利多卡因调节Hippo-YAP信号通路对原位肝移植大鼠缺血再灌注损伤的影响

目的探究利多卡因(LID)对原位肝移植(OLT)大鼠缺血再灌注损伤的影响,并分析其作用机制。方法随机将60只大鼠平均分为维替泊芬(Verteporfin)组、LID高剂量组、LID中剂量组、LID低剂量组、模型组和对照组,除对照组大鼠外的其余大鼠构建OLT模型。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-1β和IL-10水平,荧光探针法检测活性氧(ROS),硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA),氮蓝四唑显色法检测超氧化物歧化酶(SOD),分光光度计法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),原位末端标记法(TUNEL)检测肝组织细胞凋亡,蛋白印迹法(Western blot)检测Hippo-YAP信号通路相关蛋白哺乳动物STE20样蛋白激酶(MST1)、磷酸化(p)-MST1、大肿瘤抑制因子1(LATS1)、p-LATS1、Yes相关蛋白(YAP)、p-YAP以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肝组织出现损伤,肝细胞坏死且大量炎性细胞浸润,细胞凋亡率、血清AST、ALT、TBIL、LDH活性、肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、ROS、Bax水平显著升高,肝组织IL-10、SOD、GSH-Px及Bcl-2、p-MST1/MST1、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,LID低、中、高剂量组的肝组织损伤减轻,细胞凋亡率、血清AST、ALT、TBIL、LDH活性、肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、ROS、Bax水平显著降低,肝组织IL-10、SOD、GSH-Px及Bcl-2、p-MST1/MST1、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP蛋白表达的水平显著升高(P<0.05);Hippo-YAP信号通路抑制剂Verteporfin逆转了LID对OLT大鼠缺血再灌注损伤的改善作用(P<0.05)。结论LID可能通过激活Hippo-YAP通路,减少炎症反应、氧化应激和肝细胞凋亡,对OLT大鼠肝缺血再灌注损伤发挥改善作用。

牛蒡子苷元通过调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究牛蒡子苷元调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将人子宫颈鳞癌细胞SiHa分为对照组、低浓度牛蒡子苷元组(5.0μmol/L)、中浓度牛蒡子苷元组(10.0μmol/L)、高浓度牛蒡子苷元组(20.0μmol/L)和高浓度牛蒡子苷元(20.0μmol/L)+TDI-011536组(3μmol/LHippo信号通路抑制剂)。分组处理后,集落形成实验检测细胞活性;Transwell实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;免疫荧光技术检测细胞中Vimentin和E-Cadherin;蛋白质免疫印迹技术检测p-YAP、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达。结果与对照组比较,低浓度牛蒡子苷元组、中浓度牛蒡子苷元组、高浓度牛蒡子苷元组SiHa的细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达均降低,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达升高(P<0.05);与高浓度牛蒡子苷元组比较,高浓度牛蒡子苷元+TDI-011536组SiHa细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达升高,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达降低(P<0.05)。结论牛蒡子苷元可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。

水苏碱调节Hippo-YAP信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探究水苏碱(stachydrine,STA)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的神经保护作用,并分析其作用机制。方法将新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、STA低剂量(5 mg/kg)组、STA中剂量(10 mg/kg)组、STA高剂量(20 mg/kg)组、维替泊芬(10 mg/kg)+STA高剂量(20 mg/kg)组,除假手术组外,其余大鼠构建HIBD大鼠模型。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用Morris水迷宫实验进行认知功能评价,测定各组大鼠脑含水量和脑指数,HE染色、尼氏染色观察脑组织神经元损伤,TUNEL染色观察脑组织神经元细胞凋亡情况,Western blot法检测YES相关蛋白(YES associated protein,YAP)、p-YAP、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)、p-MST1、具有PDZ基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达。结果与假手术组比较,HIBD组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05);与HIBD组相比,STA低、中、高剂量组海马组织损伤改善,尼氏小体增加(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著降低(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著增加(P<0.05);与STA高剂量组相比,维替泊芬+STA高剂量组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05)。结论STA可能通过调控Hippo-YAP信号通路、减少神经损伤和神经元细胞凋亡、改善神经功能,发挥对HIBD新生大鼠的神经保护作用。

