PRMT1结合并增强HMGCR活性对食管鳞癌细胞增殖能力的影响

目的探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)结合羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)后活性变化及其对食管鳞癌细胞增殖能力的影响。方法以食管鳞癌ECA109细胞为模型,通过免疫共沉淀法观察PRMT1与HMGCR在细胞中的相互结合作用。将ECA109细胞随机分为感染组和对照组,分别以表达特异性针对PRMT1的RNA干扰分子的慢病毒质粒转染48 h,采用Western blot法分别检测PRMT1、HMGCR蛋白及甲基化HMGCR蛋白,分光光度法检测HMGCR酶活性,CCK-8法检测细胞增殖活性。结果细胞裂解后的蛋白共沉淀复合物分别用抗PRMT1、HMGCR抗体捕获后,可检测到HMGCR、PRMT1蛋白条带。感染组和对照组ECA109细胞中PRMT1蛋白相对表达量分别为0.057±0.011和0.239±0.041(P<0.01),HMGCR蛋白相对表达量分别为0.175±0.031和0.184±-0.037(P>0.05)。感染组和对照组ECA109细胞甲基化HMGCR蛋白相对表达量分别为0.028±0.006、0.107±0.016,HMGCR相对活性分别为0.104±0.009、0.277±0.013,P均<0.01。感染组ECA109细胞培养24 h后,细胞增殖的OD_(450)值已低于对照组(P<0.05);培养48 h及72 h后,两组OD_(450)值差距进一步扩大(P均<0.01)。结论 PRMT1可通过结合HMGCR蛋白促进其甲基化途径增强HMGCR蛋白活性,进而促进食管鳞癌细胞的体外增殖能力。

福辛普利联合非诺贝特对DM小鼠视网膜Nrf2及HRD1表达的影响

目的探讨福辛普利联合非诺贝特对糖尿病(DM)小鼠视网膜核因子E2相关因子2 (Nrf2)及甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1 (HRD1)表达的影响。方法选择150只SD雄性小鼠,采用随机数表法分为空白对照组(假造模)、模型对照组(DM模型)、福辛普利给药组(20 mg·kg^-1·d^-1福辛普利干预)、非诺贝特给药组(400 mg·kg^-1·d^-1非诺贝特干预)和联合给药组(20 mg·kg^-1·d^-1福辛普利与400 mg·kg^-1·d^-1非诺贝特联合干预),每组30只。采用裂隙灯检查各组小鼠的晶状体浑浊程度,采用实时荧光定量PCR检测视网膜Nrf2及HRD1 mRNA的表达水平,采用Western blot方法检测视网膜Nrf2及HRD1蛋白表达水平,采用TUNEL染色法检测视网膜组织细胞凋亡TUNEL指数,视网膜丙二醛(MDA)、血管内皮生长因子(VEGF)浓度与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)酶活性采用ELISA法检测。对五组小鼠检测的指标进行比较。结果空白对照组小鼠晶状体无浑浊,其余四组小鼠晶状体均可见不同程度浑浊,五组小鼠晶状体浑浊程度比较差异有统计学意义(P<0.05);五组小鼠视网膜中Nrf2及HRD1 mRNA表达及其蛋白水平比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中,空白对照组表达最高,联合给药组次之,单药给药组再次,模型对照组表达最低;五组小鼠视网膜组织细胞凋亡TUNEL指数比较差异有统计学意义(P<0.05),其中模型对照组最高,随后从高至低依次为福辛普利给药组、非诺贝特给药组、联合给药组和空白对照组;五组小鼠视网膜组织中的MDA、VEGF浓度与GSH-PX、SOD、ROS酶活性比较差异均有统计学意义(P<0.05),GSH-PX、SOD在空白对照组中活性最高,MDA、VEGF浓度、ROS活性最低,联合给药组次之,单药给药组再次,模型对照组最高或最低。结论福辛普利联合非诺贝特可通过有效增加DM小鼠视网膜Nrf2和HRD1的表达水平来降低氧化应激损伤和内质网应激水平,进而延缓DM进程,改善糖尿病小鼠视网膜功能。

