芍药苷对高糖诱导足细胞铁死亡及Nrf2/HMOX-1通路的影响

目的探究芍药苷对高糖诱导足细胞铁死亡及Nrf2/HMOX-1通路的影响。方法体外培养小鼠肾足细胞MPC-5,将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+芍药苷低剂量组、高糖+芍药苷高剂量组、高糖+ML385组、高糖+ZNPP组。CCK-8检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测Fe^(2+)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)水平;RT-PCR法检测核因子E_(2),相关因子2(Nrf2)mRNA、血红素加氧酶(HMOX-1)mRNA;western blot检测Nrf2、HMOX-1、溶质载体家族T成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组MPC-5细胞OD_(450)值(24、48 h)、SOD、GSH水平、SLC7A11、GPX4蛋白水平显著降低,Fe^(2+)、MDA、ROS水平、凋亡率、Nrf2 mRNA、HMOX-1 mRNA表达水平、Nrf2、HMOX-1蛋白水平显著升高(P<0.05);与高糖组相比,高糖+芍药苷低剂量组、高糖+芍药苷高剂量组、高糖+ML385组和高糖+ZNPP组MPC-5细胞OD_(450)值(24、48 h)、SOD、GSH水平、SLC7A11、GPX4蛋白水平显著升高,Fe^(2+)、MDA、ROS水平、凋亡率、Nrf2 mRNA、HMOX-1 mRNA表达、Nrf2、HMOX-1蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖+芍药苷高剂量组比较,高糖+ML385组MPC-5细胞各检测指标差异均无统计学意义(P>0.05),高糖+ZNPP组Nrf2蛋白表达显著升高(P<0.05),其他检查指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论芍药苷通过抑制Nrf2/HMOX-1通路可抑制高糖诱导的足细胞铁死亡。

创伤性深静脉血栓形成与血液中Hmox-1基因的表达

背景:目前深静脉血栓的诊断主要依赖于影像学和实验室检查,其最致命的不足是血栓已经形成方能明确诊断。因此有必要采用先进的分子技术对其进行研究,探索其发生发展的内在规律。目的:观察Hmox-1在大鼠创伤性深静脉血栓形成过程中的变化,探讨其作为预测诊断深静脉血栓分子标记物的可行性。方法:采用钳夹大鼠双侧股静脉和双后肢人字石膏固定的方法建立创伤性深静脉血栓形成模型。依据造模时间和血栓形成状态,将100只实验大鼠随机分为5组:正常对照组、创伤即刻组、血栓形成前期组、血栓形成高峰期血栓形成组、血栓形成高峰期血栓不形成组。Realtime-PCR检测血液中Hmox-1基因表达,并切取双侧股静脉血管进行组织学观察血栓形成程度。结果与结论:建立大鼠创伤性深静脉血栓形成模型后25h,血栓形成率58%(38/65);血栓形成前期组、血栓形成高峰期血栓形成组Hmox-1表达高于正常对照组(P<0.05),而血栓形成高峰期血栓不形成组与正常对照组比较差异无显著性意义。Hmox-1在血液中的表达变化趋势与血栓形成生物学过程相符,有可能作为预测大鼠深静脉血栓形成的标志物。

基于Nrf2/HMOX-1铁死亡信号通路探讨番泻叶苷A治疗糖尿病肾病的机制

目的:探究番泻叶苷A对糖尿病肾病铁死亡的作用机制。方法:6周龄雄性C57BL/6J小鼠分为正常对照组和造模组。造模成功小鼠分为番泻叶苷A(SA)组和模型组,各10只。Western Blot法检测Nrf2、HMOX-1、GPX4的蛋白变化情况;GSH和MDA试剂盒检测氧化应激水平;DAB染色法检测PTGS2阳性细胞表达。结果:模型组Nrf2、HMOX-1蛋白表达量明显升高,GPX4表达显著降低;PTGS2阳性细胞表达明显增加;MDA水平显著增加、GSH活性明显降低。番泻叶苷A组明显改善氧化应激反应,下调Nrf2、HMOX-1、PTGS2的表达,增加GPX4的表达。结论:糖尿病肾病存在铁死亡,番泻叶苷A可以抑制铁死亡水平,其机制可能与抑制Nrf2/HMOX-1信号通路有关。

全真一气汤通过HMOX-1调节COPD大鼠肺组织氧化/抗氧化平衡

目的探讨全真一气汤影响COPD大鼠肺组织氧化/抗氧化失衡的机制。方法建立COPD大鼠模型,以全真一气汤干预后,实时荧光定量PCR检测肺组织HMOX-1表达水平的变化,Western blot检测肺组织中HMOX-1蛋白水平的变化。结果中药组较模型组HMOX-1mRNA表达增强,其表达丰度分别为模型组的3.33;中药组较模型组HMOX-1蛋白表达上调。结论提示COPD大鼠肺组织HMOX-1酶表达下降,这可能是COPD大鼠肺组织氧化/抗氧化失衡的重要因素,全真一气汤能通过增强HMOX-1的表达及活化,对COPD大鼠肺组织氧化/抗氧化的失衡起到一定调衡作用。