基于Hippo-YAP信号通路探讨黄芩苷干预膝骨关节炎大鼠的疗效和作用机制

目的:探讨黄芩苷干预膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效和作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组,每组10只。将假手术组以外的大鼠采用切断前交叉韧带和切除内侧半月板的方法建立右膝关节KOA模型,假手术组大鼠于右膝关节内侧做一切口后缝合。造模成功后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组大鼠分别按照50 mg·kg^(-1)、100 mg·kg^(-1)的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃;高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠按照100 mg·kg^(-1)的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃,并按照1 mg·kg^(-1)的剂量给予XMU-MP-1溶液腹腔注射;假手术组和模型组大鼠均给予等量生理盐水灌胃。每天给药1次,连续给药30 d。分别于给药前、给药15 d时、给药30 d时测量大鼠双侧膝关节肿胀程度。给药结束后处死大鼠,取大鼠右侧膝关节软骨组织,采用苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色观察膝关节软骨组织病理变化,采用Mankin评分标准评价软骨退变情况,采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13表达水平,采用Western blotting检测滑膜组织中切割活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-cysteine aspartic acid specific protease,Cleaved-Caspase)-3、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、Tafazzin(TAZ)蛋白的表达水平。结果:①大鼠右膝关节肿胀程度。给药15 d时和给药30 d时,高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节肿胀程度均低于模型组、低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节肿胀程度两两比较,差异均无统计学意义(P=0.063,P=0.215,P=0.399;P=0.052,P=0.261,P=0.240)。②大鼠右膝关节软骨组织病理变化。干预结束后,模型组大鼠右膝关节软骨萎缩、排列混乱;低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨萎缩、细胞排序情况均较模型组改善,且高剂量黄芩苷组大鼠的改善情况优于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组。③大鼠右膝关节软骨Mankin评分。干预结束后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨Mankin评分均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高剂量黄芩苷组右膝关节软骨Mankin评分低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000),低剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨Mankin评分低于高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000)。④大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、IL-10、MMP-13表达水平。低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13表达水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),IL-10表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13表达水平均低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),IL-10表达水平高于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000)。⑤大鼠右膝关节软骨组织细胞凋亡及Hippo-YAP信号通路相关蛋白表达水平。低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨组织中Cleaved-Caspase-3、Bax表达水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),BCL-2、YAP、TAZ表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨组织中Cleaved-Caspase-3、Bax表达水平均低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),BCL-2、YAP、TAZ表达水平均高于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000)。结论:黄芩苷干预KOA大鼠,能够缓解膝关节肿胀,抑制炎症反应和细胞凋亡,延缓关节软骨退变,其作用机制可能与激活Hippo-YAP信号通路有关。

岭南火针通过调控Hippo-YAP信号通路抑制白癜风模型小鼠黑素细胞凋亡

[目的]基于Hippo-YAP信号通路探讨岭南火针对氢醌诱导的氧化应激后白癜风模型的影响。[方法]将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(Control)、模型对照组(HQ)、HQ+卤米松组(Halometasone)、HQ+岭南火针组(FA),每组8只。采用氢醌(HQ)建立白癜风模型。通过脱色评分、HE染色、Masson-Fontana法观察皮肤病理学改变;ELISA法检测各组血浆酪氨酸酶(TYR)、丙二醛(MDA)含量及血清单胺氧化酶(MAO)活性;Western-blot检测皮肤组织YAP1、TP73蛋白表达量;PCR法检测Yap1、Tp73表达水平。[结果]与Control组相比,造模后,小鼠表皮层和真皮层明显增厚,含黑素细胞毛囊数、基底层黑素细胞数、含黑素颗粒表皮细胞数明显减少,脱色评分明显提高,TYR水平下降,MDA、MAO水平上升,Yap1、Tp73低表达(P<0.01)。经过4周治疗后,Halometasone组、FA组真皮层变薄,皮肤脱色评分下降,黑素细胞毛囊数、基底层黑素细胞数、含黑素颗粒表皮细胞数增加(P<0.05),两个治疗组TYR水平与HQ组相比显著升高(P<0.01),MDA含量与HQ组相比显著下降(P<0.01),FA组MAO活性值与HQ组相比下调(P<0.05)。FA组Yap1和Tp73表达与HQ组相比明显上调(P<0.01),且趋势强于Halometasone组(P<0.05)。[结论]岭南火针可能通过激活Hippo-YAP通路保护黑素细胞免受氢醌诱导的氧化应激损伤,降低氧化应激产物含量及其活性,提升黑素细胞的合成及功能,从而起到促进白斑复色的作用。

