、成脂分化情况;采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测BMSCs数量;采用划痕实验及Transwell迁移实验评估Hippo信号途径对BMSCs水平和垂直迁移能力的影响。结果慢病毒载体转染效率高达93.1%~97.1%。MSC-LATS2组LATS2、p-YAP、14-3-3表达均较MSC-eGFP组显著增高〔LATS2 mRNA(2-ΔΔCT):2.55±0.13比1.08±0.05,LATS2/GAPDH:2.63±0.11比1.06±0.08,p-YAP/总YAP:1.67±0.11比1.00±0.04,14-3-3/β-actin:2.22±0.20比0.98±0.06,均P<0.05〕,MSC-shLATS2组均较MSC-shcontrol组显著降低〔LATS2 mRNA(2-ΔΔCT):0.10±0.01比1.01±0.05,LATS2/GAPDH:0.09±0.01比1.05±0.06,p-YAP/总YAP:0.10±0.02比1.10±0.09,14-3-3/β-actin:0.05±0.01比0.90±0.08,均P<0.05〕,说明高表达及低表达LATS2可以活化或抑制Hippo信号途径。光镜下观察显示,MSC-LATS2组诱导成骨、成脂分化后,钙质沉积及脂质颗粒沉积较MSC-eGFP组显著减少,MSC-shLATS2组均较MSC-shcontrol组显著增加,说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs成骨、成脂分化。MSC-LATS2组BMSCs增殖率较MSC-eGFP组显著下降,MSC-shLATS2组BMSCs增殖率较MSC-shcontrol组显著增高,说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs增殖。划痕实验和Transwell迁移实验显示,MSC-LATS2组划痕弥合程度较MSC-eGFP组显著减小〔(22.11±3.02)%比(45.99±6.58)%〕,迁移至Transwell小室膜下层细胞数显著减少(个/中倍视野:20.82±3.05比111.33±13.28,均P<0.05);MSC-shLATS2组划痕弥合程度较MSC-shcontrol组显著增加〔(70.32±7.17)%比(39.28±2.98)%〕,而迁移至Transwell小室膜下层细胞数显著增加(个/中倍视野:206.19±30.58比120.10±25.10,均P<0.05),说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs的水平和垂直迁移能力。结论通过LATS2可介导Hippo信号途径调控BMSCs的分化、增殖和迁移能力。

LATS在套细胞淋巴瘤中的表达及其预后价值

目的 探讨大肿瘤抑制因子（LATS）1、LATS2 mRNA在套细胞淋巴瘤（MCL）中的表达情况及其预后意义.方法 选取2008年1月至2011年4月在中国医学科学院血液学研究所血液病医院淋巴瘤诊疗中心就诊的小B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者共36例,其中MCL 16例,慢性淋巴细胞白血病（CLL）11例,脾边缘区淋巴瘤（SMZL）9例;以8名健康供者作为健康对照.采用实时定量RT-PCR方法检测Hippo 途径的效应分子YAP及LATS1、LATS2 mRNA的表达水平.结果B-NHL患者中MCL、CLL、SMZL 的YAP mRNA 的表达水平均显著高于健康对照（对数值：1.97 ± 0.79、1.83 ±0.54、2.12 ±0.42比1.21 ±1.56,均P〈0.05）.LATS1、LATS2在MCL患者中的表达与患者是否存在遗传学异常、无进展生存及总生存密切相关,P53缺失阳性组LATS1的表达水平低于P53缺失阴性组（对数值：0.75 ±0.27比1.10 ±0.19,P=0.035）,死亡组LATS1的表达水平低于生存组（对数值：0.76 ±0.27比1.15 ±0.17,P=0.026）,LATS1高表达水平者,其无进展生存和总生存时间均长于低表达患者[（70.4 ±32.7）比（5.6 ±2.2）个月,P=0.044;（123.8 ±22.0）比（7.7 ±2.2）个月,P=0.017].结论 YAP在B-NHL患者中的表达较健康人为高,表明B-NHL患者特别是MCL患者中,存在Hippo途径的表达异常.LATS1、LATS2 mRNA在MCL患者中的低表达与部分临床预后因素相关,可能是MCL患者预后较差的指标.