HRD1对人乳腺癌细胞增殖迁移的影响及其机制初步研究

目的:研究羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HMG-Co A reductase degradation protein 1,HRD1)对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,初步探讨其潜在机制。方法:通过Western blot和免疫组织化学实验检测HRD1和乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)在乳腺癌组织和相应癌旁组织中的表达。用腺病毒感染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7以过表达HRD1,观察HRD1和LDHB的表达水平,MTT实验和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果:与癌组织相比,HRD1在配对的癌旁组织中高表达,LDHB则呈低表达(P<0.05);过表达HRD1能够显著降低MDA-MB-231和MCF-7的增殖和迁移能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达HRD1可以降低乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能是通过下调LDHB蛋白的表达实现。

人参皂苷Rb1激活HRD1信号通路对动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rb1(GRb1)激活羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HRD1)通路对动脉粥样硬化介导的内皮细胞凋亡的影响。方法将人主动脉内皮细胞(HAECs)分为正常对照组(NC组)、模型组[氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),100 mg/L]、GRb1组(50μmol/L)、GRb1+si-NC组(si-HRD1阴性对照)和GRb1+si-HRD1组,比较各组HAECs的细胞活力、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平、细胞凋亡、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)及HRD1蛋白表达。结果与NC组比较,模型组细胞活力、SOD水平、Bcl-2及HRD1蛋白降低,ROS、MDA水平、细胞凋亡率、Caspase-3及Bax蛋白升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,GRb1组细胞活力、SOD水平、Bcl-2及HRD1显著升高,ROS、MDA水平、细胞凋亡率、Caspase-3及Bax蛋白降低,差异有统计学意义(P<0.05);沉默HRD1逆转了GRb1对ox-LDL诱导的动脉粥样硬化内皮细胞的影响。结论GRb1可能通过激活HRD1通路抑制ox-LDL诱导的动脉粥样硬化内皮细胞凋亡。

辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及白细胞介素-1β表达的影响

目的观察炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)在阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中的表达,探讨辛伐他汀保护阿霉素肾病大鼠肾脏的机制。方法雄性SD大鼠分为正常对照组、阿霉素肾病组(模型组)和阿霉素肾病辛伐他汀治疗组(治疗组),分别灌胃给药11周。免疫组化法观测肾组织中IL-1β的定位表达,半定量RT-PCR技术检测肾组织IL-1β mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测血清和肾组织中IL-1β的水平,光镜观察肾小球硬化的情况。结果模型组肾组织IL-1β的表达明显增强(P<0.01),伴有明显的肾小球硬化及肾功能损害(P<0.01);与模型组比较,治疗组肾组织IL-1β的表达、肾小球硬化及肾功能损害均减轻(分别P<0.05、P<0.01、P<0.05)。结论辛伐他汀可能通过降低肾组织内IL-1β的表达,对肾脏起保护作用。

洛伐他丁对心肌细胞外信号调节激酶信号传导水平及心脏营养素-1表达的影响

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路与甲基戊二酰辅酶A(HGM-CoA)还原酶抑制剂的关系。方法:体外培养的大鼠心肌细胞株H9c2(2-1)经洛伐他丁处理24h和5d,然后以免疫印迹杂交检测p-44ERK1、p-42ERK2和总ERK蛋白水平,同时检测心脏营养素-1蛋白水平的变化。结果:洛伐他丁处理24h后,ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高125%(P=0.041)和89%(P=0.034);处理5d后检测ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高93%(P=0.021)和80%(P=0.046)。培养中的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)经过洛伐他丁处理24h或5d后,作为重要炎性细胞因子的心脏营养素-1水平均显著增高,其中,处理24h后增高79.3%(P=0.004),处理5d后增高34.8%(P=0.014)。选择性抑制ERK之后,洛伐他丁处理导致心脏营养素-1水平的变化显著减弱。结论:洛伐他丁除了具有已知的降脂作用外,亦可能参与心肌细胞炎性反应的调节机制。