周期性张应力作用下Hippo-YAP信号通路调控人牙周膜细胞自噬

目的探究周期性张应力(CTS)作用下人牙周膜细胞(hPDLCs)自噬激活的分子机制。方法分离培养正常牙周组织的hPDLCs,利用Forcel四点弯曲细胞加力仪对hPDLCs加载张应力模拟正畸牙移动过程中正畸力诱导的张力侧hPDLCs自噬,利用XMU-MP-1抑制Hippo信号通路探究Hippo-YAP信号通路在张应力激活hPDLCs自噬中的作用。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLCs自噬相关基因(Beclin-1、LC3、p62)的表达;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测hPDLCs自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62)及Hippo-YAP通路相关蛋白(active-YAP、p-YAP)的表达;采用免疫荧光染色定位hPDLCs自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、p62)及Hippo-YAP通路相关蛋白(active-YAP)。结果CTS激活hPDLCs的自噬,自噬相关因子表达随加力时间的延长呈先升高后降低的趋势,30 min自噬开始,3 h达到高峰,随后出现下调(P<0.05);CTS促进active-YAP蛋白表达增加,p-YAP蛋白表达降低(P<0.05)。XMU-MP-1抑制Hippo-YAP信号通路后(P<0.05),促进active-YAP蛋白进入细胞核,自噬表达增强(P<0.05)。结论Hippo-YAP信号通路参与CTS作用下hPDLCs自噬激活的调控。

Hippo-YAP信号通路在运动性心肌肥大中的调控作用

背景:Hippo-YAP信号通路是一种在不同物种间高度保守的信号级联,在影响生理性心肌肥大的研究中引发广泛关注。研究发现,众多途径如机械力、自噬、能量代谢参与调控运动性心肌肥大,这些途径可能在运动后与Hippo-YAP信号通路发生相互作用,从而影响运动性心肌肥大的形成和发展。目的:总结运动对Hippo-YAP信号通路的影响,阐述Hippo-YAP信号通路在调控运动性心肌肥大中的潜在机制。方法:以“Hippo-YAP信号通路、YAP/TAZ、运动性心肌肥大、心脏、运动”为中文检索词,以“Hippo-YAP signaling pathway,YAP/TAZ,exercise-induced cardiac hypertrophy,physiological hypertrophy,heart,exercise”为英文检索词,检索1983-2022年分别收录在中国知网、PubMed和Web of Science数据库的相关文献,对符合筛选标准的70篇文献进行综述。结果与结论:Hippo-YAP信号通路受到运动的影响,并且在运动诱导的生理性心肌肥大中具有一定的调控作用。①Hippo-YAP信号通路感应运动触发的机械力刺激,导致YAP/TAZ活性和表达发生改变,介导心肌细胞对机械信号的应答。②Hippo-YAP信号通路调节心肌细胞自噬,维护运动中心肌细胞内环境稳态和正常的结构及生理功能。③Hippo-YAP信号通路可能参与运动性心肌肥大发生过程中能量物质的氧化和糖酵解反应,也可能受到运动期间能量变化的影响。④Hippo-YAP信号通路可能在运动的作用下加强与某些生理性心肌肥大相关ncRNA的联系,多种ncRNA可能共同调节Hippo-YAP信号传导。⑤Hippo-YAP信号通路与胰岛素生长因子1/胰岛素生长因子受体等运动性心肌肥大经典途径发生相互作用,运动促进它们之间的信号传导交互,参与调控运动性心肌肥大。⑥深入研究Hippo-YAP信号通路在运动性心肌肥大中的调控作用,有助于深化对运动促进心脏健康的理解,为临床防治心脏疾病和心肌组织构建提供新的思路和策略。

