维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的克隆与生物信息学分析及原核表达

为研究维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的可能相关功能，扩增HisJ基因，并通过同源性比较构建HisJ基因的系统进化树，利用相关软件对HisJ基因编码的蛋白进行生物信息学分析，并对HisJ基因进行原核表达以及表达产物的免疫原性进行检测。结果显示，HisJ基因全长774bp，编码247个氨基酸，TH0426株HisJ与维氏气单胞茵属同一分支，具有信号肽、跨膜区，属于膜外蛋白，二级结构主要以α螺旋、无规则卷曲为主。经SDS—PAGE分析发现，重组菌可表达出融合性蛋白，并且以10‰的体积接菌、IPTG终浓度为1．0mmol／L诱导8h表达效果最好。Western—blot分析结果显示,重组HisJ蛋白在大肠杆菌中被成功表达且能被小鼠抗HiSJ蛋白血清识别，表明表达的HisJ蛋白具有一定的免疫原性。为进一步对HisJ蛋白的结构功能及与致病性、耐药性关系的研究奠定了基础。