人血管形成素在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定

RT PCR获取的血管形成素AngiogenincDNA片段 ,克隆入融合表达载体 pRSETB中 ,表达产物为N端融合了His6的融合蛋白 ,以包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 10 %。用 8mol/L脲溶解包涵体 ,利用His6与过渡态金属离子Ni2 +高亲合力结合的性质 ,经Ni2 + NTA亲和树脂一步法纯化 ,获得纯度达 98%以上His6 ANG融合蛋白 ,Western blot结果表明在相应分子量处有一条特异性条带。重组蛋白复性后活性测定表明 ,在体外可促进鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )血管形成 ,并可降解tRNA。