白藜芦醇通过Hippo-YAP信号通路在TGF-β1诱导胃癌细胞EMT过程中的作用及其机制

目的探讨白藜芦醇(RSVL)通过Hippo-YAP信号通路在TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间充质转化(EMT)过程中的作用及其机制。方法选取胃癌细胞SGC-7901为研究对象,首先将其随机分为空白组、RSVL低剂量组(5μM)、RSVL中剂量组(10μM)、RSVL高剂量组(20μM),通过细胞增殖(MTT)实验确定RSVL浓度,然后对细胞进行转染,分为si-NC组、TGF-β1+10μM RSVL组、TGF-β1+si-YAP组、TGF-β1+pcDNA3.1-YAP组、TGF-β1+10μM RSVL+pcDNA3.1-YAP组。采用MTT、细胞侵袭(Transwell)、划痕实验,分别检测细胞的增殖、侵袭和迁移;采用蛋白质印迹法(WB)和荧光定量PCR检测E-钙粘连蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snali 1、HIP-PO/Yes相关蛋白(YAP)和mRNA。其次,选取24只裸鼠,将其分为模型组、RSVL组(10μM)、RSVL+pcDNA3.1组、RSVL+pcDNA3.1-YAP组,每组各六只。计算小鼠肿瘤的重量和体积;采用免疫组化检测Ki67蛋白。结果RSVL对细胞增殖有抑制作用(P<0.05);与si-NC组相比,其余各组侵袭细胞数、迁移率较低(P<0.05);与si-NC组相比,其余各组E-cadherin蛋白及mRNA表达较高,N-cadherin、Vimentin、Snali 1蛋白及mRNA以及YAP蛋白表达较低(P<0.05);与Model组相比,其余各组小鼠肿瘤的重量和体积均较低(P<0.05);与Model组比较,其余各组Ki67染色强度均显著减弱。结论RSVL可以通过抑制YAP相关通路的激活,来发挥抑制肿瘤细胞SGC-7901上皮间充质转化、增殖、迁移、侵袭的作用。

Hippo-YAP信号通路影响牙周组织炎症及再生的研究进展

牙周炎是一种常见的慢性炎症性疾病,可导致牙周支持组织进行性破坏,在控制炎症的基础上尽可能争取一定程度的牙周组织再生是牙周炎的治疗目标。Hippo信号通路是一条高度保守的信号通路,在机械传导、炎症、干细胞功能调控、细胞增殖和分化,以及肿瘤的发生、发展等过程中都起着重要的作用。本文综述了Hippo-YAP信号通路在牙周组织炎症及牙周组织再生中发挥的作用,以期为牙周炎的治疗提供新的思路。

复方苦参注射液通过调控Hippo-YAP信号通路抑制乳腺癌模型大鼠肿瘤生长和转移的机制研究

目的探讨复方苦参注射液(CKI)对乳腺癌(BC)模型大鼠肿瘤生长和转移的作用,以及对Hippo-YAP信号通路的调节机制。方法将BC细胞MDA-MB-231分为对照组(未处理组),Verteporfin(Hippo-YAP通路抑制剂)组,CKI低、中、高浓度组,采用CCK-8法检测MDA-MB-231细胞存活率;流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-231细胞的迁移能力。构建BC大鼠模型分为对照组,模型组,阳性组(Hippo-YAP通路抑制剂-Verteporfin组),CKI低、中、高剂量组;测量大鼠肿瘤生长情况;HE染色观察肿瘤发生肺转移后肺组织的病理学形态;Western blot检测肿瘤组织中YAP、p-YAP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达。结果体外实验发现,与对照组相比,Verteporfin组和CKI不同浓度组细胞存活率和迁移能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);体内实验显示,与对照组相比,模型组大鼠体内出现肿瘤组织块,肺组织中细胞排列不整齐,肺泡明显皱缩,且间隔增宽,组织异质性明显,YAP、N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高,p-YAP、E-cadherin表达降低(P<0.05);与模型组相比,Verteporfin组和CKI各剂量组大鼠体内肿瘤组织减小,抑瘤率增加,肺组织中细胞排列有序,肺泡皱缩和异质性得到改善,YAP、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低,p-YAP、E-cadherin表达升高(P<0.05)。结论CKI可以通过抑制Hippo-YAP信号通路,来抑制BC模型大鼠肿瘤的生长和转移。

