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人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达
被引量:
5
1
作者
莫永炎
曹永宽
+2 位作者
刘亚伟
龚小卫
姜勇
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
2003年第2期123-125,144,共4页
目的 获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础 方法 应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14...
目的 获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础 方法 应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14b中。经酶节、序列鉴定,选择正确重组克隆,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA His柱纯化和SDS-PAGE分离蛋门。结果克隆到一个627 bp的AWP1 cDNA片段.重组质粒目的DNA测序正确.纯化出了一个分子量约为38 kD的融合蛋白。结论用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。
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关键词
ECV304细胞
AWP1
his-融合蛋白
原核生物表达
原文传递
题名
人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达
被引量:
5
1
作者
莫永炎
曹永宽
刘亚伟
龚小卫
姜勇
机构
第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室
出处
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
2003年第2期123-125,144,共4页
基金
国家自然科学杰出青年基金项目(No.39925014)
国家自然科学基金重点项目(30030060)
+2 种基金
国家自然科学基金面上项目(No.39800074
No.39870332)
广东省自然科学基金面上项目(No 020016)
文摘
目的 获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础 方法 应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14b中。经酶节、序列鉴定,选择正确重组克隆,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA His柱纯化和SDS-PAGE分离蛋门。结果克隆到一个627 bp的AWP1 cDNA片段.重组质粒目的DNA测序正确.纯化出了一个分子量约为38 kD的融合蛋白。结论用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。
关键词
ECV304细胞
AWP1
his-融合蛋白
原核生物表达
Keywords
ECV304 cells
AWP1
His fusion protein
prokaryotic expression
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达
莫永炎
曹永宽
刘亚伟
龚小卫
姜勇
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
2003
5
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