无量山乌骨鸡HMOX 1基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

【目的】扩增无量山乌骨鸡血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HMOX1)基因CDS区并进行生物信息学分析,检测其组织表达特征,为后续该基因的功能研究奠定基础。【方法】以无量山乌骨鸡皮下脂肪组织cDNA为模板,PCR扩增HMOX 1基因,连接PESI-T载体后进行测序分析,使用DNAMAN软件对所获序列进行翻译并与原鸡进行序列比对;使用BLAST、Mega 7.0、SOPMA、ProtParam和ExPASy等在线软件进行相似性比对、系统进化树构建、编码蛋白的理化性质及蛋白结构预测;利用STRING软件预测HMOX1互作蛋白;通过实时荧光定量PCR检测HMOX 1基因在无量山乌骨鸡不同组织中的表达水平。【结果】无量山乌骨鸡HMOX 1基因CDS区长为891 bp,编码296个氨基酸,与原鸡HMOX 1基因(登录号:NM_205344.1)核苷酸序列相比存在3处突变,其中2处为同义突变,第217 bp处G>C为错义突变,导致第73位的天冬氨酸突变为甘氨酸。HMOX 1基因与原鸡和日本鹌鹑的氨基酸序列相似性较高(99.6%和95.0%),与马的相似性最低(60.2%)。系统进化树分析发现,无量山乌骨鸡与原鸡和日本鹌鹑亲缘关系较近,与非禽类的亲缘关系较远。HMOX1蛋白具有不稳定性和亲水性,主要定位在细胞质中,不存在信号肽裂解位点,属于非分泌蛋白;存在1个跨膜螺旋结构,共有47个磷酸化修饰位点;二级结构以α-螺旋为主。HMOX1蛋白与HMOX2、BLVRA、HEPH、CP、COX10等10个蛋白可能存在相互作用。组织表达分析发现,HMOX 1基因在无量山乌骨鸡各组织中均有表达,其中在肝脏中表达量最高,在心脏中表达量最低。【结论】无量山乌骨鸡HMOX 1基因CDS区长为891 bp,编码296个氨基酸;预测其与10个蛋白存在相互作用;HMOX 1基因在无量山乌骨鸡肝脏组织中高表达。研究结果为进一步探究HMOX 1基因在鸡脂代谢中的作用及功能提供了理论依据。

补气活血通络方对大鼠创伤性深静脉血栓形成及血红素加氧酶-1基因表达的影响

目的:观察补气活血通络方对大鼠创伤性深静脉血栓形成及血红素加氧酶-1(Hmox-1)基因表达的影响。方法:采用钳夹大鼠单侧股静脉并予后肢髋人字石膏固定法建立创伤性深静脉血栓模型。将36只SD大鼠随机分为造模组、低浓度中药组、高浓度中药组、阿司匹林组,造模24h后分别使用生理盐水、补气活血通络方或阿司匹林肠溶片对大鼠灌服3d后,检测股静脉血栓干、湿重。运用苏木精-伊红(HE)染色观察股静脉血管形态学改变及血栓情况,实时PCR检测Hmox-1基因的表达情况。结果:造模成功后肉眼可见股静脉血栓形成,HE染色见股静脉管腔内血栓形成。与造模组相比,高浓度中药组和阿司匹林组股静脉中血栓质量明显降低(P<0.05),HE染色镜下也呈现相同趋势;而与造模组相比,低浓度和高浓度中药组中Hmox-1基因呈现浓度依赖性表达增高(P<0.05),但阿司匹林组中Hmox-1基因表达低于两个中药组。结论:补气活血通络方可能通过促进Hmox-1基因表达来降低大鼠创伤性深静脉血栓形成。

过表达血红素加氧酶-1、金属硫蛋白2A、泛素蛋白B、核糖体蛋白S27a对HepG2细胞增殖和侵袭力的影响

目的研究过表达目标蛋白(HMOX-1、MT2A、UBB、RPS27a)对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭力的影响。方法用目标蛋白的过表达质粒转染HepG2细胞株,用空载体转染HepG2作为对照组。应用MTT法测定细胞体外增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的体外侵袭力。结果 MTT法结果提示过表达目标蛋白后,HepG2细胞株增殖能力较对照组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果表明,过表达HMOX1、RPS27a后,HepG2细胞侵袭能力较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);过表达MT2A、UBB后,HepG2细胞侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达目标蛋白可增强HepG2细胞的增殖和侵袭能力。