藏红花素调节Hippo-YAP信号通路抑制膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡

目的探讨藏红花素(crocin)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法SD大鼠分为CK组、Model组、低剂量crocin组(crocin-L组,10 mg/kg)、高剂量crocin组(crocin-H组,40 mg/kg)、塞来昔布组(CLCX组,10 mg/kg)、crocin-H+VTPF(YAP抑制剂)组(40 mg/kg+10 mg/kg),每组12只。观察并记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化;ELISA法检测大鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;HE染色检测大鼠软骨组织病理变化并进行Mankin评分;TUNEL染色检测大鼠软骨细胞凋亡;免疫组化、Western blot检测Bcl2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、p-YAP、YAP蛋白表达。结果与CK组比较,Model组大鼠热痛阈值、压痛阈值、p-YAP蛋白表达降低,软骨组织病理损伤严重,MMP-3、MMP-13、IL-1β、IL-6水平、Mankin评分、软骨细胞凋亡率、Bax、Caspase-3、YAP蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,crocin-L组、crocin-H组、CLCX组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);VTPF减弱了高剂量crocin对KOA大鼠软骨细胞凋亡的抑制作用。结论crocin可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制KOA大鼠软骨细胞凋亡。

白花蛇舌草提取物通过Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化

目的:探讨白花蛇舌草提取物对胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化(EMT)的影响,分析其与Hippo-Yap相关蛋白(YAP)信号通路活化的关系。方法:体外培养胰腺癌SW1990细胞,试验分为7组:对照组(不添加任何药物处理),低剂量组(白花蛇舌草提取物20 mg/ml),中剂量组(白花蛇舌草提取物50 mg/ml),高剂量组(白花蛇舌草提取物100 mg/ml),抑制剂组(XMU-MP-1抑制剂),高剂量+抑制剂组,阳性对照组(冬凌草甲素15μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测SW1990细胞凋亡情况;Western blot检测YAP及其磷酸化蛋白(p-YAP)、E钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)、转录因子(Snail)表达情况。结果:与对照组相比,白花蛇舌草提取物不同剂量组SW1990细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组均显著高于中剂量组、低剂量组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组SW1990细胞凋亡率、p-YAP及E-cadherin蛋白表达量均显著降低(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著高于高剂量+抑制剂组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组YAP、N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail蛋白表达量显著升高(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著降低(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著低于高剂量+抑制剂组(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可能通过活化Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞EMT的发生。

Hippo-YAP信号通路对人羊膜上皮细胞成骨分化的影响

背景:人羊膜上皮细胞作为新型种子细胞,在骨损伤修复中具有重要作用。目的:探讨与成骨细胞共培养环境下人羊膜上皮细胞成骨分化的潜在调节机制。方法:使用酶消化法提取人羊膜上皮细胞,实时细胞分析系统xCELLigence RTCA S16检测原代细胞增殖情况,使用transwell将人羊膜上皮细胞与成骨细胞共培养,并加入siRNA-YAP1干预,通过检测人羊膜上皮细胞的成骨相关蛋白评估成骨分化情况。结果与结论:(1)原代人羊膜上皮细胞在12 h内可完成贴壁,并在24-48 h进入指数增长期;(2)共培养过程中,人羊膜上皮细胞表现出成骨分化趋势,Hippo信号通路中YAP1蛋白表达增高;(3)在共培养过程中加入siRNA-YAP1后,Hippo信号通路中YAP1蛋白表达降低,同时人羊膜上皮细胞成骨分化能力减弱。