辛伐他汀保护糖尿病大鼠肾损害及对肾组织MCP-1表达的影响

目的观察辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏组织的保护作用及其对尿单核细胞趋化蛋白-1(UMCP-1)排泄和肾组织MCP-1mRNA表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常对照(C组,n=8)、糖尿病组(D组,n=8)、辛伐他汀治疗组(S组,n=8)。糖尿病大鼠模型建立一周后,S组以辛伐他汀(20 mg.kg-1.d-1)灌胃,D组和C组灌以相应量的生理盐水。第2,4,8周检测各组大鼠尾外周血糖,第8周时测12小时尿白蛋白排泄率(UAER)、尿视黄醇结合蛋白(URBP)和UMCP-1排泄率,处死大鼠留取肾脏标本用于病理学检查及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。结果①与C组比较,D、S组第2,4,8周血糖及糖化血红蛋白(HbA1c)水平较明显升高,而后两组间差异无统计学意义;②第8周,D,S组UAER及URBP、UMCP-1排泄率和肾脏肥大指数均高于C组(P<0.01),S组上述四项指标较D组明显降低(P<0.01),UMCP-1排泄率与UAER、URBP排泄率及肾脏肥大指数呈正相关;③电镜下S组肾小球病变较D组明显减轻,同C组相比仅有少量病变;④与C组相比,D组大鼠肾脏MCP-1mRNA表达明显上调(P<0.01),S组MCP-1mRNA表达也增加(P<0.05)但明显低于D组(P<0.05)。结论辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏有确切保护作用,其机制可能部分与抑制肾脏MCP-1过度表达有关。

HRD1在肝脏糖异生中的作用

目的观察羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(HRD1)在肝脏糖异生中的作用。方法采用Western blot法检测5只饥饿小鼠、4只高脂饮食小鼠、4只糖尿病小鼠及其分别对应的正常对照小鼠(5、4、4只)肝脏组织磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和HRD1的表达。分别使用毛喉素0、5和20μmol/L处理人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测其PEPCK和HRD1表达。用腺病毒感染HepG2细胞以过表达HRD1,用Western blot检测其PEPCK和真核翻译起始因子2α(eIF2α)的表达。结果与对照组比较,饥饿小鼠肝脏组织中PEPCK和HRD1蛋白表达升高(P<0.05)。与各自对照组比较,高脂饮食及糖尿病小鼠肝脏组织PEPCK蛋白表达升高,而HRD1蛋白表达降低(P<0.05)。随着毛喉素浓度增加,HepG2细胞PEPCK和HRD1蛋白表达增高(P<0.05)。HRD1过表达可降低PEPCK和eIF2α蛋白表达量(P<0.05)。结论肝脏糖异生过程中HRD1高表达,过表达的HRD1通过抑制eIF2α负反馈抑制肝脏糖异生。

姜黄素对人肝L-02细胞胆固醇合成及转运蛋白表达的影响

目的以正常人肝L-02细胞建立的脂肪变性肝细胞模型为研究对象,观察姜黄素对肝细胞胆固醇合成及转运的影响。方法用MTT法观察姜黄素对脂肪变性人肝L-02细胞模型增殖的影响,用油红O染色定性观察细胞内脂滴形成情况;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量检测胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶及转运蛋白Caveolin-1在mRNA水平的表达;Western-blotting法检测细胞caveolin-1的表达;高效液相色谱法(HPLC)定量检测细胞内外胆固醇各组分含量。结果姜黄素呈浓度和时间依赖性减少细胞内脂滴数量,降低脂变肝细胞内总胆固醇(TC)、胆固醇酯(CE)含量,增加培养基中游离胆固醇(FC)含量,同时减少HMG-CoA还原酶的表达,增加Caveolin-1 mRNA的表达,并且呈浓度时间依赖性增加caveolin-1的蛋白表达。结论姜黄素降低胆固醇作用可能与Caveolin-1的上调、HMG-CoA还原酶的下调有关。

珊瑚状猴头菌多糖降血胆固醇作用及机制

目的探讨珊瑚状猴头菌多糖对高胆固醇大鼠血脂的影响机制。方法 SD大鼠随机分为4组:正常对照组(NC组)、高胆固醇模型组(HCM组)、试验Ⅰ组[EⅠ组,100 mg/(kg bw d)]及试验Ⅱ组[EⅡ组,200 mg/(kg bw d)],每组8只。35 d后,测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、以及低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,同时计算血浆致动脉硬化指数(ΑIP);收集粪便,检测其中胆汁酸的量;通过Real-time RT-PCR法测定肝脏HMG-CoΑ还原酶、LDL受体(LDL-R)、胆汁酸合成限速酶(CYP7α-1)m RNA表达量。结果珊瑚状猴头菌多糖可显著降低模型组大鼠的血TC和LDL-C,增加HDL-C,使动脉硬化发生的概率减小,增加粪便胆汁酸排泄量(P<0.01或P<0.05),控制体重增长(P<0.01),降低HMG-CoΑ还原酶m RNΑ表达量,增加LDL-R、CYP7α-1 m RNΑ表达量(P<0.01或P<0.05)。结论珊瑚状猴头菌多糖能有效调节高胆固醇大鼠的血脂水平。