基于Hippo-YAP信号通路探讨桃红四物汤对BMSCs增殖与成骨分化的影响

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),运用桃红四物汤含药血清和Hippo信号通路抑制剂Verteporfin干预,进而观察BMSCs增殖和成骨分化的能力。方法采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,选用10倍等效剂量的桃红四物汤灌服大鼠制备桃红四物汤含药血清,采取0.9%氯化钠注射液灌胃大鼠制取空白组对照血清,将BMSCs分为3组:空白血清组、桃红四物汤含药血清组(THSWT组)以及桃红四物汤含药血清+Verteporfin组(THSWT+V组),使用CCK-8分析法分析4个时相点0、1、3、7 d细胞增殖活力;干预7 d后,进行ALP测定,观察骨向分化程度;处理21 d后,进行茜素红染色,观察钙积累,Western blotting法检测各组细胞成骨关键因子及Hippo通路关键蛋白表达。结果THSWT组BMSCs细胞增殖能力明显高于THSWT+V组及空白血清组(P<0.01);THSWT组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于THSWT+V组及空白血清组;THSWT组中YAP蛋白表达低于空白血清组、TAZ蛋白表达高于空白血清组(P<0.05);THSWT组ALP、OCN、RUNX2、Osterix等成骨关键因子蛋白表达明显高于THSWT+V组及空白血清组(P<0.05)。结论桃红四物汤可促进BMSCs的增殖和成骨分化能力,从而促进骨折愈合,其作用机制为调节Hippo-YAP信号通路,激活其下游关键节点YAP蛋白及TAZ蛋白,诱导BMSCs成骨分化基因转录。

Hippo-YAP信号通路在IFN-γ促神经干细胞增殖中的作用及其机制

目的研究γ-干扰素(IFN-γ)对神经干细胞增殖及自我更新能力的影响;Hippo-YAP信号通路在IFN-γ促神经干细胞增殖以及自我更新能力的作用机制。方法从14~16 d胎鼠海马部提取分离神经干细胞进行体外培养,细胞免疫荧光Nestin染色确定神经干细胞分离成功。分为IFN-γ处理组和PBS对照组,计算神经球体数量及面积。CCK-8法测定神经干细胞增殖能力。实时荧光定量测定Hippo-YAP信号通路主要组分YAP的mRNA水平。蛋白免疫印迹法测定Hippo信号通路主要组分YAP蛋白、Cyclin D1蛋白水平。结果形态学研究显示IFN-γ处理组的神经干球数量及面积与PBS对照组相比增加,差异均有统计学意义(P<0.01);CCK-8试剂盒检测细胞活力显示IFN-γ处理好细胞活力比PBS组提高,差异有统计学意义(P<0.01)。实时荧光定量结果显示IFN-γ处理YAP的mRNA数量增加,差异有统计学意义(P<0.01);蛋白免疫印迹结果显示IFN-γ处理组的YAP蛋白、Cyclin D1蛋白增加,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Hippo-YAP通路在IFN-γ促进神经干细胞的增殖及自我更新能力中发挥重要作用,主要机制是YAP蛋白激活Cyclin D1蛋白,促进神经干细胞的增殖及提高自我更新能力。

Hippo-YAP信号通路调控细胞衰老的分子机制

作为Hippo信号通路的主要效应蛋白,Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)主要通过与转录增强相关结构域(transcriptional enhanced associate domain,TEAD)/非TEAD转录因子结合的方式调控靶基因转录[1]。YAP蛋白的结构主要包括WW结构域(介导非TEAD转录因子的结合)、TEAD结合域(介导TEAD转录因子的结合)、C端转录激活域(介导转录激活)、C末端PDZ结合域(核定位所需)、卷曲螺旋域(介导蛋白质-蛋白质的相互作用)、N末端富含脯氨酸基序(抑制转录活性)和SH3结合基序(介导含SH3结构域蛋白的相互作用)[2]。YAP广泛参与细胞增殖与细胞分化的调控,是不同器官生长与再生所必需的转录共激活因子,在器官再生与再生医学领域被广泛研究[3]。同时YAP通过调控细胞增殖以及凋亡,影响肿瘤的发生、发展与转移,是目前肿瘤相关研究的重点[4]。另外,近年来YAP调控细胞衰老的研究也逐渐增多[5-7]。

Hippo-YAP信号通路与心肌梗死后心力衰竭研究进展

心力衰竭(HF)是各种心脏结构或功能性疾病导致心功能不全的一-组综合征,具有高发病率和高死亡率,目前仍是心血管疾病死亡的重要原因,其中冠心病是心力衰竭的首位病因,约50%继发于心肌梗死,急性心肌梗死后由于供血供氧缺乏,部分心肌凋亡坏死,心肌细胞代偿性肥大、纤维化,引起心室重构,使心肌收缩力明显减弱导致心排血量急剧降低,诱发急性心力衰竭甚至心源性休克。

组胺通过Hippo-YAP信号通路影响鼻咽癌细胞增殖与侵袭的机制研究

目的:探讨组胺对鼻咽癌细胞CNE1增殖、侵袭及线粒体膜电位的影响,及其对Hippo-YAP信号的调控作用。方法:细胞实验分为正常组、组胺低、中、高剂量组。正常组细胞不添加任何药物常规培养;组胺低、中、高剂量组细胞依次添加100、200、400μmol/L的组胺处理后进行培养。CCK-8法检测各组CNE1细胞的增殖率,Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力,JC-1染色检测各组CNE1细胞的线粒体膜电位,皮下移植瘤裸鼠模型检测各组CNE1细胞的体内生长能力,特异性PCR检测各组CNE1细胞中大肿瘤抑制基因1(LATS1)的甲基化水平,Western blot检测各组CNE1细胞YAP1、p-YAP1、LATS1表达水平。结果:与正常组相比,组胺低、中、高剂量组细胞的增殖率、侵袭细胞数、红色荧光与绿色荧光比值(线粒体膜电位)、肿瘤瘤体质量、LATS1的甲基化比例、YAP1、p-YAP1表达明显降低(均P<0.05),LATS1表达明显升高(均P<0.05),且具有明显的剂量依赖性(均P<0.05)。结论:组胺能抑制鼻咽癌CNE1细胞的体外增殖与侵袭能力,降低其线粒体膜电位,使肿瘤细胞体内生长明显受限,这可能是通过调控Hippo-YAP信号实现的。

紫草素通过调控Hippo-YAP信号通路对咪喹莫特诱导银屑病小鼠保护作用的研究

目的探讨紫草素通过调控Hippo-YAP信号通路对咪喹莫特诱导的银屑病模型小鼠的影响及作用机制。方法将25只BALB/C雄性小鼠随机分为正常组、模型组、紫草素高浓度组、紫草素中浓度组、紫草素低浓度组,每组5只。背部剃毛3 cm×5 cm,正常组每日定时在小鼠裸露处皮肤均匀涂抹纯凡士林,模型组外涂5%咪喹莫特乳膏,紫草素高、中、低浓度组均在外涂5%咪喹莫特乳膏的同时分别给予80 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d)紫草素混悬液灌胃,均1次/d,连续7 d。观察并记录各组小鼠背部皮损面积和严重程度指数(PASI)评分,取小鼠背部皮肤组织进行HE染色病理观察;ELISA法检测正常组、模型组、紫草素高浓度组小鼠皮损组织中白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,RT-PCR法检测正常组、模型组、紫草素高浓度组小鼠皮损组织中RASSF1A、CXCL1、CXCL2、S100A7、YAP、TAZ mRNA表达水平。结果模型组和紫草素各组PASI评分均明显高于正常组(P均<0.05),紫草素高、中、低浓度组均明显低于模型组(P均<0.05),紫草素高浓度组明显低于中、低浓度组(P均<0.05)。模型组小鼠皮损组织中IL-17、IL-22、TNF-α水平和CXCL1、CXCL2、S100A7、YAP、TAZ mRNA表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),RASSF1A mRNA表达水平均明显低于正常组(P<0.05);紫草素高浓度组小鼠皮损组织中IL-17、IL-22、TNF-α水平和CXCL1、CXCL2、S100A7、YAP、TAZ mRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),RASSF1A mRNA表达水平均明显高于模型组(P均<0.05)。结论紫草素通过升高皮肤基底RASSF1A mRNA的含量,降低Hippo-YAP信号通路上游趋化因子YAP、TAZ的含量,致下游趋化因子和炎症因子降低达到抗银屑病的作用。

Hippo-YAP信号通路调控升主动脉瘤发病机制的研究进展

升主动脉瘤（aortic aneurysm,AA）是指：由于多种原因导致主动脉壁结构破坏、强度减弱,主动脉壁在血流压力下发生瘤样扩张或膨出的一种高危性疾病,最终可因主动脉瘤壁无法承受血流冲击而发生破裂[1]。目前,主动脉瘤的发病机制及病理生理学变化过程尚不完全明确,但研究者一致认为中层血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的变化是胸主动脉瘤发生、发展中的重要环节[1-2]。